Abstract
생체 내에서 생물 의학 연구는 임상 발전에 시험관 연구 결과에 번역 중요한 것입니다. 제한된 자원을 가진 작은 교육 기관은 사실상 불가능 구축 및 연구를위한 일반적인 설치류 시설을 유지하기 위해 찾을 수 있습니다. Zebrafish의 연구는 약리학, 생리학, 개발 및 유전 연구에서 생체 연구를위한 중요한 대안이 될 입증되었습니다. 이 문서는 기능 제브라 피쉬 설비가 간단하고 저렴한 방법으로 구축 할 수 있다는 것을 보여줍니다. 우리는 설비가 최소한의 도구와 전문 지식에 대한 하나의 작업 일에 내장 될 수 있음을 보여줍니다. 본 연구에서 구축 한 27 1.8 L 수조 제브라 피쉬 시설의 비용은 약 1,500달러했다. 우리는 3 개월의 초기 작업 (150) 물고기 식민지의 유지 보수는 1,000 달러 것으로 추정된다. 연구는 제안을 위해 도입 된이 프로젝트 참여 학생들은 제브라 피쉬의 aquaculturing합니다.
Introduction
생체 내 모델은 시스템 및 유기체 수준에서 번역 할 시험관 연구에서 수 있기 때문에 종합적인 생물 의학 연구 수행에 필수적이다. 예를 들어, 작은 포유류, 설치류, 즉, 함께 연구 약물의 개발 및 사용 가능한 약물의 개선에 필요한 입증되었다. 그러나, 복잡성 (재정적 물류는)이 사실상 불가능 구축하고 실험이 작은 연구 교육 기관에서 제안에 대한 설치류 시설을 유지 보수 할 수 있도록 다음과 같은 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, 생체 내 연구는 덜 정교한 물류 필요한 다른 동물 종을 사용하여 수행 될 수있다. 제브라 피쉬 (다니오 레 리오 (rerio))을 성공적으로 유전학, 개발, 병태 생리 및 약리학 1,2,10,11,12을 연구하는 생체 내 모델로 사용되어왔다. 실험에 대한 제브라 피쉬를 수용하는 데 필요한 시설은 R에 비해 상대적으로 간단하고 훨씬 적은 비용이odent의 시설과 서비스를 제공합니다. Kim 등. (3)는 최근 상세히 부품 및 노동 비용을 모두 포함하는 약 $ 1,500에 대한 구축 할 수있다 (80) 탱크 제브라 피쉬의 주택 시스템을 설명했다. 이것은 상용 공급 업체의 수에 상관없이 기성품, 80 탱크 시스템을 구입해야 할 것이라고 거의 $ 8,500 극명한 대조를 이룬다. 그러나, 김 등의 알에 의해 주어진 설명. 물고기 연구의 초보자 따라하기 복잡하고 어려울 수 있습니다. 우리는 제브라 피쉬 설비가 1,500 달러 투자에 대한 단순화 된 방식으로 구성 할 수 있다고 생각합니다.
작은 교육 기관에서 생체 시설의 설립은 자신의 능력을 더 강력하고 철저한 연구를 생산하는와 추가 도구를 제공합니다. 생체 내 결과에서 지원하는 체외 데이터 일반적으로 체외 방식 만 사용하여 얻은 데이터보다 더 포괄적 인 생물 의학 연구를 생성합니다. 이 때문에,생체 내 연구 시설의 구현은 크게 전반적인 연구 노력에 기관의 성공을 향상시킬 것입니다 (외부 자금 조달 등의 연구, 출판, 통신, 추구 학생 노출을.).
이 연구에서 설명 된 것과 같은 Zebrafish의 시설의 건설은 금융 번이 수축하는 동안 (생체 내 연구 시설없이 또는 기관) 제한된 시설과 연구 교육 기관에 이상적입니다.
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Protocol
참고 :이 프로토콜은 장로교 대학의 IACUC의 지침을 따르십시오.
표 1에 획득 1. 재료.
2. 제조업체의 지침에 따라 5 선반 크롬을 조립합니다. 이 시설을 수용하는 데 사용됩니다.
3. 물 용기와 여과 시스템 (도 1a 및도 2)을 구축.
- 가이드로 그림 1A를 사용하여, 최종 설치 위치와 크기를 결정하기 위해 18 갤런 물통, 펌프, 필터 및 UV 램프의 레이아웃.
