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Articolo metodologico

Caratterizzazione di trasporto dell'elettrone attraverso biofilm vivente

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DOI:

10.3791/54671

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1 giugno 2018

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In questo articolo

Sommario

Un protocollo per la misurazione di conduttività elettrica di biofilm microbici viventi in condizioni fisiologicamente rilevanti è presentato.

Abstract

Qui dimostriamo che il metodo di gating elettrochimico utilizzato per caratterizzare la conduttività elettrica di biofilm microbici elettrodo-coltivate in condizioni fisiologicamente rilevanti. 1 queste misurazioni vengono eseguite su biofilm vivente in mezzo acquoso utilizzando origine e scarico elettrodi modellati su una superficie di vetro in una configurazione specializzata indicata come un array di elettrodi interdigitating (IDA). Un biofilm è coltivato che si estende attraverso il gap che collega la fonte e scolo. I potenziali sono applicati agli elettrodi (ES ed ED) generando una corrente di fonte-scarico (ISD) attraverso il biofilm tra gli elettrodi. La dipendenza della conducibilità elettrica sul potenziale del cancello (la media delle potenzialità di source e drain, EG = [ED + ES] / 2) è determinata sistematicamente cambiando il cancello potenziale e misurando il conseguente drenaggio di origine corrente. La dipendenza della conducibilità sul cancello potenziale fornisce meccanicistici informazioni sul processo di trasporto extracellulare dell'elettrone sottostante la conduttività elettrica del biofilm specifico sotto inchiesta. Il metodo di misurazione gating elettrochimico qui descritto si basa direttamente su quello utilizzato dal M. S. Wrighton2,3 e colleghi e R. W. Murray4,5,6 e colleghi in il 1980 è indagare su polimeri conduttivi a film sottile.

Introduzione

Extracellulare di trasporto dell'elettrone (EET) è un processo che consente alcuni microrganismi per il trasporto di elettroni tra processi metabolici intracellulari e insolubile accettori o donatori che risiedono all'esterno della cella, che vanno da minerali naturali per elettrodi. In alcuni casi, EET consente microrganismi formare elettricamente conduttivo della multi-cellula spesse biofilm su superfici di elettrodo, in cui le cellule non a diretto contatto con l'elettrodo possono utilizzare ancora come un ricettore dell'elettrone metabolica o donatore. C'è un notevole interesse in tali biofilm come catalizzatori di elettrodo per varie applicazioni, come elettrosin....

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Protocollo

1. preparazione di interdigitating microelettrodo matrice (IDA)

  1. Ottenere IDA commercialmente disponibile elettrodi modellati su un substrato non conduttivo o sintetizzarli utilizzando metodi standard litografici. 28
    Nota: IDA dimensioni e/o materiali possono essere variate sulla base desiderate condizioni per diversi esperimenti. IDAs qui utilizzati sono stati ottenuti in commercio e consisteva di due interdigitating microelettrodo oro modellato su un substrato di vetro collegato ad elettrodi grandi alle estremità opposte della matrice. Gli elettrodi sono esposti mentre le linee di autobus collegamento degli elettrodi per le grandi....

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Risultati

IDAs erano cablata, isolate e testate per garantire che i due elettrodi erano elettricamente isolati da altro (Figura 1). Reattori sono stati assemblati, inoculati con g. sulfurreducense incubate fino a quando un biofilm colmato il divario tra gli elettrodi. Il biofilm di g. sulfurreducens può essere visto visivamente per coprire la matrice. Altri biofilm possono richiedere al ricercatore di fare un gating misure elettrochimiche per vedere s.......

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Discussione

Durante l'installazione di IDA, è fondamentale per verificare che l'origine e lo scarico non sono corto insieme prima misure elettrochimiche di Gate, come questo altererà ISD vs curva EG e potrebbe portare a interpretazioni e risultati errati. È anche fondamentale per selezionare VSD e v tale che la corrente è linearmente dipendente da VSD e indipendente di v. Se questo non è il caso, le equazioni descritte sopra non possono essere utilizzate per calcolare la conduttività.

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

M.D.Y, S.M.G-S. e LMT riconosce l'Office of Naval Research (premio #N0001415WX01038 e N0001415WX00195), il laboratorio di ricerca navale e l'Istituto di Nanoscienze di laboratorio di ricerca navale; M.Y.E.-N. è supportato da l'US Dipartimento di energia Grant DE-FG02-13ER16415.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
IDAsCH Instruments012125Prodotto da ALS-Japan; venduto da CH Instruments
Filo DigikeyW7-ND
Argento conduttivo epossidicoMicroscopia elettronica scienze 12670-EE
Materiale isolante3M2131-BComposto ritardante di fiamma Scotchast
15 mL provetta da centrifuga conicaVWR89004-368
ago da 21 gVWRBD-305165
puntali per pipette da 5 mLVWR82018-842
pipettatore da 5 mLVWR89079-976
Componenti del mezzo d'acqua dolceSigma AldrichTutti i prodotti chimici
      Cloruro
      Sodio fosfato monobasico
      Bicarbonato
Componenti medi artificiali per acqua di mareSigma AldrichTutti i prodotti chimici
      Cloruro di
      Cloruro di magnesio esaidrato
    Solfato di magnesio eptaidrato
    Cloruro di
      Bicarbonato
      Cloruro di calcio diidrato
    Cloruro
      Elettrodo
BasiMF-2079
Controelettrodo a barre in grafiteMicroscopia elettronicascienze 70230
Bagno d'acqua a ricircoloThermo Scientific152-5256
BipotenziostatoPine InstrumentsWD-20http://www.voltammetry.net/pine/aftermath/user
AncoretteVWR58947-114
G. sulfurreducens colturaATCC51573
Reattore incamiciatoPine InstrumentsRRPG085
di laboratorio standard di ammoniodi sodio di laboratorio standard sodio potassio di sodio di ammonio di riferimento Ag/AgCl bibasico fosfato di potassio

Riferimenti

  1. Boyd, D. A., et al. Biofilms in Bioelectrochemical Systems. , John Wiley & Sons, Inc. 177-210 (2015).
  2. Natan, M. J., Wrighton, M. S. Chemically modified microelectrode arrays. Prog Inorg Chem. 7, 391-494 (1990).
  3. Paul, E. W., Ricco, A. J., Wrighton, M. S. Resistance of polyaniline films as a function of electroc....

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Ristampe e permessi

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