العزلة ومن التنميط Exosomes من الصفراء الإنسان التي تحتوي على الرنا الميكروي

Ling Li; Klaus B. Piontek; Vivek Kumbhari; Masaharu Ishida; Florin M. Selaru

doi:10.3791/54036

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

العزلة ومن التنميط Exosomes من الصفراء الإنسان التي تحتوي على الرنا الميكروي

10.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/54036

⸱

يونيو 13, 2016

Ling Li¹ , Klaus B. Piontek¹ , Vivek Kumbhari¹ , Masaharu Ishida² , Florin M. Selaru¹

¹Division of Gastroenterology and Hepatology, Department of Medicine, Johns Hopkins University School of Medicine, ²Department of Surgery, Tohoku University

في هذه المقالة

ملخص

السائل الصفراوي هو مصدر قيم للحويصلات / الإكسوسومات خارج الخلية التي تحتوي على مؤشرات حيوية يحتمل أن تكون مهمة. يمثل هذا البروتوكول طريقة قوية لعزل الإكسوسومات من الصفراء البشرية لمزيد من التحليلات بما في ذلك توصيف miRNA.

الملخص

البحث Exosome في السنوات الثلاث الماضية وسعت كثيرا من نطاق نحو تحديد وتوصيف المؤشرات الحيوية واستخداماتها العلاجية.

وقد ثبت Exosomes مؤخرا لاحتواء الرنا الميكروية (ميرس). نشأت ميرس أنفسهم المؤشرات الحيوية القيمة لأغراض التشخيص. كما جمع العينات في العيادات والمستشفيات هو متغير تماما، ميرنا بمعزل عن الصفراء كلها تختلف إلى حد كبير. لتحقيق قوية ودقيقة وقابلة للتكرار الشخصية ميرنا من عينات الصفراء التي تم جمعها بطريقة بسيطة يتطلب وضع بروتوكول ذات جودة عالية لعزل وتوصيف exosomes من الصفراء. وتتطلب هذه الطريقة عدة centrifugations وخطوة الترشيح مع خطوة تنبيذ فائق النهائية لتكوير exosomes معزولة. المجهر الإلكتروني، البقع الغربية، وتدفق الخلوي ومتعددة المعلمة جسيمات متناهية الصغر تحليل البصرية، حيثما كان ذلك متاحا، خطوات حاسمة توصيف للتحقق من جودة هxosomes. لعزل ميرنا من هذه exosomes، ارتفاعه المحللة مع ذلك، ميرنا الاصطناعية غير محدد من الأنواع مثل ايليجانس انواع معينة، أي سل-مير-39، من المهم للتطبيع كفاءة استخراج الحمض النووي الريبي. عزل exosome من السائل المراري التالي هذا الأسلوب يسمح للميرنا ناجحة التنميط من عينات الصفراء تخزينها لعدة سنوات في -80 درجة مئوية.

المقدمة

مثل غيرها من السوائل البيولوجية، أي حليب الثدي، البلازما أو البول، والصفراء تحتوي exosomes، الدهون الحويصلات الغنية ^1-4. يمكن Exosomes حمل أو تغيير الوظائف البيولوجية في خلايا المتلقي ^{5، 6،} شكل من أشكال الاتصال خلية خلية التي قد تكون جزءا من وظيفة وضعها الطبيعي ^{4، 7-9.} يمكن أن تحتوي Exosomes الأنواع ميرنا التي يمكن أن توفر مصدرا قيما للالمؤشرات الحيوية للتشخيص ^10. اكتسبت ملامح miRNAs اهتماما كبيرا في السنوات الأخيرة كعلامات التشخيصية والتنبؤية لمجموعة متنوعة من الأمراض ^11-14.

ميرنا نفسها يمكن العث....