私たちは、水のクリーンで正確なポイントサンプリングのためのシンプルで非侵入型で信頼性の高い方法であるVacuSIPを紹介します。このシステムは、底生懸濁液フィーダーによって吸い込まれた水と吐き出された水をその場で同時に収集するために開発され、評価され、粒子状物質と溶解した化合物の除去と排泄をきれいに測定しました。
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この記事について
サマリー
要約
ベンシック懸濁液フィーダーは、海洋生態系の機能において重要な役割を果たしています。大量の水をろ過し、プランクトンやデトリタスを除去し、粒子状物質や溶解した化合物を排泄することで、底生-遠洋結合の重要な薬剤として機能します。懸濁フィーダー(スポンジ、ホヤ、多毛類、二枚貝など)によって除去および排泄される化合物を正確に測定することは、それらの生理学、代謝、および摂食生態学の研究にとって重要であり、これらの生物によって媒介される栄養素フラックスの生態学的関連性を決定するための基本です。しかし、懸濁フィーダーが自然界の粒子状化合物や溶解化合物を処理する速度の評価は、現在利用可能な方法論の限界によって制限されています。私たちの目標は、底生懸濁液フィーダーの外部開口部など、特定のポイントからその場で清潔で制御された水のサンプリングを可能にする、シンプルで信頼性が高く、非侵入型の方法を開発することでした。私たちの方法では、特注のマニピュレーター装置に設置され、サンプリングされた生物の呼気開口部内に慎重に配置された微細なチューブを使用して、研究対象の生物の吸入水と呼気水を同時にサンプリングできます。各チューブの遠位端に取り付けられたシリンジ針で収集容器にセプタムを突き刺すと、外部圧力により、サンプリングされた水がサンプリングチューブを介してゆっくりと容器に押し込まれます。低速で制御されたサンプリングレートにより、水中の固有のパッチ性を統合しながら、汚染のないサンプリングを確保できます。当社は、さまざまな粒子状化合物および溶解化合物の分析に最適なろ過装置、収集容器、および保管手順に関する推奨事項を提供します。VacuSIPシステムは、自然条件での乱されていない懸濁液フィーダー代謝を定量化するための信頼性の高い方法を提供し、安価で習得が容易で、さまざまな生態系におけるフィルターフィーダーの生理機能と機能的役割を評価するために適用できます。
概要
底生サスペンションフィーダは、海洋生態系1の機能に重要な役割を果たしています。水2,3の大ボリュームをフィルタリングすることにより、それらは削除して、微粒子（プランクトンやデトリタス）及び（およびその中の参考文献）溶解した化合物1を排泄し、底生-遠洋カップリング4,5と栄養循環6,7の重要な薬剤です。正確に微粒子および溶解した化合物を除去し、（そのようなスポンジ、ホヤ、多毛類、および二枚貝など）底生サスペンションフィーダによって排泄を測定することは、その生理機能、代謝および摂食生態を理解することが基本です。一緒に速度測定をポンピングして、それはまた、これらの生物とその生態水質への影響だけでなく、生態系の規模の方法にすることによって媒介される栄養フラックスの定量化を可能にします。
微粒子の除去および生産速度を測定する適切な方法を選択し、溶解コムサスペンション濾過摂食によりポンドは彼らの摂食活動8に関する信頼性の高いデータを得るために重要です。 Riisgårdと他の人が指摘したように、不適切な方法論は、特定の物質の摂取と排泄の不正確な推定値を生成、実験条件を歪める、結果にバイアスをかけると、これらの生物によって処理された栄養フラックスの誤った定量化につながることができます。
二つの最も頻繁に使....
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プロトコル
1.準備手順とクリーニング手順
- 洗浄液
- すべての回で防護服、白衣、手袋を着用してください。ほこりや煙のない清浄な空間でこれらの準備手順を実行します。
- 新鮮な、高品質で、二重蒸留水で百分の五から十まで塩酸（HCl）溶液を調製します。
- 新鮮な、高品質で、二重蒸留水で（物質一覧を参照してください）アニオン性および非イオン性界面活性剤溶液の5％溶解性の高い基本的なミックスを調製します。
- きれいな、酸にすべてのソリューションを保存する容器を洗浄しました。
- （実験室での）準備段階とクリーニング手順
注：リン化合物に関心がない場合は、塩酸洗浄は、高品質のリン酸（H 3 PO 4）洗浄（8％H 3 PO 4の最終濃度）で置き換えることができます。- すべての回で防護服、白衣、手袋を着用してください。
- ウォッシュサンプリング装置の高純度水の十分な量で（インラインステンレス鋼Swinneyフィルターホルダーを除きます）。一晩5から10パーセントのHCl溶液に浸漬装置を残します。高品質の二重蒸留水の十分な量で、再び装置をすすぎます。
- 高純度水の十分な量で、ラインステンレス鋼Swinneyフィ....
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結果
海水収集方法の最適化
収集バイアルおよび洗浄手順の選択
VacuSIP互換収集容器はサンプリングが注射針で突き刺すことによって開始されることを可能にするセプタムを持つべきです。彼らは上昇し、水中の圧力（典型的なスキューバ作業深さで2-3のバー）に耐える必要があり、真空を保持する必要があります。揮発性有機物の分析のために、EPAによって承認されたバイアルの多くの（すべてではないブランドは）これらの基準を満たしています。 DOCおよびDON分析のために承認された予備洗浄バイアルも用意しています。収集及び分析栄養素のクリーニング手順を最適化するためのこれらのバイアルの適合性をテストするために、高品質の二重蒸留水を酸洗浄ポリプロピレンチューブ（PPチ.......