- 부품이 배치되면, 측정 및 조립에 필요한 길이로 ¾ "PVC 파이프를 잘라. 특정 공간 요구 사항 및 제한 사항에 따라 모든 파이프의 길이가 다릅니다.
- PVC 프라이머와 시멘트를 사용하여 이전 배치로 파이프 및 피팅을 조립, 아래 (3.3.2과 3.3.3)를 참조하십시오.
- 모래 사포 파이프의 절단면들은 터치에 매끄러운까지D 이물질이 없습니다.
- 프라임 파이프의 외부에서 프라이머 PVC 포함 면봉 구입 PVC 프라이머 피팅의 내부.
- 포함 면봉을 사용하여 파이프의 외부로 PVC 시멘트를 적용하여 함께 파이프 피팅 시멘트. PVC 점착을 필요로하는 모든 단계를 반복합니다.
- 선반 건설의 한면에 18 갤런 양동이를 놓습니다.
- 리저버 탱크의 측면에 격벽 커넥터를 설치.
- 격벽에 ¾ "PVC 파이프를 연결합니다.
- ¾ "¾을 사용하여 펌프 흡입구에 관"의 다른 쪽 끝을 연결 제조사 스레드.
- 두 개의 90도 팔꿈치 및 ¾ "PVC 파이프를 사용하여 펌프에 필터를 연결합니다.
- 물에서 염소 및 화학 수준 이물질을 필터링하고 감소시키기 위해 하나의 활성탄 필터 뒤에 하나의 종이 필터를 사용한다.
- 필터 accordi에 UV 램프를 연결제조업체의 지침을 ng를.
- 와이어 타이를 사용 랙 제 선반의 상부 측에 펌프 및 필터 시스템을 첨부. 선택된 선반 / 랙의 크기 및 레이아웃에 따라 조립 및 첨부 파일의 순서를 다릅니다.
- 펌프와 필터 시스템 조립 및 선반에 부착하면 물이 저수지에 물 갤런 당 1 bioball를 추가합니다.
4. 주요 공급 라인 (그림 1B 및 2)를 구축합니다.
- 측정하고 주요 공급 UV 램프를 연결하는 PVC 파이프 "¾의 조각을 잘라
- UV 필터에서 오는 PVC 배기 "¾에 티를 연결하여 주요 공급 라인을 시작합니다 PVC 티"¾을 사용합니다. .
- 시스템의 유지 보수 및 세척을위한 드레인로 사용하기 위해 PVC 티의 바닥에 온 - 오프 밸브를 추가합니다.
- PVC를 "측정 ¾ 절단함으로써 PVC 티"¾의 상단에서 메인 공급선 시작원하는 길이로 파이프 랙 선반들 각각에 대한 공급 파이프를 제공한다.
- 설치 ¾ "랙의 각 선반을 입력합니다 수평 라인 PVC 티를.
- 선택적으로 (그리고 제안)을 추가 ¾ "온 - 오프 밸브 각 선반 공급선 각 선반의 단리 및 시스템의 모듈 설계를 허용하도록.
- 상단 선반에 줄을 감압로 ¾ "PVC 파이프를 사용합니다. 이 라인은 선반의 후면에서 실행되는 경우, 저장이 선반을 사용합니다. 주 배기 라인 ¾와 (그림 1B) "온 - 오프 밸브 라인을 감압을 종료합니다.
- 위의 단계는 프라임 완료하고 저장 및 여과 시스템을 구성 할 때 이전에 수행으로 함께 PVC 파이프 시멘트되고 나면.
5. 주 배기 라인 (그림 1C 2)를 구축합니다.
- 랙 (F)의 다른쪽에 메인 배기 라인의 수직 길이를 실행주요 공급 라인을 ROM. 각 선반에서 물고기 탱크의 상단과 드레인 라인에서 주요 공급 라인을 수신 할이 수직 라인 2 "PVC 파이프를 사용합니다.
- "수직 주 배기 라인 PVC 파이프와 2 사용"2 조각을 잘라 각각의 선반에서 물고기 탱크 드레인 라인을받을 PVC 티를. 스폰지 필터를 통해 재활용 된 물을 배출하기 위해 저장 탱크의 주요 배기 라인을 종료합니다.
