Summary
בדיקות התנהגותיות הוא תקן הזהב להחלטה התוצאות הבאות פגיעה מוחית, והוא יכול לזהות נוכחות של נכויות התפתחותיות בתינוקות וילדים. רפלקסים נוירו-התפתחותי הם אינדיקטור מוקדם של ליקויים אלה. שורה של בדיקות רפלקס התפתחותי מושגת בקלות המכרסמת בילוד פותחו מתואר כאן.
Abstract
בדיקות רפלקס נוירו-התפתחותי הוא נפוץ בפרקטיקה הקלינית להעריך את ההתבגרות של מערכת העצבים. רפלקסים נוירו-התפתחותי גם מכונים רפלקסים פרימיטיביים כמו. הם רגישים עקביים עם תוצאות מאוחר יותר. רפלקסים לא תקינים אינם מתוארים היעדרות, התמדה, הופעתו מחדש, או שהייה של רפלקסים, אשר הנם מדדי ניבוי של תינוקות שנמצאים בסיכון גבוה להפרעות התפתחותיות. מודלים בבעלי חיים של מוגבלויות התפתחותיות, כגון שיתוק מוחין, לעתים קרובות להציג רפלקסים התפתחותי סוטה, כפי שניתן היה לצפות בתינוקות אנושיים. הטכניקות המתוארות להעריך מגוון רפלקסים התפתחותיות אצל חולדות ילודות. בדיקות רפלקס נוירו-התפתחותי מציע החוקר שיטת בדיקה שאינה זמינה אחרת בחיות כל כך צעיר. המתודולוגיה המוצגת כאן נועד לסייע לחוקרים בבחינת אבני דרך התפתחותיות אצל חולדות בילוד כשיטת br התחלה מוקדמת לגילויפציעת עין ו / או בקביעה האפקטיבית של התערבויות טיפוליות. המתודולוגיה המוצגת כאן נועדה לספק הנחיה כללית עבור חוקרים.
Introduction
רפלקסים נוירו-התפתחותי, או אבני דרך התפתחותיות, הם אחד להערכות המוקדמות בשימוש על תינוקות ופעוטות אנושיים. רפלקסים נוירולוגיות הן תנועות רצוניות וחוזר על עצמו כי להפגין גזע המוח ורפלקסים חוט השדרה. יישון של רשתות מוח עליונות מאופיינות מתפתח הגירה, מעטפת המיאלין, ו synaptogenesis לקדם שליטת רצונית ועיכוב קליפת המוח. שינויים בהתקדמות נורמלי של התפתחות מערכת העצבים המרכזית יכולים לשבש את התפתחות המוח, וכתוצאה מכך חיווט קליפת המוח נורמלי, התפקוד, וכן מעטפת המיאלין, גרימת עיכובים רפלקס התפתחותיות או היעדרויות. תינוקות אדם בסיכון גבוה עבור נכות נוירו-התפתחותיות לעתים קרובות להציג רפלקסים מוקדם נורמלים. רפלקסים תקינים יכולים להציג כמו עיכוב ברכישה, בהעדר, נוכחות ממושכת, או הופעתו מחדש בשלב מאוחר יותר בחיים, והם חזויים של נכויות התפתחותיות. 1, 2 לכןחשוב לחקות עיכובים רפלקס במודל ניסיוני של מוגבלויות התפתחותיות.
מכרסמים מועסקים בכינויו דגמים ניסיוניים. גורי חולדה הם חובשים קן כאשר נולדו, ולכן בשלה מדי להתחייב מנוע ספציפי או מורכב, חושיות ו / או משימות התנהגותית קוגניטיבית. בהקשר זה, בגרות התפתחותי שלהם מתייחסות הוא ההתפתחות הגופנית איבר שלהם. חולדות נולדות ללא שיער עם חוסר יכולת לווסת את חום גופו, עיוורות, ולא מסוגל ללכת. בהתייחס להתפתחות המוח, התבגרות קליפת המוח משמעותית מתרחשת לאחר הלידה. גורי חולדת יילוד (יום לידה המכונים ביום לידת 1; PD1) הוצע כדי להגיע לרמת הבשלת מוח דומה למוח אנושי פג של 23 - הריון 28 שבועות, בעוד PD7-10 גורים שקולי הכמעט מוחלט המוח האנושי מונח. 3, 4, 5, 6מתאם זה מבוסס על ניתוחי ברוטו אנטומיים, לעומת זאת, אמצעים אחרים של הבשלת המוח כגון פעילות מוח משולבת מעטפת המיאלין ואת משרעת גם תוארו. 5, 7 לדוגמה, טרום oligodendrocytes הם תאים השולט במוח העובר האנושי המתפתח מצינור 23 - 32 שבועות ברחם, ועל הבמה הבשלתית זו תואמת מכרסם PD1-3. 5, 8, 9, 10 יתר על כן, מעטפת המיאלין ברחם אצל בני אדם בעוד גורי חולדה נראה במוח הקדמי סביב PD7-10; מוח מכרסם היילוד נותר בלתי myelinated ברובו. 11, 12 טאקר ואח. נמצא כי דפוס אלקטרואנצפלוגרם משולב משרעת של חולדת P1 להיות דומה עלילות 23 שבועותהעובר האנושי tion, ואילו גור PD7 ו PD10 משול 30 - תינוק 32 שבוע ארוך, בהתאמה. 7 מסיבות אלה, בדיקות רפלקס היילוד ב גורי חולדה בילוד מספק הזדמנות עבור לכידת ontogeny ו / או שיבוש של התפתחות המוח.
