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Article de méthode

Fecal glucocorticoïdes Analyse: Surveillance surrénale non invasive en Equidés

9.3K vues

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DOI :

10.3791/53479

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25 avril 2016

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Dans cet article

Résumé

L’activité surrénalienne peut être évaluée chez l’espèce équine par l’analyse des métabolites de la corticostérone dans les matières fécales. La méthode offre une option non invasive pour évaluer les tendances à long terme chez les chevaux domestiques et en liberté. Ce protocole décrit l’immunodosage enzymatique impliqué et la validation biochimique associée.

Résumé

L’activité surrénalienne peut être évaluée chez l’espèce équine par l’analyse des métabolites de la corticostérone dans les matières fécales. Lors d’une situation potentiellement aversive, l’hormone de libération de la corticotrophine (CRH) est libérée par l’hypothalamus dans le cerveau. Cela stimule la libération de l’hormone adrénocorticotrope (ACTH) par l’hypophyse, qui à son tour stimule la libération de glucocorticoïdes par la glande surrénale. Chez les chevaux, la corticostérone glucocorticoïde est responsable de plusieurs adaptations nécessaires pour soutenir le comportement de vol des chevaux et l’élimination ultérieure de la situation aversive. Les métabolites de la corticostérone peuvent être détectés dans les fèces des chevaux et l’évaluation offre une option non invasive pour évaluer les modèles à long terme de l’activité surrénalienne. L’évaluation fécale offre des avantages par rapport aux autres techniques de surveillance de l’activité surrénalienne, notamment l’analyse du plasma sanguin et de la salive. La nature non invasive de la méthode évite le stress de l’échantillonnage qui peut fausser les résultats. Il permet également de répéter l’échantillonnage au fil du temps et est idéal pour les études chez les chevaux en liberté. Ce protocole décrit l’immunodosage enzymatique (EIA) utilisé pour évaluer la corticostérone dans les matières fécales, en plus de la validation biochimique associée.

Introduction

La méthode décrite vise à analyser les concentrations de corticostérone dans les fèces équins afin de fournir une évaluation non invasive de l'activité surrénale. Mesure de l'activité (HPA) axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien est une approche acceptée pour étudier la réponse à des situations potentiellement aversif chez les deux espèces en captivité et domestiques. La technique de référence et la méthode la plus largement utilisée est l'utilisation du plasma sanguin 1 cependant, d' autres méthodes telles que l' analyse fécale ont été développés afin de surmonter le stress induit par le prélèvement de sang lui - même et permettre à la ....

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Protocole

déclaration éthique: les procédures impliquant l'échantillonnage sur le terrain et les animaux sujets ont été approuvés par l'École des animaux, rural et sciences de l'environnement (ARES) à l'Université de Nottingham Trent.

1. Prélèvement des échantillons fécaux

NOTE: Les gants doivent être portés lors de la manipulation des échantillons fécaux et le méthanol. S'il y a une forte suspicion que l'animal pourrait souffrir d'une maladie zoonotique, des vêtements de protection comme une blouse de laboratoire devraient également être portés.

  1. Recueillir les échantillons de matières fécales dans les plus brefs délais (m....

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Résultats

chevaux domestiques (n = 16, 8 juments, 8 hongres) avec un âge moyen de 15 ans (± 3) ont été regroupés en fonction du sexe et soumis à quatre modèles de logement avec des niveaux croissants d'isolement social (n = 4 cheval / traitement). Logement 1 impliqué chevaux vivant dans un environnement de troupeau, simulant étroitement leur habitat naturel. Logement 2 impliqués chevaux vivant en couple dans une grange couverte. Logement 3 chevaux impliqués logés seuls dans les écuries, mais a.......

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Discussion

analyse de corticostérone Fecal fournit un moyen d'évaluer les modèles à long terme de l'activité des glandes surrénales chez les chevaux. La nature non-invasive de la méthode permet de surmonter les effets de confusion d'autres méthodes d'échantillonnage utilisées pour évaluer l' activité des glandes surrénales , y compris la salive et le plasma analyse 9. En outre, la technique présente un avantage non-invasive clair si l'étude des chevaux libres allant.

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Le financement de la production de ce manuscrit a été fourni par l’Université de Nottingham Trent. Les auteurs tiennent à remercier la directrice de la cour de l’Université, Anna Gregory, pour l’utilisation de ses chevaux et la fourniture d’échantillons de matières fécales à utiliser dans le protocole. Merci également au laboratoire d’endocrinologie de la faune du zoo de Chester pour l’utilisation de leurs installations.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Anticorps anti-corticostérone et Kit HRPCoralie Munro - UC DavisN’est plus disponible via UC Davis - veuillez consulter Arbor Assays
Cortisol anticorps & Kit HRPCoralie Munro - UC DavisN’est plus disponible via UC Davis - veuillez consulter Arbor Assays
Corticostérone hormone standard synthétiqueSigma Aldrich50-23-7Harnful en cas d’ingestion ou de contact avec la peau. Utilisation dans une hotte
Cortisol hormone synthétique standardSigma Aldrich15087-01-1Nocif en cas d’ingestion ou de contact avec la peau. Utilisation dans une sorbonne
MéthanolSigma Aldrich67-56-1Irritant. Utilisation dans une sorbonne
Bicarbonate de sodiumSigma Aldrich144-55-8Carbonate
sodium irritant Sigma Aldrich497-19-8Phosphate
de sodium irritant DibasicSigma Aldrich7558-79-4
Phosphate de sodium irritant MonobasiqueSigma Aldrich10049-21-5Irritant
BSASigma Aldrich9048-46-8Irritant
Tween 20Sigma Aldrich9005-64-5Irritant
Acide citriqueSigma Aldrich77-92-9Irritant
ABTSSigma Aldrich30931-67-0Irritant
Peroxyde d’hydrogène 30 %Sigma Aldrich7722-84-1Irritant
Chlorure de sodiumSigma Aldrich7647-14-5Irritant
Gélules tampons - pH 4VWR332732B
Gélules tampons - pH 7VWR332742D
Gélules tampons - pH 10VWR332762H
Acide chlorhydriqueSigma Aldrich435570Irritant. Utilisation dans une sorbonne
Hydroxyde de sodiumSigma AldrichS5881Irritant
Balance analytiqueFisher ScientificBFS-525-010A
Compresseur
Centrifugeuse
Ordinateur + imprimante
réfrigérateur-congélateur
Séchage Appareil
+tubulure
Armoire de stockage de liquides inflammablesVWR649-002
Sorbonne
Agitateur à plaque chauffanteVWR640-282
Lecteur de microplaquesVWR
Laveur de microplaquesVWR
pH compteurVWR
Eppendorf Pipettes Research® ; - option multipack 2VWR
- 1 000 & micro ; lVWR
- 200 & micro ; lVWR
- 20 & micro ; lVWR
Pipette répétitiveVWR
Remplisseuse de pipetteVWR
Agitateur orbitalProgen Scientific
SonicatorHilsonic
VortexVWR
Bain
Système de purification de l’eauMillipore
de d’air Pipette Pipette Pipette d’eau chaude

Références

  1. Mormède, P., et al. Exploration of the hypothalamic-pituitary-adrenal function as a tool to evaluate animal welfare. Physiology and Behaviour. 92 (3), 317-339 (2007).
  2. Lane, J. Can non-invasive glucocortic....

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Réimpressions et autorisations

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