Introduction
99m Tc остается доминирующим радиоизотопные используется в диагностической ядерной медицины, с более чем 50 миллионов процедур визуализации , проведенных за год во всем мире 1, 2, 3. Большинство 99m Tc агентов , используемых клинически являются радиофармпрепаратов типа перфузию. Есть ограниченное количество активно целевых соединений , в которых 99m Тс направлен связать конкретную биомаркером через лигирования к конструкции прицеливания. Создание целевых 99m Tc радиофармпрепаратов часто затруднено влиянием 99m Tc-лигандов комплексов на способность целевой молекулы , чтобы связать биомаркера интерес, или изотопы Период полураспада не достаточно долго для использования с более высокими биомолекул молекулярной массой такие как антитела. Последнее, как правило, требует нескольких дней, прежде чем изображения получены для того, чтобы биомолекулы, чтобы очистить от нецелевых Tiss ЕЭС России. Pre-нацеливание предлагает альтернативный подход для преодоления этих проблем.
Предварительно таргетирования в сочетании с биоортогональные реакции было показано, является эффективным способом для разработки новых зондов молекулярной визуализации как для флуоресценции и радио-томографии 4, 5, 6, 7, 8. Реакция обратного спроса электронный Дильса-Альдера (IEDDA) между 1,2,4,5-тетразин (TZ) и транс -cyclooctene (TCO) производных, как показано на рисунке 1, было показано, что особенно эффективным 6. Реакцию IEDDA с этими компонентами могут проявлять быструю кинетику в PBS (K 2 ≈ 6000 M -1 с -1) и высокой селективностью, что делает его идеальным для предварительного таргетинга приложений в естественных условиях 9, 10.
e_content "> Наиболее распространенным подходом включает введение ТСО полученный нацеливающего вектора и после достаточного периода задержки, радиоизотопный тетразин вводят. радиоактивно меченных тетразины на основе 11 C, 18 F, 64 Cu, 89 Zr и 111 In было сообщила 11, 12, 13, 14, 15. в отличие от этого , есть только один отчет о 99m Tc-меченого Тг, который был подготовлен с использованием типа лиганда ГНА , требующую использования сопутствующих лигандов для предотвращения связывания белка и деградации в естественных условиях 16. в качестве альтернативы, мы сообщаем здесь синтез 99m Tc (I) маркированы тетразины с использованием семейства лигандов , которые образуют стабильные тридентатные комплексы с [99m Tc (CO) 3] + ядро.Рисунок 1: bioorthogonal реакция IEDDA между тетразин и транс - -cyclooctene. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Семейство лигандов , приготовленных содержат тридентатные хелаты , которые различаются по полярности и от природы группы линкера между области связывания металла и Tz (рисунок 2). Цель состояла в том, чтобы идентифицировать 99m Tc-тетразин конструкция , которая может эффективно локализовать и реагировать с TCO-меченых участков в естественных условиях и быстро ясно , когда он не связан, с тем , чтобы принести высокую цель-к-нецелевых коэффициентов. Для тестирования лиганды, ТШО-производное бисфосфоната (ТСО-ВР) использовали 17. Ранее мы показали, что TCO-BP локализуется в областях активного костного метаболизма и может взаимодействовать срадиоактивномеченые тетразины в естественных условиях 18. Это удобный реагент для тестирования новых тетразины, так как он может быть получен в одну стадию, и эксперименты могут быть выполнены в нормальных мышей, где локализация происходит в первую очередь в суставах (колени и плечи).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Исследования на животных были одобрены советом животных по этике исследований в Университете МакМастер в соответствии с Канадским советом по уходу за животными (ССАС) руководящих принципов.
1. радиоактивной из Tz-тридентатных ЛИГАНДАМИ с 99m Tc
ВНИМАНИЕ: Следующие процедуры требуют использования радиоактивных соединений. Работа должна осуществляться только в лицензированной лаборатории с соблюдением техники безопасности и утилизации правил. Реакции Микроволновые следует проводить в микроволновой печи, специально предназначенных для химического синтеза.