- 2 "PVC 파이프 조각의 전체 길이를 열어 1 인치를 잘라 PVC는 물고기 탱크에서 수평 드레인 라인 티셔츠와 수직 주 배기 라인에 연결합니다.
- PVC 캡 2 "2 수평 드레인 라인을"모자.
- 프라임 필요한 피팅 (커넥터 또는 니플 팔꿈치)를 사용하여 시멘트 조각.
6. 물고기 탱크 (그림 3)를 구축합니다.
- 드릴, 구멍 톱 위쪽 가장자리 아래의 "물고기 탱크 (1)의 뒤쪽에 구멍"1 1/8를 잘라.
- 부착하고 90도 3/4를 조 '물고기 탱크 배기 파이프를 만들기 위해 남성 어댑터에 PVC 팔꿈치를 스레드. 배기계 거치지 지브라 피쉬 않도록 유지 너트를 나사 결합하기 전에 미세한 메쉬의 조각을 추가한다.
- 탱크 뒤에 배수 라인의 열린 공간으로의 배기 파이프 결말 물고기 탱크를 배치
7. 물 시스템 시작
- 이러한 저장조에 사용한 것과 여러 용기에있어서, 시스템 내에 포함 된 물이 3 배 양을 측정한다. 이 물이 48 시간 동안 조절 실온에 서 보자.
- 시스템에 물을 추가하고 3 일의 최소 순환 할 수 있습니다.
- 오염물 그쪽의 시스템을 제거하기 위하여 순환 초기 삼일 걸쳐 격렬 시스템에서 물을 변경t은 파이프 내에 상주.
- 스타터 제브라 피쉬를 추가하고 질소 순환이 설정 얻을 수 있습니다. 일관된 7로 pH를 정상화 1.8 L 당 일곱 제브라 피쉬를 유지하고 Linbo 4 McNabb (6)에 의해 제안 주말 동안 하루에 한 번 주 일 동안 하루에 두 번을 공급합니다.
- 질산 모니터 (<75 ㎎ / L), 아질산염 (<10 ㎎ / L), 암모늄 물고기를 추가 한 후 첫 주 동안 매일 (0 ㎎ / L), 두 번 매주 한 번 원하는 수준은 일반 물 변화와 유지되었다 .
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Representative Results
펌프 및 Flters 시스템 구축
랙 조립 및 첫 번째 단계를 설정되면 펌프와 필터 시스템을 구축하는 것입니다. 필터 시스템에 연결되어 펌프 손쉽게 필터 유지 보수 및 교체 할 제 선반의 하부 레벨 위에 위치된다. 유사하게, UV 램프 필터 PVC 파이프를 연결하고 필요한 (도 4a)와 같은 UV 램프를 쉽게 교체 할 수 있도록 플라스틱 와이어 타이 제자리에 유지된다. 즉시 종이 필터, 활성탄 필터, 및 UV 램프 PVC 파이프를 통해 설치되는 펌프를 다음. Bioballs 질산염 암모니아 독성 폐기물 변환 박테리아의 성장을위한 표면을 제공하기 위해 탱크에 첨가된다. 시스템의 물 갤런 당 하나의 bioball은 세균의 성장을 허용 할 수있는 충분한 지역입니다. 오버플 경우 bioballs가 저장 부에 유지되며 contamina의 기회 있도록 저수지의 플라스틱 뚜껑을 장착 할 수있다기는 최소화된다. 오버 플로우 이벤트가 매우 어렵다하더라도, 배출 시스템 (저장조의 상부에 드레인 배관을 추가) 시스템으로 이루어질 수 쉽게 추가이다.
메인 공급 라인의 건설
두 번째 단계는 제브라 피쉬 탱크 (도 4b)를 포함 할 때마다 구획을 공급한다 메인 급수관을 조립하는 것이다. 이 라인은 PVC 파이프의 조각 UV 램프에 접속된다. 이 라인은 PVC 티를 통해 랙에 수직 및 횡 방향으로 실행됩니다. 티의 하단부는 전체 시스템에 대한 배수 밸브로서 기능한다 PVC 파이프의 부분을 연결하는 데 사용된다.
네 구획에 수평으로 실행 탱크를 공급 메인 라인 : 다섯 번째 선반의 두 번째 선반 위에, 세 번째 선반 위에, 세 번째 선반의 상단과 하단. 두 번째, 세 번째 및 네 번째 선반 라인의 상단 물고기 탱크에 물을 공급하기 때문에 그들에 실행 midlin선반의 전자. 이 라인의 각 개별 구획의 제어를 가능하게 개인의 온 - 오프 밸브를 가지고있다.
