מאמר זה מסביר את היישום של הדמיה פלואורסצנטי באמצעות בדיקת הדמיה אופטית activatable לדמיין את הפעילות vivo של metalloproteinases מטריצה מפתח בשני מודלים ניסיוניים שונים של דלקת.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
מאמר זה מתאר שיטה לא פולשנית metalloproteinases מטריצה הדמיה (MMP) - פעילות על ידי בדיקה פלואורסצנטי activatable, באמצעות in vivo פלואורסצנטי הדמיה אופטית (OI), בשני מודלים עכבר שונים של דלקת: דלקת מפרקים שגרונית (RA) ואיש קשר מודל תגובה רגישות (CHR). אור עם אורך גל בחלון אינפרא אדום הקרוב (NIR) 650 - 950 ננומטר) מאפשר חדירת רקמה עמוקה יותר וקליטה אות מינימלית לעומת אורכי גל מתחת 650 ננומטר. היתרונות העיקריים באמצעות פלואורסצנטי OI היא שזה זול, מהיר וקל ליישם דגמים שונים של בעלי חיים.
בדיקות ניטור Activatable הם שתיקה אופטית במדינות שלהם מומת, אבל להיות מאוד פלורסנט כאשר מופעל על ידי פרוטאז. הופעל MMPs להוביל להרס רקמות לשחק תפקיד חשוב להתקדמות המחלה בתגובות hyperersensitivity סוג מתעכב (DTHRs) כגון RA ו CHR. יתר על כן, MMPs הםאת פרוטאזות מפתח עבור סחוס העצם השפלה והם המושרה על ידי מקרופאגים, fibroblasts ו chondrocytes בתגובה לציטוקינים פרו דלקתיים. כאן אנו משתמשים בדיקה כי הוא מופעל על ידי MMPs מפתח כמו MMP-2, -3, -9 ו -13 ו לתאר פרוטוקול הדמיה עבור קרוב הקרינה אינפרא אדום OI של פעילות MMP ב RA ו עכברים שליטה 6 ימים לאחר אינדוקציה המחלה גם כן כמו בעכברים עם אקוטי (1x אתגר) וכרוני (5x אתגר) CHR על האוזן הימנית לעומת האוזניים בריא.
מבוא
מחלות אוטואימוניות כגון דלקת מפרקים שגרונית (RA) או vulgaris פסוריאזיס מדורגות כמו תגובות של רגישות יתר מסוג מתעכב (DTHRs). RA 1 היא מחלה אוטואימונית נפוצה המאופיינת סינוביטיס מכרסמת והרס המפרק. 2 דלקת מפרקים מוסתים להפגין חדירה והתפשטות של תאי דלקת, ביטוי מוגבר של תאי פרו-דלקתיים מובילים להיווצרות pannus, סחוס והרס עצם. מחשוף 3, 4 של מולקולות תא מטריקס, כגון קולגן על ידי metalloproteinases מטריצה (MMPs), הוא חיוני עבור המרת רקמות אנגיוגנזה וגורם הרס רקמות. 5, 6 תג....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים המתוארים במאמר זה, בעקבות הקווים המנחים והסטנדרטים הבינלאומיים של טיפול ושימוש בבעלי מעבדה, אושרו על ידי הוועדה המקומית לרווחת בעלי חיים ואתיקה של ועדת המדינה Tuebingen, גרמניה. 8 - 12 שבועות BALB / C ו C57BL / 6 עכברים נשמרו על 12 שעות: 12 שעות אור: מחזור כהה היו שוכנו IVCs ותנאים סביבתיים סטנדרטיים ב 22 ± 1 מעלות צלזיוס בקבוצות של 2 - 5 עם מים גישה למודעה .
