الهدف من هذه الدراسة هو تحديد شبكات الدماغ وزعت المتعلقة مكافأة من قبل ترسيم تقنية immunohistological موثوقة باستخدام الخلوي تفعيل ج منظمات المزارعين لقياس التغيرات في وقت واحد في مسارات الدوبامين ومواقع المحطة بعد تناول الرواية من الدهون والسكر في الفئران.
تستخدم هذه الدراسة الخلوية تفعيل ج مكتب الإحصاء الاتحادي لتقييم الآثار المترتبة على تناول الرواية من الدهون والسكر على الدوبامين في الدماغ (DA) مسارات في الفئران. وتوسط مآخذ من السكريات والدهون والمعالم السياحية التي الفطرية وكذلك تفضيلات المستفادة. الدوبامين في الدماغ، وخاصة المتوسط والحوفي والتوقعات والمتوسط القشرية من المنطقة الجوفية السقيفية (VTA)، وقد تورط في كل من هذه الردود امي وتعلمت. مفهوم شبكات الدماغ وزعت، حيث العديد من المواقع ونظم الارسال / الببتيد تتفاعل، وقد اقترح التوسط تناول الطعام مستساغا، ولكن هناك أدلة محدودة مما يدل تجريبيا مثل هذه الأعمال. وهكذا، وتناول السكر يتسبب DA إطلاق والزيادات ج-فو-لمثل مناعية (FLI) من مناطق الإسقاط VTA DA الفردية بما في ذلك النواة المتكئة (بريدا)، اللوزة (AMY) وسطي قشرة الفص الجبهي (mPFC) وكذلك المخطط الظهرية. وعلاوة على ذلك، الإدارة المركزية للانتقائية مستقبلات DA في هذه الموقعق تفاضلي لحد من اكتساب والتعبير عن تفضيلات نكهة مكيفة التي تسببها السكريات أو الدهون. نهج واحد التي يمكن من خلالها تحديد ما إذا كانت هذه المواقع تفاعلت كشبكة الدماغ توزيعها ردا على السكر أو الدهون سيكون لمتزامنة تقييم ما إذا كانت VTA والمناطق الرئيسية في mesotelencephalic DA الإسقاط (الحوف وinfralimbic mPFC، الأساسية وقذيفة من حلف شمال الأطلسي، basolateral ووسط-القشرة-وسطي AMY)، فضلا عن أن المخطط الظهري العرض تنسيق وتفعيل FLI في وقت واحد بعد عن طريق الفم، وتناول غير المشروط من زيت الذرة (3.5٪)، والجلوكوز (8٪) وسكر الفواكه (8٪) والسكرين (0.2 ٪) الحلول. هذا النهج هو خطوة أولى ناجحة في تحديد جدوى استخدام الخلوي تفعيل ج مكتب الإحصاء الاتحادي في وقت واحد عبر مواقع الدماغ ذات الصلة لدراسة التعلم ذات الصلة مكافأة في تناول الطعام مستساغا في القوارض.
وقد تورط الدوبامين في الدماغ (DA) في استجابات المركزية لتناول السكريات مستساغة من خلال المقترح على أساس المتعة 1،2 و 3 و عادة على أساس 4،5 آليات العمل المتعلقة الجهد. مسار DA الأساسي المتورطين في هذه الآثار ينشأ في منطقة السقيفية البطنية (VTA)، ومشاريع لالمتكئة (بريدا) الأساسية وشركة شل، واللوزة basolateral والقشرة المركزية-وسطي (AMY)، ونواة والحوف وسطي infralimbic قشرة الفص الجبهي (mPFC) (انظر ملاحظات 6،7). وقد تورط في VTA في تناول السكروز 8،9، ويلاحظ إطلاق DA تناول السكر التالية في NAC 10-15، AMY 16،17 وmPFC 18-20. يحفز الدهون أيضا DA NAC الافراج عن 21، ومنطقة الإسقاط DA-غنية أخرى إلى المخطط الظهري (المذنبة-putamen) ارتبط أيضا مع DA-بوساطة تغذية 22،23. اقترح كيلي 24-27 أن هذه المشاريع متعددةشكلت مناطق أيون من هذا النظام بوساطة DA-شبكة الدماغ توزيع متكاملة وتفاعلية من خلال الترابط واسعة وحميمة 28-34.