- Синтез [99m Тс (СО) 3 (H 2 O) 3] + 19, 20
- В микроволновую ампулу смешайте 8 мг K 2 [BH 3 CO 2], 15 мг Na 2 CO 3, 20 мг Na 2 B 4 O 7 · 10H 2 O и 25 мг KOCO [СН (ОН)]2 COONa · 4H 2 O. Продуть флакон в течение 10 мин аргоном.
- Добавить 4 мл 99m TCO 4 - (~ 1,100 МБк, ~ 30 мКи) в 0,9% -ном солевом растворе в ампулу.
- Реакционную смесь нагревают в микроволновой печи в течение 3,5 мин при температуре 110 ° С после 10 с перемешиванием, чтобы обеспечить тщательное смешивание реагентов.
- Доводят рН раствора до 3,5-4 с помощью ~ 400 мкл 1 М HCl. Проверка с помощью рН бумаги.
- Радиоактивной из тетразин лигандов 1-5
- Растворите 2 мг каждого лиганда (соединения 1-5) в 250 мкл МеОН 21.
- Добавьте 250 мкл [99m Тс (СО) 3 (H 2 O) 3] + (~ 74 МБк, ~ 2 мКи) к каждому раствору.
- Реакционную смесь нагревают с помощью микроволнового течение 20 мин при 60 ° С.
Примечание: Этот шаг был одинаков для всех 5 тетразинов. - Для получения соединений 2- 5, выпарить растворитель и повторно dissolве полученных продуктов в 1 мл 1: 1 об / об ДХМ: ТФК.
- Нагреть растворенные продукты реакции (2-5) при 60 ° С в микроволновой печи в течение 6 мин (2-4) или 10 мин (5).
- После охлаждения до комнатной температуры, выпаривают растворитель , используя испаритель (36 ° С, 8 мбар, 3 мин, 6000 оборотов в минуту) и растворяют высушенный соединение в соотношении 1: 1 ACN: H 2 O или 1: 1 MeOH: H 2 O, перед очисткой ЖХВД.
- Очищают 99m Tc-меченого соединения (1-5), в том числе отделение меченого продукта от немеченого лиганда тетразин, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (C 18 с обращенной фазой). Как правило, используют градиент элюции 30:70 ACN: H 2 O (оба с 0,1% TFA) до 40:60 ACN: H 2 O в течение 20 мин (18 мин) и аналитической колонке C 18 4,6 х 100 мм. Использование в УФ-области (254 нм) и регистрации гамма.
- Возьмите небольшую пробу каждого меченого продукта и сравнить его время удерживания ВЭЖХ, что и со-инъекцected, нерадиоактивного, Re-меченого стандарта (0,125 мг в 20% метанол-H 2 O). Стандартный меченый Повторно идентифицируется в трассировке УФ - ВЭЖХ, и будет элюировать в то же самое время, что и 99m Tc-меченого соединения в γ-ВЭЖХ следа. Это совместное введение показывает пики при сравнимых временах удерживания, подтверждающие личность 99m Tc-меченого соединения.
- Выпаривают растворитель из фракций ВЭЖХ с использованием испарителя (36 ° C, 8 мбар, 3 мин, 6000 оборотов в минуту).
- Формулирование Очищенное соединение в концентрации 7,4 кБк / мкл в PBS, содержащем 0,5% БСА и 0,01% Tween-80.
- Для того, чтобы обеспечить меченые соединения стабильны, выполняют экстракорпорального исследование устойчивости в. Выдержите сформулированное соединение при 37 ° С в течение 1, 4 и 6 ч, вводя небольшое количество (3,7 МБк) смеси на ВЭЖХ в каждый момент времени для оценки стабильности.
2. Предварительно целенаправленные исследования Био-распределительные
- Использование 7-9-недельного возраста, женщины-BALB / C мышей (n = 3), введение ТСО-ВР сформулировали в физиологическом растворе (20 мг / кг) (5 мкг / мкл), с помощью в хвостовую вену.
- Поместите мышь в физическом устройстве удержания, а также определить вены, расположенные на боковых поверхностях хвоста и протереть тампоном, смоченным спиртом. По прошествии около 2 см от кончика хвоста, вставьте 30 иглы калибра под небольшим углом, параллельно вене. Медленно нажмите на поршень, чтобы впрыснуть, удалить иглу и не применять чистую марлевую губкой в месте инъекции с небольшим давлением до остановки кровотечения.