1. הכנה חומרית
- לדלל את צבע OI עבור קרוב אינפרא אדום הדמיה פלואורסצנטי על פי גיליון הנתונים בה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כדי לגרום דלקת מפרקים שגרונית (RA) בעכברים BALB / ג נאיבי, חיות הוזרקו IP עם נוגדנים עצמיים (1: 1 דילול עם PBS 1x) נגד GPI ביום 0. הדלקת המרבי (הקרסול ונפיחות) ב GPI-סרום זה המושרה דגם RA הוא על הזרקה פוסט יום 6 11. לכן, 2 ננומול של צבע OI activatable הוכן והזריק iv ב וריד הזנב של עכברים מפרקים ובעלי חיים בריאים ביום 5. 24 שעות לאחר הזרקה (יום 6), עכברים היו מורדמים צלמו כמתואר בסעיף 3 ( איור 1A).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
OI הוא כלי מאוד שימושי, מהיר ולא יקר עבור פולשני בתחום ההדמיה המולקולרית vivo במחקר פרה-קליניים. חוסנה החברתי בפרט של OI הוא היכולת לנטר תהליכים דינמיים מאוד כמו תגובות דלקתיות. יתר על כן, OI מאפשר לעקוב אחר מהלך מחלה במשך תקופה ארוכה של זמן, החל מספר ימים עד שבועות.
יש OI מספר יתרונות על פני שיטות הדמיה vivo אחרים כגון טומוגרפיה פוזיטרונים-פליטה (PET) או הדמיה בתהודה מגנטית (MRI), כפי .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
אנו מודים דניאל Bukala, נטלי Altmeyer ו Funda קיי לקבלת תמיכה טכנית מעולה. אנו מודים יונתן גפן, גרג באודן ופול Soubiran לעריכת כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי ורנר סימנס-קרן והפקולטה לרפואה של אוניברסיטת טובינגן אברהרד Karls ( "" Promotionskolleg "") ועל ידי DFG דרך 156 CRC (C3 הפרויקט).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Cornergel | Gerhard Mann GmbH | 1224635 | משחת עיניים |
| Forene | Abbott GmbH | 4831850 | מזרק אינסולין איזופלורן |
| U40 | Becton Dickinson and Company | 324876 | |
| Heparin | Sintetica | 6093089 | |
| High-Med-PE 0.28 x 0.61 מ"מ | Reichelt Chemietechnik GmbH+Co | 28460 | צינורות פוליאתילן, קוטר פנימי 0.28 מ"מ, קוטר חיצוני 0.61 מ"מ |
| BD מחטי שיפוע רגילות, 30 גרם | בקטון דיקינסון ושות' בע"מ | 305106 צינורית הזרקה 30 גרם | |
| RTA-0011 איזופלורן וופורייזר | Vetland Medical Sales and Services LLC-Artagain | ||
| נייר ציור | Strathmore Artist | Paper 446-8 | פחם |
| שחור IVIS ספקטרום | פרקין אלמר | 124262 | מערכת הדמיה אופטית |
| BD מחטי שיפוע רגילות, 25 G | Becton Dickinson and Company | 305122 | |
| 2-כלורו-1,3,5-טריניטרובנזן | סיגמא אולדריץ' GmbH | 7987456F | TNCB |
| MMPense 680 | פרקין אלמר | NEV10126 | צבע הדמיה פלואורסצנטי |
| Oditest | Koreplin GmbH | C1X018 | מדידה מכנית |
| Miglyol 812 | SASOL-Oil | ||
| BALB/C, C57BL/6 | מעבדות צ'ארלס ריבר | - | עכברים המשמשים להתנסויות |
| PBS | Sigma Aldrich GmbH | לדילול סרום RA | |
| פיפטה (100 ומיקרו; L) | Eppendorf | משמש ליישום TNCB | |
| מכונת גילוח | וואהל | 9962 | גוזם שיער בעלי חיים |
| תמונה חיה | פרקין אלמר | תוכנת הדמיה למדידת OI |
מקורות
- Veale, D. J., Ritchlin, C., FitzGerald, O. Immunopathology of psoriasis and psoriatic arthritis. Ann Rheum Dis. 64, 26(2005).
- Harris, E. D. Rheumatoid arthritis. Pathophysiology and implications for therapy. N Engl J Med. 322 (18), 1277-1289 (1990).
- Lee, D. M....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