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ディスカッション
準備の手順
DOMおよび栄養分析のためのコレクターバイアル
収集容器は、溶解した微小成分と相互作用し得るとサンプラ壁は30-34成長細菌のための基板であってもよいので、DOMおよび栄養素収集のための別のバイアルを試験しました。サンプルはすぐに30を凍結されていない場合、ガラスびんは、最大2倍のシリカの初期濃度を増加させることができるので、ホウケイ酸は、シリカ定量33,35にはお勧めできません。我々の結果は、予備洗浄EPAバイアルを使用することが最も顕著アンモニウムのため、DOC、DON、及び無機栄養素のための低濃度ブランクになることを示しています。
DOC濾過および保管
濾過は多くの場合、必要とされ、海洋化.......
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開示事項
著者らは開示するものは何もない。
謝辞
私たちは、フィールドワークの彼の援助のためマネルボリバルに感謝します。私たちは、研究とサンプリング権限への支援のための「パルクナチュラル・デル・モングリ、レメデス島IエルBaixのテル」に感謝しています。水中マニピュレータはAyelet Dadon-Pilosofによって設計され、氏Pilosofにより作製しました。この作品は、スペイン政府のプロジェクトCSI-コーラル[RCおよびMRへの助成金番号CGL2013-43106-R]によって、およびTMに「MINISTERIOデEducaciòn、文化のy Deporte（MECD）」からFPUの交わりによってサポートされていました。これはG. Yahelへカタロニア政府が資金を提供海洋生物地球化学と地球変動研究グループからの寄与[助成金番号2014SGR1029]とISF助成金1280から1213とBSFの助成金2012089です。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| GorillaPod オリジナル | Joby | GP000001 | フレキシブルポータブル三脚 |
| フランジレスフェルール | IDEXヘルス&サイエンス | P-200X | 1/16インチ ブルー/パック |
| オスナット | IDEX 健康 &サイエンス | P-205X | 1/16インチ(グリーン/10 pk |
| メス to メス ルアー | IDEX Health &サイエンス | P-658 | |
| メス-オス ルアー | IDEX ヘルス &サイエンス | P-655 | |
| ピークチューブ (254 &マイクロ;m ID) | IDEXヘルス&サイエンス | 1531 | 1/16" OD x 0.01 ID x 5 フィートの長さ。代替IDもご利用いただけます。 |
| 2成分樹脂エポキシ | IVEGOR | 9257 | 使用前に2成分樹脂をよく混ぜる |
| (TOC) EPAバイアルコール | -パー | マー03756-20 | 40mlガラスバイアル。トーマス・サイエンティフィック社も製造しています(参照番号9711F09)。 |
| HDPEバイアル | ウィートン | 986701 (E78620) | 20 ml 高密度ポリエチレン バイアル |
| バキューエット Z 無添加 | グライナー バイオワン | 455001 | メーカーによる予備真空 |
| セプタムサンプルボトル | トーマス・サイエンティフィック | 1755C01 | 250 ml ガラス瓶 |
| セプタムキャップ1 | ートン | W240844SP(E7865R) | 22-400 |
| セプタムキャップ2 | ートン | W240846(1078-5553) | 24-400ガラスバイアルおよびボトル用。同じくThermo Scientific National社製(Ref.03-377-42)製です。 |
| インラインステンレス鋼スウィニーフィルターホルダー | ポール | 516-9067 | 13 mmPTFE |
| シールワッシャー | ポール | 516-8064 | ステンレス製フィルターホルダー用リング |
| TCLP ガラス フィルター | ポール | 516-9126 | バインダーフリーガラス繊維フィルタ、13 直径mm、細孔径0.7 &マイクロ;m |
| ポリカーボネート製フィルターホルダー | コール -Parmer | 17295 | 直径13 mm イ |
| ソポアメンブレンフィルター | ミリポア | GTTP01300 | 13 直径mm、細孔径0.2 &マイクロ;m |
| Contrad 70ソリューション | Decon Labs | 1002 | 陰イオン性界面活性剤溶液と非イオン性界面活性剤溶液の溶解性の高い基本混合物 |
| 滅菌シリンジ | フィルターVWRインターナショナルユーロラボS.L. | 〒514-0061P | 25 mm径、孔径0.2 &マイクロ;m |
| フルオレセイン | シグマアルドリッチ | (旧 Ref.28802) 46955-100G | 100 g |
| Holdex、使い捨て、滅菌済み | Greiner bio-one | 450263 | 滅菌済み、バキューエット滅菌針用オフセンタールアー付き使い捨てチューブホルダー |
| IcoGammaPlus | 5160 | 0.7 mm×30°Cmm | |
| クライオバイアル Nalgene | Nalgene | V5007 (Cat.No.5000-0020) | 2 ml |
| Cryoboxカートン | ルビレイ | バーM-600 | 145x145x55 mm p/マイクロチューブ 1.5 ml |
| オルトリン酸 | シグマ | 79617または代わりに超高純度塩酸を使用し、最終協調0.1% | |
| パラホルムアルデヒド | シグマ | P6148 | 500 g |
| グルタルアルデヒド | メルク | 8,206,031,000 | 25%, 1 L |
| 手動真空ポンプ | Bürkle | 5620-2181 または、標準のラボ用真空ポンプ |
参考文献
- Gili, J. M., Coma, R. Benthic suspension feeders: their paramount role in littoral marine food webs. Trends. Ecol. Evol. 13 (8), 316-321 (1998).
- Reiswig, H. In situ pumping activities of tropical Demospongiae. Mar. Bio. 9, 38-50 (1971).
- McMurray,....
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