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USEPA Metodo 1615 è stato sviluppato per l'utilizzo durante il ciclo di terzo monitoraggio del regolamento di monitoraggio dei contaminanti non regolamentata (UCMR3) 17 e progettato principalmente per misurare la presenza di virus nelle acque sotterranee. Si condivide una serie di misure comuni con il metodo Informazione regola di raccolta (ICR), 15,18 ma ha due piccole differenze. Entrambi usano saggi quantali per misurare virus che producono CPE su monostrati di cellule BGM con quantificazione essendo basato su numero più probabile (MPN) calcoli. Metodo 1615 consente l'uso di un filtro nuovo elettropositivo per concentrare virus da varie matrici acqua e riduce il numero di recipiente di prova coltura cellulare repliche per diluizione da 20 a 10. Entrambi modifiche minori riducono i costi complessivi di metodo. La riduzione del numero di repliche riduce lavoro, ma si traduce in un limite di rilevazione leggermente inferiore. Anche se le acque sotterranee sono tenuti ad avere concentrazioni più basse di virus di acque superficiali, 19,20 °e quantità di campione analizzati è di cinque volte superiore a quello di acque superficiali, compensando in parte le differenze. L'uso di un minor numero di repliche sarà adeguato per la maggior parte delle acque superficiali, ma comunque richiede diluizione del campione.
Metodo 1615 ha diversi passaggi critici e limitazioni. estratti da carne variano da lotto a lotto. Ogni lotto deve essere testato per efficacia della eluizione virus e la capacità di concentrazione virus attraverso le fasi di concentrazione secondari come descritto è materiali supplementari sezione S2.3. Il metodo utilizza formule precise per calcolare la quantità di campione per inoculare su colture di cellule BGM e per determinare i titoli del virus. risultati non accurati verranno generati se queste formule non sono rigorosamente seguite. La corretta tecnica asettica deve essere utilizzato per il mantenimento di colture cellulari. Non infetti controlli su colture di cellule BGM che mostrano il disagio durante il periodo di incubazione di 14 giorni probabilmente indicano problemi con la manutenzione coltura cellulare. Grande attenzione deve anche essere taken durante il pipettaggio passaggi coinvolti con l'inoculazione di e medie Oltre a fiasche di coltura cellulare per evitare la contaminazione incrociata. I controlli di qualità descritti nel supplemento di materiali sezione S2 devono essere rigorosamente rispettate. Sezione S2 fornisce anche consigli per la risoluzione dei problemi problemi di qualità.
Il meccanismo principale di adsorbimento virus electropositive filtri è un'interazione carica correlata alla forza della carica positiva sul filtro e la forza della carica negativa del virus 'connesse al suo punto isoelettrico e il pH dell'acqua in fase di test 21. Eluizione dai filtri è influenzata anche dalla forza di queste interazioni. Perché variano tra i tipi di virus e anche tra i ceppi all'interno dello stesso tipo, eluizione dai filtri non è uniforme. Ciò significa che qualsiasi risultato può sottovalutare il livello effettivo di virus presente nelle acque ambientali. L'uso della singola linea cellulare BGM sottostima anche verificarsi virus. La gammavirus enterici che può produrre CPE in questa linea cellulare in primo luogo è limitata a poliovirus e Enterovirus B sierotipi specie, nonché alcuni reovirus 14,15,22. Altri tipi di virus infettivo non verranno rilevati.
Recuperi poliomielite in acque sotterranee e di grado reagente incontrato metodo USEPA 1615 criteri di prestazioni di accettazione sia per la valutazione delle prestazioni (PE, cioè campioni di acqua distillata seminato con titoli sconosciuti a un analista che vengono utilizzati per valutare le prestazioni dell'analista prima dell'inizio di uno studio) e campioni (LFB materiali supplementari Tabella S1). Il recupero 58% dalle acque sotterranee utilizzando la procedura di coltura è simile a quella riportata da altri utilizzando acqua di rubinetto 23,24. Il recupero medio dai campioni LFB di 111% con un coefficiente di variazione (CV) del 100% anche incontrato i criteri di accettazione metodo di prestazione anche se sono superiore a quello osservato per i campioni PE during l'ICR. ICR significa recupero interlaboratorio è stata del 56% con un coefficiente di variazione (CV) del 92%, mentre i recuperi intralaboratorio medi variavano 36-85% (CV 58-131%; dati non pubblicati dal database ICR PE). recuperi più alti sono stati osservati in questo studio per i campioni LFB bassa del seme che per i campioni di sementi superiori (122 contro 42%). Nel momento in cui l'ICR è in fase di progettazione, ci si aspettava che i campioni del PE ricevono bassi valori di semi avrebbero recupero inferiore, che coloro che ricevono elevati semi. Simile a quella osservata qui per i campioni LFB, recupero poliovirus campioni ICR PE erano 71% (CV 100%), 54% (CV 69%) e 44% (CV 71%) per valori seme ≤300 MPN, 300- 1.500 MPN, e> 1500 MPN, rispettivamente.
Ci sono molti metodi per la misurazione virus infettivo in campioni di acqua 25. Questo metodo è significativo rispetto ad altri metodi in grado di standardizzazione. La standardizzazione non solo include controlli di qualità e prestazioni,ma utilizza anche i volumi e le formule definite per garantire che tutti i laboratori di analisi di eseguire il metodo identico. Senza la standardizzazione, è difficile confrontare i risultati tra laboratori, e quindi la standardizzazione è fondamentale per lo svolgimento di studi su larga scala in diversi laboratori di analisi. Con la standardizzazione incorporato in questo metodo potrebbe essere ampliata in futuro per includere tipi di virus aggiuntivi e linee cellulari. La ricerca è in corso per fornire i dati per l'inclusione di adenovirus nel metodo.
Equazione 1 
Equazione 2 
; n = 4) e il grado del reagente acqua ( 
; n = 12) dei campioni. I dodici campioni di acqua distillata inclusi sei seminato con 300 MPN e sei seminato con 1.000 MPN di poliovirus. barre di errore rappresentano errore standard.