- Через 1 ч после инъекции TCO-BP, администрировать ~ 0,74 МБк (20 мкКи) из 99m Tc-тетразин Сформулированные в 100 мкл 0,5% БСА, 0,01% твин-80 в PBS, с помощью в хвостовую вену.
- Исследования Био-распределительные
- В желаемый момент времени (Т = 6 ч), анестезию мышей с использованием 3% изофлуран и 2% -ной смеси газообразного кислорода. Продемонстрировать ке снятие щепотка на наркозом мыши, чтобы гарантировать, что они находятся под хирургической плоскости анестезии.
- Собирают кровь (1 мл) с помощью пункции сердца с использованием шприца предварительно обработанной гепарином. Место мыши на спине с носом в носовом обтекателе для продолжения анестезии и найти мечевидного отростка на животном.
- Вставка 25 G иглу, слегка слева от средней линии животного под мечевидного отростка, под углом 20 °. Полностью вставить иглу, и медленно потяните на себя поршень, чтобы увидеть кровь в ступице иглы, если сердце проколоты. Слегка подрегулировать иглу, удерживая поршень, при необходимости, чтобы проколоть сердце. Медленно потянуть кровь в шприц.
- Эвтаназии животное шейным смещением, в то время как под анестезией.
- Поместите каждое животное в полиэтиленовый пакет и использовать дозы калибратор (99m Tc установка) для измерения весь уровень активности тела.
- Соберите следующие ткани и жидкости в предварительно взвешиватьред считая пробирки: кровь, кости (колено и плечо), желчного пузыря, почек, печени, желудка (с содержанием), тонкий кишечник (с содержанием), толстой кишки и слепой кишки (с содержимым), щитовидной железы и трахею, мочевой пузырь с мочой , и хвост.
- Промыть соответствующие ткани (за исключением крови, желчного пузыря и мочевого пузыря) в PBS, чтобы удалить кровь и промокните насухо перед размещением тканей в соответствующих счетных трубок.
- Поместите туши животного в полиэтиленовый пакет и измерить остаточную всю активность тела с использованием дозы калибратор.
- Взвесить каждую пробирку, содержащую образец ткани. Вычесть начальный вес трубы, чтобы получить массу ткани.
- Используйте дозы калибратор (99m Тс настройка) для измерения количества активности в исследуемом образце (100 мкл) в момент впрыска для каждой мыши.
Примечание: Образец теста равен объему впрыска, таким образом, давая счетчик активности в момент инъекции. - Во время измерения ткани, вliquot 5 мкл тестируемого образца, используемого ранее. Использование мульти-детектора гамма - счетчика (99m Tc настройка) и считать , чтобы получить значение в минуту (CPM) для испытуемого образца 5 мкл.
- С помощью двух значений , полученных в 2.2.9 и 2.2.10 , чтобы вычислить активность и отношения СРМ с помощью уравнения 1 , чтобы получить коэффициент преобразования (CPM мкКи -1).
(1)
- С помощью гамма-счетчика для измерения количества радиоактивности в каждом образце ткани или жидкости.
- С помощью уравнения 1, чтобы вычислить количество активности в каждой ткани или жидкости, во время измерения по отношению к общей вводили дозы. Это значение затем нормализовали по массе органа и выражают в процентном содержании вводили дозы на грамм (т.е.% ID / г) ткани.