9 포트 관개 매니 폴드는 수평 라인의 단부에 부착되어 이러한 관개는가요 성 ¼ "호스 (도 4b)를 통해 물고기 탱크에 물을 공급한다. 관개 매니 폴드의 모든 포트는 오프에 내장 밸브가 있습니다. 또한, 온 - 오프 밸브가 쉽게 물 흐름 제어, 수조 입구 근처, 각 포트에 부착 된 튜브의 단부에 배치된다. 튜브는 뚜껑에 뚫린 구멍에 의해 탱크에 삽입됩니다. 이 단단히 탱크에 삽입 된 튜브를 유지하는 데 도움이됩니다.
다섯째 선반 위에서 실행 라인 압력 완화제로서 사용하고이를 개별 온 - 오프 밸브에 의해 제어된다. 또한이 영역은 저장을 위해 사용될 수 있도록 제 선반의 후방에 줄을 실행하도록 권장한다. 마이 이후N 라인 랙 측의 정중선, 이는 PVC 팔꿈치 및 PVC 파이프 조각을 사용하여 다시 데려 수행 한 후, 다른 PVC 팔꿈치와 일체 사용 압력 해소 라인으로 길이 방향 (가로)으로 실행 PVC 파이프의. 압력 투수 라인 랙 타측 수직 실행되며 (아래 참조이 배기 라인은, 2 "PVC 파이프의 제조) 물 용기로 끝나는 메인 배기 라인에서 종료한다.
메인 배기 라인의 건설
세 번째 단계에서는 물 용기가 배치되어 측면 (도 4C)에, 랙 측방 실행 배기 시스템을 조립하는 것이다. 이 시스템은 2 "PVC 파이프를 사용하여 압력 구원 투수 라인에서 오는 물을 수집하고 수조에서 (아래 어항 건설 참조) 배수 내장되어있다. 메인 배기 라인은 물에 재 랙의 상부에 압력 투수 라인을 접속 및 종료, 실행 상하servoir. 또한, 메인 배기 라인은 PVC 티를 통해 메인 배기 라인에 연결하는 수평 2 "PVC 파이프를 통해 물고기 탱크에서 드레인을받습니다. 이러한 수평 드레인 파이프 물고기 탱크 (아래 참조)에서 드레인 물을 수신 할 수 있도록 한 '종 컷이있다. 이러한 수평 드레인 라인은 뒤쪽과 선반의 바닥 부분에서 실행하고 배출 된 물이 중력에 의해 주 배기 라인에 실행할 수있는 약간의 경사가있다. 수조 배수 물이 스폰지에 폭포와 이물질을 걸러 있도록 스폰지 필터 패드는 수평 드레인 라인에 추가됩니다. 전체 조립 시스템은 그림 5와 그림입니다.
물고기 탱크의 건설
대표적인 어항이 그림 6에 표시됩니다. 물고기 탱크 배수 라인의 끝은 (배기 라인에 절 위 참조) 수평 드레인 라인에 배치됩니다. 철망을 방지하기 위해 수조에서 드레인 선에 삽입탱크에서 수영에서 제브라 피쉬. 이러한 특정 탱크 탈출에서 물고기를 방지하고 또한 오염 기회를 최소화 뚜껑이있다. 오버 플로우가 발생하면 탱크 뚜껑이 바닥에 떨어지는 물고기를 방지 할 수 있습니다. 뚜껑 탱크 적합하지만 시스템이 다음에 작은 구멍이 탱크의 상단에 드릴 수 있습니다 뚜껑없이 탱크를 포함하는 내장되어있는 경우. 이 탈출에서 물고기를 방지하면서 물이 탈출 할 수 있습니다.
