O desfecho primário em ensaios clínicos para doenças neuromusculares é geralmente melhora da função muscular. Portanto, avaliar o efeito de potenciais compostos terapêuticos sobre o desempenho muscular pré clinicamente em modelos do rato é de grande importância. Nós aqui descrever vários testes funcionais para resolver esta questão.
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Artigo de método
Avaliação do Desempenho Funcional no
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Resumo
Resumo
Distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma muscular grave e progressiva desperdiçando doença para a qual não há cura disponível. No entanto, vários compostos farmacêuticos potenciais e abordagens de terapia genética têm progredido em ensaios clínicos. Com a melhora na função muscular de ser o ponto final mais importante nestes ensaios, muita ênfase foi colocada sobre a configuração confiável, reprodutível e fácil de realizar testes funcionais para pré clinicamente avaliar a função muscular, força, condição e coordenação no modelo de camundongo mdx para DMD. Ambos os testes invasivos e não invasivos estão disponíveis. Testes que não agravar a doença pode ser usada para determinar a história natural da doença e os efeitos de intervenções terapêuticas (teste por exemplo. Aderência membro anterior força, dois testes de suspensão diferentes, utilizando um fio ou de uma grade e rotarod execução). Alternativamente, forçado esteira rolante pode ser usado para melhorar a progressão da doença e / ou avaliarefeitos protetores de intervenções terapêuticas na patologia da doença. Nós aqui descrever como executar esses testes funcionais mais usados de uma maneira confiável e reprodutível. Usando estes protocolos baseados em procedimentos operacionais padrão permite a comparação de dados entre diferentes laboratórios.
Introdução
Distrofia muscular de Duchenne (DMD) é a doença neuromuscular mais comum que afeta 1:5.000 meninos recém-nascidos. Esta doença debilitante muscular grave e progressiva, é causada por mutações no gene DMD que interrompem a estrutura de leitura aberta e impedir a síntese de proteína distrofina funcional. As fibras musculares falta de distrofina são vulneráveis a exercer dano induzido. Após esgotamento da capacidade regenerativa do músculo, e devido à inflamação crônica do músculo danificado, as fibras são substituídas por tecido conjuntivo e gordura, posteriormente, levando a uma perda de função. Geralmente, os pacientes com DMD perder deambulação dos membro....
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Protocolo
As experiências descritas aqui foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal (DEC), do Centro Médico da Universidade de Leiden (LUMC). Ratos foram criados pelo biotério do LUMC e mantidos em gaiolas ventiladas individualmente com 12 ciclos escuros luz hr. Eles tiveram acesso ad libitum à água e ração padrão.
Ao realizar qualquer um dos testes funcionais descritas a seguir, as condições experimentais devem ser rigorosamente controlada para reduzir a variação. De preferência, idade e sexo camundongos correspondência deve ser usado, como o desempenho varia entre idade e sexos. Ratos que pertencem à mesma ninhada deve ser ao acaso ao l....
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Resultados
A força de preensão membro anterior de tipo selvagem e camundongos mdx aumenta entre a idade de 4-12 semanas e reduz novamente em ratos mais velhos. Deficiências em vigor já pode ser observado em jovens camundongos mdx. Os dados representativos de 9 semanas de idade, os ratos fêmeas são mostrados nas Figuras 1A e 1 B. Embora a fadiga não difere entre as cepas ainda nesta idade, camundongos mdx são mais fracos do que os camundongos de tipo selvagem. Não temos d.......
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Discussão
Os testes funcionais aqui apresentados são reprodutíveis, de fácil execução e aplicável a do tipo selvagem e camundongos distróficos, independentemente da sua idade. Os testes fornecem ferramentas úteis para pré clinicamente avaliar a função muscular, força, condição e coordenação. Ao testar os efeitos de um composto sobre a história natural da doença, os exames não invasivos descritos aqui (força de preensão dos membros anteriores, ambos os testes de suspensão e teste rotarod) pode ser bem combinados em um regime de te.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer a Margriet Hulsker por sua assistência fotográfico e ajudar na obtenção de imagens de ratos e os revisores por seus comentários muito construtivos. Este trabalho foi apoiado por ZonMw, TREAT-NMD (número do contrato LSHM-CT-2006-036825) eo Projeto Pai Duchenne.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Medidor de força de preensão do mouse | Chatillon DFE (revendido pela Columbus Instruments) | # 80529 | |
| Dispositivo de 2 membros de fio pendurado | Cabide de pano ou dispositivo | ||
| Dispositivo de 4 membros de fio pendurado | Tampa de gaiola de rato ou dispositivo | ||
| Rotarod | Ugo Basil | # 47600 | |
| Esteira para camundongos Exer 3/6 | Columbus Instruments | # 1055SRM |
Referências
- Blake, D. J., Weir, A., Newey, S. E., Davies, K. E. Function and genetics of dystrophin and dystrophin-related proteins in muscle. Physiol. Rev. 82, 291-329 (2002).
- Hoffman, E. P., Brown, R. H., Kunkel, L. M. Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystroph....
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Reimpressões e permissões
