מודל הכבשים העוברי instrumented כרונית שאינו מורדם משמש ללמוד התפתחות העובר אדם בבריאות ובחוליים, משום שהיא מאפשרת מיקום כירורגית ותחזוקה של צנתרים ואלקטרודות, דגימת דם חוזרת ונשנית, הזרקת חומר, הקלטה של פעילות ביו-אלקטרונית, ובהדמית vivo. אנו מתארים את ההליכים הנדרשים להקמת מודל זה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מכשור של כבשים עוברי לטווח הקרוב להקלטות ללא הרדמה כרוניות רבות-משתנים
במאמר זה
סיכום
תקציר
הכבשים ההרות המכוננות באופן כרוני שימשו כמודל להתפתחות העובר האנושי ותגובות לגירויים פתופיזיולוגיים כגון אנדוטוקסינים, חיידקים, חסימות חבל הטבור, היפוקסיה וטיפולים תרופתיים שונים. במודל זה פותחו הפרקטיקות הקליניות מצילות החיים של טיפול בגלוקוקורטיקואידים בעוברים בסיכון ללידה מוקדמת והיפותרמיה טיפולית. זאת בשל ההתאמה הייחודית של כבשי העובר הלא מורדמים למיקום ותחזוקה כירורגית של צנתרים ואלקטרודות, המאפשרים דגימת דם חוזרת, הזרקת חומרים, רישום פעילות ביו-חשמלית, הפעלת גירוי חשמלי והדמיית איברים in vivo. כאן אנו מתארים את הליך המכשור הכירורגי הנדרש להשגת מודל כבשים עובריות יציבות ללא הרדמה כרונית, כולל אפיון ההתאוששות לאחר הניתוח מנקודות מבט של גזי דם, מטבוליזם ודלקת.
מבוא
מגוון של מודלים של בעלי החיים קיימים למחקר של שני הריונות תקינים ונפגעו, כולל מכרסמים מעבדה, פרימטים לא אנושיים ומעלי גירה מקומיות. 1,2,3,4,5 הכבשים הרה instrumented כרונית כבר בשימוש נרחב במשך 50 שנים כ מודל של התפתחות העובר אנושית ותגובות לגירויי pathophysiologic כגון lipopolysaccharide (LPS). 6-10 הנגעים בעקבות חשיפת LPS לחקות בדיוק את מה שהוא ראה בפגים עם לויקומלציה סביב חדרי המוח, שנובעת מפרופיל התבגרות דומה של שני המינים. 11, 12
סיבוכי הריון אחרים גם נחקרו בפירוט רב כגון הגילוי שסטרואידים לפני לידה לקדם פיתוח ריאות 1....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
טיפול בבעלי חיים ואחרי ההנחיות של המועצה הקנדית על טיפול בבעלי חיים ובאישור על ידי מועצת אוניברסיטת מונטריאול בטיפול בבעלי חיים (פרוטוקול המס '10-Rech-1560). מידע מפורט על חומרים ושיטות מסופק בטבלת 1.
1. הרדמה
- הכנס קטטר חד-לומן לוריד הצוואר.
- שקט ורגוע acepromazine הכבשה באמצעות (10 מ"ג / מ"ל Atravet) 2 מ"ג לוריד כ 30 דקות לפני האינדוקציה של הרדמה כדי להפחית את הלחץ הקשורים בהליך אשר בתורו מפחית את הרמות הקורטיזול. <....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
38 כבשים מיושנים זמן הריון היו instrumented ב128 ± 2 ימים להריון (דג"א, ~ 0.88 הריון, טווח 145 דג"א) עם עורקים, ורידים וצנתרים מי שפיר ורל (אק"ג) אלקטרודות עם טכניקה סטרילית בהרדמה כללית (שתי כבשה והעובר ). במקרה של הריון תאומי העובר הגדול יותר נבחר מבוסס על מישוש והערכת קוטר intertemporal; לחלופין, העובר להיות instrumented ניתן לבחור באופן אקראי, כדי למנוע כל הטיה פוטנציאלית או שניהם העוברים ניתן instrumented. משך הזמן הכולל של ההליך היה 124 ± 27 דקות. החלק מהגוף ה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
ההרדמה וניתוחים מוצגים הנדרשים להקמת מודל חיה ללימוד פיזיולוגיה של העובר והפתופיזיולוגיה: הכבשים העובריים אינם מורדמים instrumented כרונית.
ארבעה שלבים קריטיים בפרוטוקול יש להדגיש. ראשון, שעבר את הצנתרים ואלקטרודות דרך האגף האימהי: חשוב שזה נעשה בפעם אחת כדי למנוע פציעות איברים פנימיות. שנית, אבטחת אתר ההפעלה uterotomy לפני exteriorizing העובר: זה הוא חיוני כדי למנוע או למזער את האובדן של מי שפיר והתפירה הבאה של .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
לא נמסרו גילויים.
תודות
מחברים מודים בהכרת תודה על תמיכת המימון מקרן המחקר הפרינטלי ע"ש מולי טואל, המכונים הקנדיים לחקר הבריאות (CIHR), ו-Fonds de Recherche du Québec – Santé (FRQS) (ל-MGF) ו-CIHR-Quebec Training Network in Perinatal Research (QTNPR) (ל-LDD).