- Выполните шаги 2.1.2 2.2.13 провести отрицательный контрольный эксперимент с использованием 99m Tc-меченых лигандов тетразин в Absenв.п. ТШО-BP. Жертвоприношение мышей (n = 3) в 0,5, 1, 4 и 6 ч после инъекции и получения ткани или жидкости, как описано выше.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Лиганды , были синтезированы с использованием различных сшивающих агентов и энтеросорбенты с помощью простого восстановительного аминирования стратегии (рисунок 2), за которой следует соединение продукта с коммерчески доступным тетразин 22, 23. Радиоактивной проводили с использованием того же метода для всех соединений и был хорошо воспроизводимым. Процесс был оптимизирован путем изменения рН, количество лиганда, времени реакции и температуры , после чего в 99m Tc-меченный радиоактивным изотопом соединения 1-5 были получены при умеренной до высокой радиохимический выход: 83% (1), 45% (2), 31% (3), 42% (4), и 54% (5). После очистки ВЭЖХ от непрореагировавшего лиганда и испарением с использованием выпарного аппарата, соединения были приготовлены в PBS, содержащий 0,5% БСА и 0,01% Tween80 перед инъекцией. Удельная активность р urified 99m Tc меченных тетразин составляла ~ 1,48 МБк / мкг. Были проведены исследования с целью оценки устойчивости 99m Tc-меченых лигандов тетразина до исследований в естественных условиях. Стабильность контролировали с помощью ВЭЖХ на 1, 4 и 6 ч без видимой деградации в течение 6 ч (R T = 14 мин), как показано на рисунке 3 для соединения 4 , в качестве примера.
Рисунок 2: Соединения 1-5 были получены с использованием различных линкеров (Y) и энтеросорбенты (X) , как показано (внизу). Все соединения меченый [99m Tc (CO) 3 (H 2 O) 3] + с использованием тех же условий реакции (верхний рисунок ), за исключением 1, который не требовал стадии (II).
"Рисунок 3" SRC = "/ файлы / ftp_upload / 55188 / 55188fig3.jpg" />
Рисунок 3: Результаты испытаний на стабильность с использованием соединения 4. γ-ВЭЖХ следов 4 , инкубированные в PBS при 37 ° С в течение 1, 4 и 6 ч.
Для тестирования в естественных условиях, были использованы здоровые BALB / C мышей. Вкратце, для каждого соединения, группы мышей (n = 3) вводили TCO-BP (100 мкл, 20 мг / кг), который с последующим введением 99м Тс-меченых соединений 1 ч позже. В 6 ч после инъекции 99m Tc комплексов, животных забивали и концентрации активности в различных тканях и жидкостях определяется. Полученные данные представлены как процент введенной дозы на грамм ткани (% ID / г) и показана на рисунке 4. Типичные отношения кости (колено или плечо) в крови для каждого из пяти 99m Tc-меченых соединений Tz приведены в таблице 1. Эти данные указывают на слрано , что соединение 3 при условии оптимальной таргетирования в сочетании с клиренсом из крови, и что существуют значительные различия между 99m Tc-меченых соединений в отношении локализации ткани вне цели. Исследование отрицательный контроль с использованием мышей CD1 (N = 3) проводили, где мышам вводили 99m Tc-тетразина лигандов при отсутствии ППО-BP. Мыши были умерщвлены на 0,5, 1, 4 и 6 ч и% ID / г определяли для всех тканей и жидкостей. Для всех исследованных соединений, где данные для соединения 2 представлена на рисунке 5, никакого существенного поглощения не был замечен в кости или других тканях (сердце, легких, селезенке, скелетных мышц) , не показанных на рисунке 4.