작동
제브라 피쉬의 식민지가 다른 곳에서 3-6 기술을 사용할 수 설립 프로토콜에 의해 유지 될 수있다. 요약하면, 우리 시설은 약 85 ㎖ / 분 (또는 유생 수조에서 45 ㎖ / 분)에서 시스템 펌프는, 각 성인 유량을 조절 (또는 유생 수조)에 의해 시스템 볼륨 시간 당 약 75 배를 순환 할 수 있도록 . 수질 생물학적 활성 여과 소규모 물 변화에 의해 유지된다 (~ 시스템 체적의 5 %)은 필요에 따라. 매일 모니터링의 pH, 전도도, 용존 산소 (DO) 수준 및 온도가 일관된 상태를 유지하기 위해 필요하다. 키트는 상업적으로 산도를 측정 할 수 있으며 레벨 마십시오. 전도도 미터도 구입할 수 있습니다. 매일, 이러한 변수를 테스트 저장소로부터 250 ml의 물을 제거하고 분석을 수행하기 위해. PH 수준이 7.2로 유지해야한다, DO 500 μS 1,300 μS 사이 미만 6 ㎎, 및 전도성을해야한다. (출처는 여기) 온도는 28.5 ° C로 유지해야합니다. 정기적 인 시스템 유지 보수 (3-4주)는 대략 30 % 물 변화와 청소 및 필터 패드와 숯의 교체를 포함한다.
그림 1 : 제브라 피쉬 시설의 세 가지 주요 구성 요소. A. 펌프 및 필터 시스템은 제 선반의 바닥 부 (에 위치선반)와 주요 공급 라인과 저수 탱크를 연결한다. B. 주요 공급 라인은 UV 램프로부터 도출하고, 물고기 탱크를 포함하는 세 개의 상부 선반에 물을 공급한다. 각 선반은 독립적으로 구획되고, 개별적으로 공급하는 밸브 (valve)를 사용하여 (온 또는 오프)를 제어 할 수 있습니다. 이 주요 라인은 또한 하단부에서 주요 배출 밸브를 갖고, 상단부 메인 배기 라인으로 끝나는 압력 해소 라인으로 계속된다. C. 메인 배기 라인 압력 투수 행에서와 다른 물을 받는다 수조 구획 및 물 stock 탱크로 끝납니다. 모든 선반 PVC 파이프이며, 길이 방향으로 각각의 물고기 탱크 물을받을 열려있는 수조 배기 라인을 가지고 있습니다. 이 선은 물을 약간 주 배기 라인에 중력에 의해 실행할 수 있도록하는 경향된다.이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2 :. 3 대 조립 된 제브라 피쉬 시설의 구성 요소와 쉽게 기능은 물 저장 탱크가 이미 bioballs을 가지고 있습니다. 메인 배기 라인으로부터 물이 수위 (명확성을 위해이 도면에 도시되지 않음)는, 상기 메쉬에 배치 스폰지 필터에가한다. 명확성을 위해 제 2 랙이 도시 irrigator 만 공급 튜브 (4)를 가지고, 도시 일부 어항을 갖고, 수조 배출 라인은 투명 참고. 랙의 모든 선반 구 1 L 물고기 탱크를 개최하고 9 포트 irrigator을 가질 수 있습니다.
그림 4 : 개별 부품 건설. A. 세 펌프 및 필터 시스템은 시스템의 하부 랙이다. 펌프는 세 mechan에 접속되고UV 필터 뒤에적인 필터 시스템 물에서 오염 물질을 제거합니다. B.의 수평 공급 라인은 각 탱크에 신선한 물과 산소를 공급하는 9 포트 관개 매니 폴드에 끝납니다. 각 선반에 공급선 세정 및 검역을 위해 각각의 선반에 물을 중지하는데 사용될 수 온 - 오프 밸브를 가진다. C.이 수조 배기 라인은 순환을 다시 입력 메인 배기 라인으로 비운다. 압력 릴리프 라인은 메인 배기 라인으로 비운다.
도 5 :. 완성 된 시스템은 완성 된 시스템에 포함 된 순환 시스템 용 펌프 및 필터 시스템 메인 수직 공급선, 각 선반에 대한 수평 공급선, 탱크 배기 라인, 압력 릴리프 라인 및 메인 배기 라인을 포함 .
그림 6 :. 대표 어항은 어항은 시스템의 수평 배수 라인을 연결하는 배수 라인이 포함되어 있습니다.