המחברים מבקשים להודות לאסתר סימארד, מרקו בוסה, קרל ברנרד וכרמן מובילה על הסיוע הטכני.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| ACE מקור אור | Schott-Fostec | A20500 | |
| מספריים לחיתוך | כלי מדע עדינים | 14060 - 11 | |
| מספריים חיתוך זוויתי | כלי מדע עדינים | 15006 - 09 | |
| ידית אזמל | כלי מדע עדינים | 10003 - 12 | כלי ניתוח לסירוגין |
| להבי אזמל מעוקלים #12 | כלי מדע עדין | 10012 - 00 | כלי ניתוח לסירוגין |
| מספריים לעצם | כלי מדע עדינים | 16044 - 10 | |
| S & מלקחיים לקשירת תפרים T | Fine Science | Tools 00272 - 13 | |
| מלקחיים Dumont SS - כלי מדע עדינים בזווית | 11203 - 25 | ||
| תפר משי קלוע בגודל 6-0 | טלפלקס רפואי | 07 - 30 - 10 | |
| סרט רפואי | טרנספור | 3M | |
| קטמין הידרוכלוריד 100 מ"ג/מ"ל | Hospira | NDC 0409 - 2051 - 05 | Final Do הוא 80 מ"ג/ק"ג |
| הזרקת Tranqui Ved (קסילזין 100 מ"ג/מ"ל) | Vecdo | NDC 50989 - 234 - 11 | Final Do הוא 10 מ"ג/ק"ג |
| תפוז תגובתי 14 | תמיסת רכיבי תמיסת סיגמא - Aldrich | R - 8254 | |
| רינגרס מאוזנת | בגז עם 95% O2 ו-5% CO2, pH סופי 7.4 | ||
| נתרן כלורי | סיגמא - Aldrich | S7653 | ריכוז סופי: 118 מ"מ |
| אשלגן כלורי | פישר סיינטיפיק | P217 - 3 | ריכוז סופי: 4.7 מ"מ |
| סידן כלוריד דיהידרט | פישר סיינטיפיק | C79 - 500 | ריכוז סופי: 2.5 מ"מ |
| אשלגן פוספט מונו-בסיסי | פישר סיינטיפיק | P -285 | ריכוז סופי: 1.2 מ"מ |
| מגנזיום גופרתי | J.T. בייקר | ינואר-00 | ריכוז סופי: 0.57 מ"מ |
| 4-(2-הידרוקסיאתיל)פיפרזין-1-חומצה אתנסולפונית (HEPES) | פישר סיינטיפיק | BP 310 - 500 | ריכוז סופי: 5.95 גרם/ליטר |
| גלוקוז | סיגמא - ריכוז סופי של Aldrich | G8270 | 5.5 מ"מ |
| LifeWindow | Digicare Biomedical Technology | ||
| CED bioamplifier ויחידות ADC | Cambridge Electronic Design Limited, יחידה 4, פארק המדע, Milton Road, Cambridge CB4 0FE אנגליה. | ביואמפ: 1902; ADC: micro1401; תוכנה לרכישת נתונים: Spike 2, V7.13 | |
| Neurolog Analog signal bioamplifier | Digitimer Ltd 37 Hydeway Welwyn Garden City Hertfordshire, AL7 3BE, England | NL108A | |
| ABL800Flex | Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, London, ON N5V 4N2 | ||
| Eppendorf 5804R | Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, #2 Mississauga, Ontario, L5N 8L2 | ||
| סט צנתורי חץ | Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 ארה"ב | ||
| Atravet | 10 מ"ג/מ"ל | ||
| דיאזפאם | 5 מ"ג/מ"ל | ||
| קטמין | קטלר | 100 מ"ג/מ"ל | |
| פרופופול | 10 מ"ג/מ"ל | ||
| SurgiVeT | צינורות אנדוטרכיאליים; Smiths Medical ASD, Inc. סנט פול, מינסוטה 55112, ארה"ב | ||
| קוק קטטר חילופי דרכי אוויר עם מתאמי RAPI-FIT | Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 USA | ||
| Dispomed Ventilator | Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6 | ||
| BD Insyte-W | Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, סנדי יוטה 84070 ארה"ב | 22 עד 20 גרם; 1 אינץ' [0.9 x 25 מ"מ] עד 1.16 אינץ' [1.1 x 30 מ"מ] | |
| Edwards Lifesciences Ref: PX272 ערכת ניטור לחץ עם TruWave חד פעמי | |||
| לחץ LifeWindow LW6000 | Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, בוינטון ביץ', פלורידה 33426-9365 ארה"ב | ||
| צנתרי | |||
| Babcock | |||
| SCI (סחורות מדעיות בע"מ) | 2 מטר | ||
| 2-0 Vicryl | |||
| Castroviejo מספריים | |||
| אלקטרוקרדיוגרמה (ECG) | LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, ברלין, גרמניה | ארבע אלקטרודות נחושת במעטפת אחת, 2 מטר | |
| 2-O Vicryl | |||
| 3-0 Vicryl | |||
| PDS II USP | |||
| Trimethoprim sulfadoxine | |||
| Ampicillin | |||
| Stopcock | Argon Medical, Cat 041220001A | כפול 4 כיווני Stopcock עם מנעול לואר זכר | |
| Needles | Tyco Healthcare 8881202389 | מחטים קהות רכזת אלומיניום מונוject, 22Gx, 0.7 מ"מ x 38.1 מ"מ: לצנתרים עורקיים וורידיים עובריים | |
| מחטים | Tyco Healthcare 8881202322 | מחטים קהות רכזת אלומיניום מונוject, 16Gx, 1.6 מ"מx38.1 מ"מ: לצנתרי מי שפיר |
מקורות
- Barry, J. S., Anthony, R. V. The pregnant sheep as a model for human pregnancy. Theriogenology. 69, 55-67 (2008).
- Morrison, J. L. Sheep models of intrauterine growth restriction: fetal adaptations and consequences. Clin Exp Pharmacol Physiol. 35<....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