بالإضافة إلى قدرة DA D1 و D2 مستقبلات للحد من تناول السكريات والدهون 35-37 38-40، كما تورطت DA الإشارات في التوسط في قدرة السكريات والدهون لإنتاج تفضيلات نكهة مكيفة (CFP) 41- 46. إبر دقيقة جدا من مستقبلات DA D1 في حلف شمال الأطلسي، AMY أو mPFC 47-49 القضاء على اكتساب CFP التي تسببها الجلوكوز المعدي. في حين إبر دقيقة جدا إما DA D1 أو D2 مستقبلات في mPFC يزيل اكتساب الفركتوز CFP 50، يتم حظر اقتناء والتعبير من الفركتوز CFP تفاضلي قبل الخصوم DA في حلف شمال الأطلسي وAMY 51،52.
وقد استخدمت هذه التقنية 53،54-ج منظمات المزارعين للتحقيق activatio العصبيالناجم ن قبل تناول قبولا وتفعيل العصبي. مصطلح "تفعيل ج فو" سوف تستخدم في جميع أنحاء مخطوطة، ويعرف من الناحية التشغيلية من زيادة النسخ من ج-فو خلال الاستقطاب الخلايا العصبية. زيادة تناول السكروز مكتب الإحصاء الاتحادي مثل مناعية (FLI) في النواة AMY المركزية وVTA فضلا عن قذيفة، ولكن ليس الأساسية، من NAC 55-57. في حين أن تناول السكروز في الجرذان الرضاعة صورية زيادة كبيرة FLI في AMY وحلف شمال الأطلسي، ولكن ليس VTA 58، داخل المعدة السكروز أو الغلوكوز ضخ زيادة كبيرة FLI في حلف شمال الأطلسي ونوى المركزية وbasolateral من AMY 59،60. بالإضافة المتكررة من السكروز إلى الوصول تشاو المقرر زادت FLI في mPFC فضلا عن قذيفة NAC والأساسية 61. وكشف السكروز تركيز بالاستعداد النموذج أن أكبر الزيادات FLI وقعت في AMY basolateral وحلف شمال الأطلسي، ولكن ليس VTA 62. بعد تكييف، انقراض ريوا الطبيعي ذات الصلة السكرزادت السلوكيات الثالثة FLI في AMY basolateral وNAC 63. وعلاوة على ذلك، أدى الاقتران توافر السكر لهجة في لهجة زيادة في وقت لاحق مستويات FLI في AMY basolateral 64. كما زادت كمية عالية من الدهون FLI في مواقع NAC وmPFC 65-67.
معظم الدراسات المذكورة سابقا فحص السكر وآثار الدهون على تفعيل ج منظمات المزارعين في مواقع واحدة التي لا توفر المعلومات حول تحديد شبكات الدماغ وزعت ذات الصلة مكافأة 24-27. وعلاوة على ذلك، فإن العديد من الدراسات أيضا لم تحدد المساهمات النسبية للمناطق الفرعية لحلف شمال الأطلسي (الأساسية وقذيفة)، AMY (basolateral والقشرة-وسطي المركزي) وmPFC (الحوف وinfralimbic) التي يمكن أن يتم دراستها من قبل ميزة ممتازة المكاني، قرار وحيد الخلية في رسم الخرائط ج-فو 68. مختبرنا 69 استخدمت مؤخرا ج فو تفعيل والتعديلات قياسها في وقت واحد في مسار VTA DA والمؤيدمناطق jection (NAC، AMY وmPFC) بعد تناول الرواية من الدهون والسكريات في الفئران. تصف الدراسة الحالية الخطوات الإجرائية والمنهجية لتحليل في وقت واحد ما إذا كان التعرض الحاد لستة حلول مختلفة (زيت الذرة، الجلوكوز، الفركتوز، والسكرين والمياه والتحكم مستحلب الدهون) من شأنها تفعيل تفاضلي FLI في المناطق الفرعية لحلف شمال الأطلسي، AMY، mPFC فضلا عن المخطط الظهرية. هذا الكشف في وقت واحد من الاختلافات يسمح تأكيد آثار كبيرة على FLI في كل موقع، وتحديد ما إذا كانت التغييرات في موقع واحد معين يرتبط مع التغييرات في المواقع ذات الصلة، وبالتالي توفير الدعم لشبكة الدماغ وزعت 24-27. هذه الإجراءات اختبار ما إذا كان VTA، والحوف وinfralimbic mPFC، جوهر وقذيفة من حلف شمال الأطلسي، وAMY basolateral والقشرة المركزية-وسطي)، وكذلك المخطط الظهري أن العرض تنسيق وتفعيل FLI في وقت واحد بعد عن طريق الفم، وتناول الغير مشروط من الجلوكوز (8٪) وسكر الفواكه (8٪) وزيت الذرة (3.5٪) والحلول السكرين (0.2٪).