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Discussion
이 문서의 주요 목적은 기능 제브라 피쉬 시설의 건설이 복잡하지 않고 최소한의 건설 지식 초보자 물고기 연구자들에 의해 만들어 질 수 있음을 입증하는 것입니다. 또한,이 문서에서는이 기능 제브라 피쉬 시설에 대한 자료는 지역의 애완 동물 공급 상점 또는 하드웨어 상점에서 쉽게 저렴하게 획득 할 수 있음을 보여줍니다. 모든 재료 및 도구는 시스템의 구성을 획득되었으며 어항 약 1 근무일 잡히게되면. 72 시간 첫 번째 실행이 결정되는 등의 누출 또는 낮은 수압으로 시스템의 모든 실패를, 할 수 있습니다. 시스템 내에서 오염 물질이 순환에서 제거 될 때까지이 처음 실행도 할 수 있습니다. 예를 들어, PVC 접착제는 순환의 처음 몇 시간 동안 제거한다 유해 유기 물질을 함유 할 수있다. 이 시스템은 허용하고 렌즈 유지 볼륨과 물 교체의 조정을 용이하게하는 주 배수 밸브가 ANCE. 또한, 시스템은 기압의 조정을 용이하게 해소 압력 라인을 갖는다. 이 수압 규제 할 수 있으므로 하나 또는 두 개의 구획 (가구)이 사용될 때,이 행은 유용하다.
시설은 연구자 개인의 용량 요구를 충족하기 위해 1, 2 또는 3 구획의 이용 (1.8 L 36 어항) 허용 모듈 식으로 설계된다. 각 구획에 위치 온 오프 밸브는 시스템의 다른 부분의 분리를 용이하게한다. 이러한 밸브 시스템은 잠재적 감염 확산을 방지하고, 시스템에 의해 구획의 세정을 용이하게하는 것도 유용하다. 또한, 각 수조 급수 밸브 2, 9 포트 irrigator 하나와 수조의 입구에서 유연한 튜브 하나를 갖는다. 이러한 이중 밸브 시스템은 수압의 미세 조정이 가능하고 또한 청소 절차 또는 생선 추출 또는 조작을 용이하게한다.
t "> 암모니아, 아질산염과 질산염의 적절한 문서는 시설의 적절한 기능을 사용하는 데 필요합니다. 그들이 성장에 질화 균에 대한 충분한 표면을 제공하기 때문에이를 위해 bioballs가 중요하다. 물고기의 식민지가 안정되면, 시설 수 용이하게 크거나 작은 어항을 사용하도록 수정 될 수있다. 또한, 시설은 문헌 5에 사용할 프로토콜 다음 지브라 피쉬 품종하도록 변형 될 수있다. 또한, 설비가 시스템의 기능을 확장하기 위해 다른 모듈 또는 랙을 추가하도록 수정 될 수있다 .추가 형산을 추가 할 필요가 없기 때문에 탱크에 신선한 물 흐름이 충분히 신선한 산소를 제공한다. 물이 저수지에서 발생하는 공기 교환은 산소의 충분한 소스입니다. 큰 탱크가 사용된다면 최소한 추가적인 산소 공급원이 추가 될 수있다. 또한 탱크로 신선한 물 흐름없이 물고기 질식 것이라고 지적 그래서 그것은 중요되어야 수류 B밀접 없는지 확인하기 위해 모니터링 전자는 물 라인을 차단하고 있습니다. 또한 수온은 28.5 ℃로 유지하는 것이 필수적이다. 일정한 온도는 시스템이 28.5 ° C에 보관되어있는 실내 온도를 유지함으로써 달성 될 수있다. 대안 적으로, 수족관 가열 원은 일정한 온도를 유지하기 위해 살 수있다. 수질을 유지하는 것은 일관된 실험 결과에 필수적이다. 실험 조건에 따라 정확한 수질 매개 변수를 결정하는 데 사용할 수 많은 소스가 있습니다.
10 일 이후에 재사용 전에 70 % 알코올을 분무 - 물고기 탱크는 매 7 청소됩니다. 또한 크롬 랙에 청소와 부식을 방지하고 구축하는이 시점에서 건조하는 것이 좋습니다. 오염의 징후가 관찰되는 경우, 각각의 탱크는 2 % 표백제 용액 (8)로 소독한다. 일반 건강이 감염의 징후에 특별한 관심과 모니터링 (피부 궤양, 부종, exolpthalmia는 오프 색상 등.), 가스 거품 질환 (때문에) 과포화 가스 농도, 물 온도의 빠른 변화, 배관 시스템의 문제), 아가미 증식 (물에 암모니아, 구리, 아연 또는 활성 코러스 걸의 높은 수준을 (복벽을 밀어 인해 여성 달걀 보유에 대한) 또는 계란 관련된 염증과 fibroplasias (때문에 비타민 C 결핍) 척추 측만증.