Рисунок 4. Результаты Био-распределения для 99m Tc-меченых производных тетразина 1-5 (бары IndicaТед). Данные, показанные были получены из выбранных тканей и жидкостей принято через 6 ч после инъекции меченых производных, и активность была нормализована к ткани или массы жидкости, а средний процент введенной дозы на грамм ткани или жидкости (% ID / г) ± SEM. Костные цели обозначены •. Примечание: Все остальные ткани не показаны имели средний% ID / г, что было меньше, чем 1%. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 5. Результаты Био-распределения для контрольного исследования с использованием 99m Tc-меченого тетразин (2) без предварительного впрыска TCO-BP. Данные , показанные были получены из выбранных тканей и жидкостей , взятых из 3 мышей через 0,5, 1, 4 и 6 ч после инъекции 2. Активность нормированы на ткани иливес жидкости, а средний процент вводили дозы на грамм ткани или жидкости (% ID / г) ± SEM. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
| Соединение | |||||
| соотношение | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Плечо: Кровь | 3.5: 1 | 3.5: 1 | 21: 1 | 7.8: 1 | 0,8: 1 |
| Колено: Кровь | 6.9: 1 | 5.6: 1 | 26: 1 | 12: 1 | 1,3: 1 |
Таблица 1. ткани костей: показатели крови , определяемые из исследований био-распределения.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Коллекция тетразина-сшитый тридентатных хелатов различной полярностью был подготовлен, и оценивали полезность их 99m Tc комплексов в реакции IEDDA с производным TCO в естественных условиях. Эффективная и воспроизводимый метод маркировки 99m Tc была разработана для пяти тетразин-хелатов, где концентрация лиганда 10 -3 М. Стадию мечение с последующим удалением защитной группы Т- бутиловых групп (для соединений , 2-5). Высокая концентрация лиганда использовали для улучшения радиохимический выход и сократить время реакции , которое сведено к минимуму деградацию тетразин 21. Продукт был выделен и отделен от немеченного лиганда и любых радиохимической примесей с помощью ВЭЖХ, в результате радиохимического выходами в диапазоне от 31-83%, при этом все они имеют> 99% радиохимической чистотой и высокой удельной активностью ~ 1,48 МБк / мкг. Все соединения, как было показано, быть стабильными в PBS, содержащим 0.5% БСА и 0,01% Tween80 на срок до 6 ч (рисунок 3).
Bisphosphonate соединения, такие как TCO-BP, локализуются в регионах активного костного метаболизма или травмы, которые включают в себя коленные и плечевые суставы у мышей. Поэтому TCO-BP обеспечивает простое средство для оценки эффективности новых меченных тетразинов для доставки изотопов в естественных условиях. Оценка биологического распределения всех пяти 99m Tc-тетразинов показали поглощение в коленных и плечевых суставов 6 ч после инъекции, демонстрируя успешное предварительно нацеливания кости в естественных условиях (рисунок 4). Предыдущие исследования подтвердили , что радиоактивно меченный ТСО-ВР накапливается в костной ткани 18, в то время как 99m Tc-тетразин конструкция (2) дано в одиночку не дает (рис 5). Это позволяет сделать вывод о том, что поглощение кости было связано с реакцией IEDDA.
Более липофильные конструкции 1 и 2 (1); 7,6 ± 2,7 (2)) и плечо (4,6 ± 1,4 (1); 4,8 ± 1,9 (2)). Высокие концентрации радиоактивности были также замечены в желчном пузыре, печени и кишечника, что согласуется с распределением липофильного 99m Tc-тетразин соединения 2 при отсутствии ППО-BP (рисунок 5). Другие нецелевые ткани и органы , такие как скелетные мышцы и селезенки не показали какого - либо существенного поглощения (<1%) , когда исследования био-распределения были выполнены на 99m Tc-тетразинов в отсутствии ППО-BP (Рисунок 5) , так что эти органы не были приняты для предварительной ориентации экспериментов. Кроме того, био-распределительные эксперименты с 99m Tc-только тетразинов показали хороший зазор от нецелевых тканей на 6 ч после инъекции. Следовательно, Тхис моментом времени, которое находится в пределах одной полураспада изотопа, был выбран в качестве временной точки для сравнения различных радиоактивно меченных лигандов тетразин.
Более полярный 99m Tc-тетразин соединение 3 , несущий PEG 5 линкер показали очень высокую колено и поглощение плеча (16,2 ± 4,8 и 20,7 ± 4,9 соответственно). Был также более низкая активность наблюдалась в печени и кишечнике. Соответствующий ПЭГ 10 производного также показали связывание с костью и снижение поглощения в печени по сравнению с соединениями 1 и 2. Наиболее полярная производным 5, показали более низкую кость связывания , чем все другие конструкции , которые, вероятно , из - за его быстрым выведением.
