Este artigo relata um método detalhado para a medição dinâmica e quantificação da velocidade do fluxo sanguíneo dentro dos vasos sanguíneos individuais da vasculatura hepática de camundongo usando imagens de microscopia intravital em combinação com uma metodologia específica para aquisição e análise de imagens.
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Artigo de método
Microscopia intravital Imagem do Fígado seguinte
Neste artigo
Resumo
Resumo
Microscopia intravital (IVM) é uma técnica de imageamento óptico poderoso que tornou possível a visualização, monitoramento e quantificação de vários eventos biológicos em tempo real e em animais vivos. Esta tecnologia tem avançado muito a nossa compreensão de processos fisiológicos e fenômenos mediada por patógenos em órgãos específicos.
Neste estudo, IVM é aplicada para o fígado do rato e protocolos foram concebidos para a imagem in vivo, o sistema circulatório do fígado e medir glóbulos vermelhos do sangue (RBC) velocidade em vasos hepáticos individuais. Para visualizar os diferentes subtipos dos vasos que caracterizam o órgão hepático e realizar medições da velocidade do fluxo sanguíneo, ratinhos C57BL / 6 são injectados por via intravenosa com um reagente fluorescente de plasma que rotula a vasculatura associada a fígado. IVM permite in vivo, em tempo real, a medição da velocidade de RBC em um vaso de interesse específica. Estabelecer esta metodologia tornará possívelinvestigar a hemodinâmica do fígado, em condições fisiológicas e patológicas. Em última análise, esta metodologia baseada na imagem será importante para o estudo da influência de L. infecção donovani na hemodinâmica hepáticas.
Este método pode ser aplicado a outros modelos infecciosas e órgãos de rato e pode ainda ser alargado para ensaios pré-clínicos do efeito de uma droga sobre a inflamação através da quantificação do seu efeito sobre o fluxo sanguíneo.
Introdução
Hemodinâmica específicos de órgãos são características fisiológicas importantes de qualquer órgão de mamíferos. Anormalidades no fluxo sanguíneo pode ser a consequência de inflamação e um sinal de disfunção de órgãos 1. Assim, o fluxo de sangue organização, estrutura e função de parâmetros aparecem como críticos para análise sob condições fisiológicas e patológicas. As técnicas que têm sido normalmente utilizadas para a análise de fluxo sanguíneo em um órgão específico contêm várias limitações, incluindo o limite de resolução da técnica em si (por exemplo, o Doppler do fluxo de sangue), a capacidade para a medição de fluxo sanguíneo absoluto única....
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Protocolo
Declaração de ética: Todos os estudos com animais foram realizados de acordo com as diretrizes e protocolos que foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso da Université Aix-Marseille, França animal Institucional. Feminino camundongos C57BL / 6 a 8 - 10 semanas de idade foram comercialmente obtida e manipulada de acordo com as regras do Décret N ° 8 ° 87-848, 19 de outubro, 1987, Paris. Todos os experimentos usando L. donovani parasitas LD1S foram conduzidos de acordo com as normas de biossegurança da legislação francesa e da União Europeia.
1. Rato infecção com L. donovani promastigota Parasitas
- Prepa....
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Resultados
A organização arquitectónico específico dos sinusóides do fígado pode ser visualizado com base na propriedade autofluorescente deste órgão (Figura 1, painel B e C, verde), a injecção intraperitoneal de Hoechst para a rotulagem dos núcleos de hepatócitos (Figura 1B, azul) e a injecção intravenosa de BSA fluorescente para a coloração do sistema circulatório hepática (Figura 1C, vermelho). O fígado é composto por vários subtipos dos vasos diferentes com diferentes funções .......
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Discussão
O desenvolvimento recente de microscopia intravital do fígado do rato abre novas possibilidades para a investigação da resposta fisiológica à infecção in vivo e em tempo real, 5,9,10. Fluxo sanguíneo de órgãos é um parâmetro fisiológico crítico que é frequentemente alterados em muitas doenças. No entanto, o estado da hemodinâmica hepáticas, sob condições fisiológicas e infecciosas continua a ser uma área pouco explorado. Neste estudo, os métodos baseados em IVM, que foram previamente adaptadas para o.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Esta pesquisa foi apoiada pelo INSERM, da Universidade de Aix-Marseille e um prêmio de Desenvolvimento de Carreira de HFSPO obtido por CL Forestier.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Hoechst 33342 | Sigma Aldrich | B2261 | |
| BSA-Alexa 647 | lifetechnologies | A34785 | |
| Dextran-FITC 500 mol wt | SIGMA | 46947 | |
| Cetamina | PanPharma | 20434 | |
| Xilazina | Bayer | KP07KEU | |
| Vetedine | Pharma Animal | 6869029 | |
| Cianoacrilato líquido | Cyanolit | 5833300005 | |
| Quadro de lamínula: Lâmina de membrana para microdissecção parte N°: 5013 | Máquinas moleculares | 50103 | |
| Coverslip DiaPath 24x60 ep: 1.6 mm | DiaPath | 61061 | |
| Microscópio confocal de varredura a laser | Leica | Visualizador TCS-SP5 | |
| LAS-AF | Software Leica | Versão 3.1.0 buid 8587 |
Referências
- Vollmar, B., Menger, M. D. The hepatic microcirculation: mechanistic contributions and therapeutic targets in liver injury and repair. Physiol. Rev. 89, 1269-1339 (2009).
- Srinivasan, V. Absolute blood flow measured by optical methods. SPIE Newsroom....
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Reimpressões e permissões