이 기능의 구성은 유연하고 확장 작거나 시스템을 허용한다. 기본 구성 아이디어를 취함으로써,이 기능은 다양한 크기의 기초 연구의 요구에 맞게 구성 될 수있다. 건설 기관에 따라 다를 수 있기 때문에, 프로토콜의 가장 중요한 단계는 72 시간을 처음 실행, 건설의 첫 주 동안 암모늄, 질산, 아질산염 수준의 일상적인 모니터링입니다. 우수한 수질 물고기의 건강 유지에 도움이된다. 저렴한 생선 정기적 복용에 사용할 수있는 현재의 프로토콜의 많은m는 야외 물 흐름 (3)을 필요로한다. 야외에서 보호 물을 갖는 것은 수질 오염 및 증발에 대한 가능성을 최소화. 폐쇄 된 시스템의 유지 관리는 일반적인 오픈 에어 시스템에 비해 최소이다.
문제는 설비의 구성에서 발생하는 경우 (등 누출 낮은 수압.) 하나 단순히 시설에서 관심 영역을 잘라내는 동일한 단계적 방식으로 부품을 교체하여 접합 파이프를 대체 할 수있는 상기 나열된 . 이 시스템으로 인해 주목두면 물고기에 위험이 될 수있는 작은 누출에 큰 수분 손실에 취약 할 수 있습니다. 최소 투자 플로트 차단 장치는 수위가 안전 임계 값 아래로 떨어졌다 때를 감지하고 시스템을 종료합니다. 시스템의 가까운 모니터링을 사용할 수없는 경우에 필요할 수 있습니다. 올바른 수정하면,이 시스템은 이동성의 부족 외에면 거의 제한이있다. 이 시스템이 구축되면그것은 일부를 절단하고 새로운 위치에서 그들을 recementing없이 이동하기가 매우 어렵다 에드. 이동성이 제한은 시스템이 이상적으로는 하나의 작업 영역에서 유지 될 필요가 있다는 것을 의미한다. 이동성이 요구되는 경우 유연성을 향상 할 수있는 작은 변형이있다. 측면 각 공급, 압력 릴리프 라인, 펌프 방전의 시작 부분에 노동 조합을 추가하고, 배수 밸브 위. 배수관 건조 끼워 대신 대신에 접합 될 수있다. 펌프 부분에 플렉시블 커플 링을 추가하면 이동성에 도움이됩니다. 이것은 추가적인이고
이 시스템의 간단한 구조 및 유지 보수는 문헌에서 발견되는 현재의 프로토콜이 작은 연구 기관 1,2,10-12 사용할 수있는 것을 의미한다. 유지 관리는이 학부생 연구를위한 이상적인 시스템 만들기 간단합니다. 이 시스템은 또한, 독립적 인 연구와 교육 연구소에 대한 우수합니다.
결론적으로,이 유형의시설, 저렴한 구축이 용이하고, 생체 내 실험을위한 기능입니다. 이 기능은 제한된 자원과 제한된 축산 공간이 기관에 이상적입니다. Zebrafish의 연구는 약학, 생리 현상, 또는 유전 연구를 포함한 연구의 여러 종류에 사용되는 영역이다. 사실, 사용 가능한 돌연변이 또는 형질 전환 제브라 피쉬의 많은 수의 생물 의학의 거의 모든 분야에서 연구의 혁신적인 라인을 지원합니다. 또한,이 시스템은 작은 주로 학부 기관에서 연구 기회 및 과학 전공 교실 경험을 향상시키고 생명 과학자의 다음 세대에게 영감을 사용할 수 있습니다.
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Disclosures
저자는이 문서에 대한 관심의 충돌을 선언합니다.
Acknowledgments
저자는 연구 및 공동 작업 (SPARC) 수상의 작은 약국 상을 통해이 프로젝트의 금융 지원을 위해 약국의 장로교 대학 학교의 연구의 사무실에게 감사의 말씀을 전합니다. 저자는 씨 존 Smink, 수생 동물 연구소의 관리자 클렘 슨 대학 (Clemson University), 클렘 슨, 자신의 기술 지원 원고 개정 SC 감사합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item | Brand | Quantity | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
References
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- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P.
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196 (2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