Высокое поглощение костной ткани и костной ткани: соотношение крови (таблица 1) , в частности для соединений 3 и 4 , показывают , что предварительно нацеливание и реакцию IEDDA может использоваться для LOCАлизе 99m Tc-меченых соединений в естественных условиях. Методы, описанные здесь, могут быть использованы для оценки любого радиоактивно тетразин включая следующее поколение Tc (I) тетразин лигандов. Следует отметить , что для класса лигандов , которые были использованы в этом исследовании, структуры могут быть легко изменена путем изменения природы групп - доноров и линкеров между комплексом металла и тетразин, без существенного изменения способа синтеза лиганда 21. После того, как свинец молекула идентифицируется, мгновенный метод набора, который, вероятно, включают в себя твердые методы очистки фазы, могут быть разработаны для поддержки клинического перевода.
В (I) комплексы Tc , указанные здесь , создают возможность для подготовки новых радиофармпрепаратов 99m Tc , используя широкий спектр различных TCO полученных ориентации молекул , включая антитела. Антитела, несмотря на их отличные свойства целеопределения до создания технеция помечены тетразинов, были бы не Typicсоюзницей использоваться с 99m Tc из - за их медленным выведением (дни), что намного больше , чем период полураспада изотопа (~ 6 ч). Дополнительное применение химии сообщили здесь в том , что тот же самый класс лигандов могут быть получены с бета - излучающими радионуклидами 186 Re и 188 Re. Изоструктурного Re (I), аналоги Тс (I) агентов при сочетании с опухолью ищет свойства TCO-BP может быть использован для лечения костных метастазов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Argon gas | Alphagaz | --- | --- |
| Na2CO3 | EMD Millipore | 106395 | --- |
| Na2B4O7·10H2O | Anachemia | S9640 | --- |
| KNaC4H4O6·4H2O | Anachemia | 217255 | --- |
| Technelite 99mTc generator | Lantheus medical imaging | --- | Source of 99mTcO4- |
| 0.9% Saline | Lantheus medical imaging | --- | To elute generator |
| 1 M HCl | Lab Chem | --- | --- |
| MeOH | Caledon | --- | --- |
| ACN | Caledon | --- | HPLC grade |
| Millipore H2O | Thermo Fisher Scientific | Barnstead Nanopure | --- |
| DCM | Caledon | --- | --- |
| TFA | Caledon | --- | --- |
| PBS | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | pH 7.4 1x |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | --- |
| Tween80 | Sigma Aldrich | P8047 | --- |
| Isoflurane | CDMV | 108737 | Supplier: Fresenius Kabi Animal Health |
| HPLC | Waters | 1525 Binary Pump, 2998 Photodiodde Array Detector, E-SAT/IN, Bioscan Flowcount PMT detector (item # 15590) | --- |
| HPLC column for analysis and purification of compounds 2-4 | Phenomenex | 00G-4435-E0 | Gemini® 5 µm C18 110 Å, LC Column 250 x 4.6 mm |
| HPLC column for analysis and purification of compounds 1 and 5 | Waters | 186003115 | XBridge BEH C18 Column, 130 Å, 5 µm, 4.6 mm x 100 mm |
| Microwave Reactor | Biotage | Initiator 8 | --- |
| Biotage V10 Evaporator | Biotage | Serial # V1041 | --- |
| Dose calibrator | Capintec, Inc. | CRC-25R | --- |
| Gamma counter | Perkin Elmer | Wizard 1470 Automatic Gamma Counter | --- |
| Animal room scale | Mettler Toledo | XP105 Delta Range | --- |
| Microwave vials | Biotage | 355629 | 0.5-2 mL |
References
- Jurisson, S. S., Lydon, J. D. Potential Technetium Small Molecule Radiopharmaceuticals. Chem. Rev. 99 (9), 2205-2218 (1999).
- Kluba, C. A., Mindt, T. L. Click-to-chelate: Development of Technetium and Rhenium-Tricarbonyl Labeled Radiopharmaceuticals. Molecules. 18, 3206-3226 (2013).
- Amato, I. Nuclear Medicines Conundrum. Chem. Eng. News. 87 (36), 58-70 (2009).
- Hnatowich, D. J., Virzi, F., Rusckowski, M. Investigations of Avidin and Biotin for Imaging Applications. J. Nucl. Med. 28 (8), 1294-1302 (1987).
- Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. Tetrazine Ligation: Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactivity. J. Am. Chem. Soc. 130 (41), 13518-13519 (2008).
