コカイン誘発性行動感作の評価とマウスにおける条件付け場所嗜好

サマリー

このプロトコルは、研究者が条件付けられた場所の好みと自発運動行動感作アッセイを使用して、依存症のこれらの側面をテストするように設計された実験を行うことを可能にすることを目的としています。

要約

薬物との報酬的な経験は、強い文脈上の関連性を生み出し、繰り返しの摂取を促すと考えられています。次に、乱用薬物への繰り返しの曝露は、脆弱な個人の脳機能に永続的な変化をもたらし、これらの持続的な変化は、依存症/依存症に特徴的な不適応薬物の探索および摂取行動を維持するのに役立つ可能性があります²。げっ歯類では、報酬経験と文脈上の関連性は、条件付けられた場所選好アッセイ(CPP)を使用して頻繁に測定され、以前に薬物とペアになった状況に対する選好が測定されます。一方、行動感作は、薬物誘発性行動の増加であり、繰り返しの曝露で徐々に進行します。感作行動は、数か月の薬物禁酒後に測定できることが多いため、初期曝露の用量と長さにもよりますが、薬物誘発性の持続的な可塑性の観察可能な相関関係と見なされます。研究者たちは、これらのアッセイが、依存症の側面を媒介する神経生物学的基質を決定するだけでなく、これらの行動を混乱させるさまざまな介入の可能性を評価するのに役立つことを発見しました。この原稿では、マウスのCPPおよびコカインに対する自発運動行動感作のための基本的で効果的なプロトコルについて説明しています。

概要

>jove_content<動物モデルを使用して薬物依存症を理解することを目的とした研究では、報酬/強化/動機付け、離脱と再発を含む治療の成功を妨げるさまざまな要素、および依存症におけるこれらの問題をさらに複雑にする一般的な持続性に対処するために、さまざまなアプローチを取る必要があります。乱用薬物を摂取することに伴うやりがいのある体験は、その後の使用を動機付けると考えられているため、薬物と文脈の関連性に焦点を当てた研究は、薬物の摂取と薬物探索に寄与する脳のメカニズムを理解するのに特に役立つ可能性があります。そのようなアッセイの1つであるConditioned Place Preferences(CPP)は、報酬感度のグループ差を比較するためのハイスループットな方法です。この課題の伝統的な解釈には、条件付け刺激(CS)が無条件刺激(UCS)と対になり、複数の対になった後、CSはUCSと同じ振る舞いを引き出すという古典的またはパブロフ的な条件付けが含まれる(ただし、^39,40を参照)。理論的には、動物は内受容感覚状態(報酬または嫌悪)を文脈上の手がかりと関連付けることを学びます。次に、内受容状態の相対的な嫌悪的または食欲的な強度は、次に、文脈の手がかりに対する動物の好みを決定することによって評価されます。薬物と報酬の関連性を測定するための場所条件付けの使用は、少なくとも1957年にさかのぼり、Y字迷路のラットにモルヒネを使用した研究にさかのぼります^3,4。過去数十年にわたり、この方法のバリエーションは、げっ歯類のさまざまな刺激に対する場所....

プロトコル

全ての実験手順は、マクリーン病院施設内動物管理使用委員会によって承認されています。注：以下のプロトコルは、単一のCPPへのアプローチと運動感を説明し、多くの詳細については、他の成功したプロトコル （例えば、軽対など暗い相試験、連続した対間欠投与、）とは異なります。初心者は、手元の実験の質問（複数可）に基づいて、文献からの変化を適応させる、これらのプロトコルで始まる、または単にガイドとしてそれらを使用することもできます。自動測定方法が記載されています。しかしながら、各アッセイ（ すなわち 、ビデオ録画、ハンドスコア）のために非自動化手段を使用することが可能です。

1.条件付け場所嗜好

1. 機器やルームセットアップ：
   1. 試験前に、少なくとも3〜5日間、毎日1-3分間実験用マウスを処理します。
      注：-取り扱うことはありませんマウスは、チャンバSTREからの除去を見つけることができますssful、妨害またはコンディショニングを変更することができます。
   2. 好ましくは、自動データ収集¹⁸ photobeamsを装備した4以上の三室のCPP装置を得ます。確保各チャンバを高めることができるドアを介して小さく、中性のチャンバに接続する2つの大きく、visually-及び触覚的に異なるチャンバを有すること/アクセスを制御するために低下しました。各....

結果

CPPアッセイの代表的な結果は、約生後9週間の野生型C57BL / 6Nマウスを使用して、 図6に示されています。研究デザインは、試験（前後）の被験者内変数と治療（生理食塩水とコカイン5および10mg / kg）を被​​験者間変数で、2×3混合要因でした。 RM ANOVAはた（p <0.01、F _1,20 = 9.86）試験の両方について観察された有意な主効果の代わりに解釈されたテストと治療（F _2,20 = 3.68、P <0.05）との間に有意な相互作用を示したとトリートメント（F _1,20 = 4.37、P <0.05）。事後比較はグループのいずれも事前テスト中に互いに異なっていないことを示しました。テスト後、5ミリグラム/ kgおよび10 mgの/ kgのは、互いに有意差はなかったです。 ; 10mg / kgの、P＆5ミリグラム/キログラム、P <0.5：ただし、両方のグループは、生理食塩水のみの対照群（Tukeyのよりコカインペアリング室のための有意に高い優先度を示しました＃60;.......

ディスカッション

このプロトコルは、薬物誘発行動可塑性の側面を評価するために、平均ラボで使用できるこれらの各々は条件付け場所嗜好及び運動増感するための方法を実証します。ほとんどの行動試験と同様に、基本的なプロトコル以外の追加値する考慮事項があります。まず、これらの技術の各々は、2つのフェーズ、誘導および発現を有すると考えられます。 「誘導」は、行動のためのCPPの開発をカバーし、それはコンディショニングの間に発生し、感作のためには、（一般的に連続した）薬物曝露の最初の期間です。感作のために、それが撤退した後、または単に最後の連続暴露のいずれかとして与えられた薬物課題として定義することができながら、CPPのための「発現」は、ポストテストです。

より自分の潜在的な影響を解析するために、他の対これらの相のいずれかに操作を制限することを検討する価値があります。時間的に限られた有効性を有するウイルス（例えば 、HSV）または薬物の同時投与/前処理（ 例えば 、アゴニスト/アンタゴニスト）は、このような努力にも有用です。このアプローチをとる場合には、特定の相がより良いウイルス.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Cocaine Hydrochloride USP	Mallinckrodt Pharmaceuticals	0406-1520	研究目的での購入および使用(スケジュールII規制物質)には、州法および連邦法に基づくコンプライアンスとライセンスが必要です。
条件付けされた場所の好み, Mouse	Med-Associates Inc.	MED-CPP-MS &MED-CPP-3013	私たちの研究室ではこれらのボックスを使用していますが、多くの代替ボックスが利用可能で許容範囲です。
PAS-Home ケージ活動モニタリング フォトビームアレイ	San Diego Instruments	2325-0223 & 7500-0221	私たちの研究室では、テキストで説明されているように、これらのアレイをカスタムビルドチャンバー内に収容しています。 利用可能な代替手段があります。
使い捨てSani-Cloth分解ワイプPDI		13872

の手動ドアとライトを備えた3コンパートメント装置