وكان الهدف من هذه الدراسة هو تحديد ما إذا كان المصدر (VTA) والدماغ الأمامي أهداف الإسقاط (NAC، AMY، mPFC) من الخلايا العصبية ذات الصلة مكافأة DA تم تفعيلها في وقت واحد بعد تناول الرواية من الدهون والسكر في الفئران باستخدام الخلايا تقنية ج فو . الدراسة الحالية هي عبارة عن وصف مف…
The authors have nothing to disclose.
بفضل ديانا إيكاثا-Culaki، كريستال سامبسون وTheologia Karagiorgis على عملهم الشاق في هذا المشروع.
Equipment | |||
Sprague-Dawley rats | Charles River Laboratories | CD-1 | |
Wire Mesh Cages | Lab Products, Seaford, DE | 30-Cage rack | |
Rat Chow | PMI Nutrition International | 5001 | |
Taut Metal Spring | Lab Products, Seaford, DE | n/a | |
Rat Weighing Scale | Fisher Scientific Company | n/a | |
Nalgene Centrifuge Tubes | Lab Products, Seaford, DE | 10-0501 | |
Rubber Stopper | Lab Products, Seaford, DE | n/a | |
Metal Sippers | Lab Products, Seaford, DE | n/a | |
Saccharin | Sigma Chemical Co | 82385-42-0 | |
Kool-Aid, Cherry | Kool-Aid | Commerical | |
Kool-Aid, Grape | Kool-Aid | Commercial | |
Fructose | Sigma Chemical Co | F0127 | |
Glucose | Sigma Chemical Co | G8270 | |
Corn Oil | Mazzola | Commerical | |
Xanthan Gum | Sigma Chemical Co | 11138-66-2 | |
Sliding Microtome | Microm International | n/a | |
Neurolucida Camera | MBF Bioscience | Software application | |
Gelatin-coated Slides | Fisher Scientific Company | 12-550-343 | |
Cover glass | Fisher Scientific Company | 12-545-M | |
Golden Nylon Brushes | Loew-Cornell | 2037 | |
Natural Hair Sable | Loew-Cornell | 2022 | |
24 Well Plates | Fisher Scientific | 3527 | |
6 Well Plates | Fisher Scientific | 3506 | |
1L Pyrex bottles | Fisher Scientific | 1395-1L | |
Tissue insert (tissue strainer) | Fisher Scientific | 7200214 | |
Eagle pipettes | World Precision Instruments | E10 for 1-10ul | |
Eagle pipettes | World Precision Instruments | E100 for 20-100ul | |
Eagle pipettes | World Precision Instruments | E200 for 50-200ul | |
Eagle pipettes | World Precision Instruments | E1000 for 100-1000ul | |
Eagle pipettes | World Precision Instruments | E5000 for 1000-5000ul | |
Universal Tips .1-10ul | World Precision Instruments | 500192 | |
Universal Tips 5-200ul | World Precision Instruments | 500194 | |
Universal Tips 500-5000ul | World Precision Instruments | 500198 | |
Blade Vibroslice 100 | World Precision Instruments | BLADE | |
DPX Mounting Medium | Electron Microscopy | 13510 | |
15mL centrifuge tubes | Biologix Research Co. | 10-0501 | |
Slide Boxes | Biologix Research Co. | 41-6100 | |
Orbital Shaker | Madell Corporation | ZD-9556 | |
weigh boats | Fisher Scientific | 02-202-100 | |
5mL disposable pipettes | Fisher Scientific | 13-711-5AM | |
Stereo Investigator Software | Micro Bright Field | Software application | |
Name | Company | Catalog number | Comments |
Reagents | |||
Paraformaldehyde Granular | Fisher Scientific | 19210 | |
NaCl | Fisher Scientific | S271-1 | |
Sodium Phophate Monobasic | Fisher Scientific | S468-500 | |
Sodium Phosphate Diphasic | Fisher Scientific | BP332-500 | |
Hydrogen Peroxide | Fisher Scientific | H324-500 | |
SafeClear II | Fisher Scientific | 23-044-192 | |
Methanol | Fisher Scientific | A412-1 | |
Normal Goat Serum | Vector | S-1000 | |
Biotinylated Anti-Rabbit IgG (H+L) | Vector | BA-1000 | |
ABC Kit Peroxidase Standard | Vector | PK-4000 | |
Anti-cFos (Ab-5) Rabbit | EMD chem/Cal Biochem | PC38 | |
Triton X 100 | SigmaAldrich | X-100 | |
3,3' diaminobenzidine tetra hydrochloride | SigmaAldrich | D5905 | |
Sodium Hydroxide | SigmaAldrich | 5881 | |
Primary TH anti body | EMD Millipore | AB152 | |
Euthosol | Virbac AH |