- Devaraj, N. K., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. Tetrazine-Based Cycloadditions: Application to Pretargeted Live Cell Imaging. Bioconjugate Chem. 19 (12), 2297-2299 (2008).
- Rossin, R., et al. In Vivo Chemistry for Pretargeted Tumor Imaging in Live Mice. Angew. Chem., Int. Ed. 49 (19), 3375-3378 (2010).
- Zeglis, B. M., et al. Optimization of a Pretargeted Strategy for the PET Imaging of Colorectal Carcinoma via the Modulation of Radioligand Pharmacokinetics. Mol. Pharmaceutics. 12 (10), 3575-3587 (2015).
- Rossin, R., et al. Highly Reactive trans-Cyclooctene Tags with Improved Stability for Diels-Alder Chemistry in Living Systems. Bioconjugate Chem. 24 (7), 1210-1217 (2013).
- Rossin, R., Robillard, M. S. Pretargeted Imaging Using Bioorthogonal Chemistry in Mice. Curr. Opin. Chem. Biol. 21, 161-169 (2014).
- Denk, C., et al. Development of a 18F-Labeled Tetrazine with Favorable Pharmacokinetics for Bioorthogonal PET Imaging. Angew. Chem., Int. Ed. 53 (36), 9655-9659 (2014).
- Herth, M. M., Andersen, V. L., Lehel, S., Madsen, J., Knudsen, G. M., Kristensen, J. L. Development of a 11C-labeled Tetrazine for Rapid Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation. Chem. Commun. 49 (36), 3805-3807 (2013).
- Li, Z., et al. Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation for the Rapid Construction of 18F Labeled Probes. Chem. Commun. 46 (42), 8043 (2010).
- Nichols, B., Qin, Z., Yang, J., Vera, D. R., Devaraj, N. K. 68Ga Chelating Bioorthogonal Tetrazine Polymers for the Multistep Labeling of Cancer Biomarkers. Chem. Commun. 50 (40), 5215-5217 (2014).
- Zeglis, B. M., et al. A Pretargeted PET Imaging Strategy Based on Bioorthogonal Diels-Alder Click Chemistry. J. Nucl. Med. 54 (8), 1389-1396 (2013).
- García, M. F., et al. 99mTc-Bioorthogonal Click Chemistry Reagent for In Vivo Pretargeted Imaging. Bioorg. Med. Chem. 24 (6), 1209-1215 (2016).
- Russell, R. G. G. Bisphosphonates: The First 40 Years. Bone. 49 (1), 2-19 (2011).
- Yazdani, A., et al. A Bone-Seeking Trans-Cyclooctene for Pretargeting and Bioorthogonal Chemistry: A Proof of Concept Study Using 99mTc and 177Lu-Labeled Tetrazines. J. Med. Chem. , (2016).
- Alberto, R., et al. A Novel Organometallic Aqua Complex of Technetium for the Labeling of Biomolecules: Synthesis of [99mTc(OH2)3(CO)3]+ from [99mTcO4]- in Aqueous Solution and its Reaction with a Bifunctional Ligand. J. Am. Chem. Soc. 120 (31), 7987-7988 (1998).
- Alberto, R., Ortner, K., Wheatley, N., Schibli, R., Schubiger, A. P. Synthesis and properties of boranocarbonate: A convenient in situ CO source for the aqueous preparation of [99mTc(OH2)3(CO)3. J. Am. Chem. Soc. 123 (13), 3135-3136 (2001).
- Lu, G., et al. Synthesis and SAR of 99mTc/Re-labeled Small Molecule Prostate Specific Membrane Antigen Inhibitors with Novel Polar Chelates. Bioorg. Med. Chem. Lett. 23 (5), 1557-1563 (2013).
- Maresca, K. P., et al. Small Molecule Inhibitors of PSMA Incorporating Technetium-99m for Imaging Prostate Cancer: Effects of Chelate Design on Pharmacokinetics. Inorg. Chim. Acta. 389, 168-175 (2012).
- Bartholomä, M. D., et al. Insight into the Mode of Action of Re(CO)3 Thymidine Complexes. ChemMedChem. 5 (9), 1513-1529 (2010).