הסוללה של רפלקסים המתוארים להלן מותאמת ממחקרים ידי WM פוקס וא Lubics 13, 14 WM פוקס היה אחד החוקרים המוקדמים ביחס ontogeny של רפלקסים את העכבר. 13 רפלקסים אלה כוללים, אך אינם מוגבלים, אחיזה הגפה הצבת, הימנעות צוק, ליישר, מואצת ליישר, ההליכה, בהלה שמיעתי, היציבה, ופתיחת העין. שניהם אחיזה forelimb ו hindlimb (המכונה אחיזה כַּפִי ו plantar בבני אדם, בהתאמה) הם הקלו על ידי רפלקסים השדרה ועיכוב corticospinal מאזורים מנוע שאינם ראשיים. 15, 16 הצבת Hindlimb (רפלקס בבינסקי) משקף הבשלה של מערכת corticospinal. 16, 17, 18 קליף הימנעות (תגובות מגן), ליישר (מבוך), מואצת ליישר לערב אינטגרציה ותקשורת בין קלט חושי ופלט מנוע (כגון המעורבים vibrissae ומערכות שיווי המשקל). 19, 20, 21 הילוך משקף תנועה. 14 בהלה שמיעתית מעריך גירוי אקוסטי קשרים סינפטיים של נוירונים ענקים בגרעין reticularis caudalis פונטיס. 21 יציבה כרוכה תחזיות קליפת מוח-שדרה מתאימות / שדרה-קליפת מוח, כוח שריר, עצבוב תוקף. 22, 23 מאturation של קולטנים -aminobutyric חומצת גאמא להיות מתואם עם פתיחת עין. 24 חשוב לזכור כי רפלקסים לשקף רשת הרבה יותר מסובכת הניתנים כאן הוא מתאם כללי. יתר על כן, רפלקסים אלה מספקים שיטה קלה ומהירה של הערכת התפתחות נוירולוגית בגיל צעיר ביותר שבו יותר מורכבות בדיקות התנהגותיות הן לא ריאליות.
מטרת מאמר זה היא לספק הנחיה כללית לבדיקות רפלקס התפתחותיות כי ניתן לשלב בקלות לתוך מחקרי עכברוש בילוד ניסיוני. המתודולוגיה המתוארת בוצעה גורי חולדה בילוד הארוך אוונס וכימות של התוצאות התבססה על היום הראשון של הופעה. היום זה רפלקס בדיקות יוזמות ומפעיל את הציוד המנוצל ניתן לשנות יותר כדי להתאים מודל ניסיוני שונה (כגון עבור זנים ומינים שונים). על ידי הקמת ההתקדמות הפיזיולוגית התקינה של שופטהתבגרות לקס במודל חיה ספציפית, החוקרים יכולים להעריך את ההשפעות של גורמי לחץ חיצוניים, מניפולציות אנדוגניים, ו / או התערבויות טיפוליות על התפתחות המוח במודלים של עכברים בילוד. בסך הכל, את השימוש רפלקסים כמו קביעה של בגרות המוח הוא יתרון בחיזוי פגיעה מוחית סביב הלידה, והוא משקף תוצאות התפתחותיות מאוחר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
טיפול בבעלי חיים ועדת שימוש, למדעי הבריאות באוניברסיטת אלברטה אישרה את כל הניסויים בבעלי חיים.
הערה: בעוד פרוטוקול זה יכול להיות מותאם מינים וזנים אחרים, פרוטוקול זה נכתב עבור חולדות לונג-אוונס. חולדות אלה הוכחו יש הופעות מנועות מעולות חדת ראייה לעומת זנים אחרים של מכרסמים. 25, 26 הפרוטוקול עבור הריונות מתוזמן, תוספי תזונה, דלקת אימהית, ורפלקסים התפתחותיות הוא כדלקמן.
1. בחיות מעבדה
- כאשר חולדות מגיעות למתקן דיור בעלי החיים, להימנע מכל אינטראקציה למשך יום או ימים כדי לאפשר להם להסתגל לסביבה החדשה שלהם. בעקבות התאקלמות, להתמודד עם חולדות בכל יום למשך כחמישה ימים, או כאשר החולדות הם כבר לא מראה סימנים של מתח. אדם בעקבות לחץ יכול לשנות את תוצאות הבדיקה ואת leמודעה לאובדן הריון.
- לאחר החולדות הן נוחות, רבייה מתחילה. מניחים שתי נקבות עכברים זכרים אחד בכלוב הרבייה קומתיים (h = 38 ס"מ, 1800 שטח רצפה ס"מ 2) לילה (3 PM - 8 בבוקר). כלובים אלה למנוע מתח צפיפות. בבוקר, בעזרת פיפטה העברה, לשטוף את הנרתיק של חולדות נקבות עם כ 0.25 מ"ל של תמיסת מלח. מעבירים את הפתרון לתוך צינור microcentrifuge.
- מניחים את שתי נשים וגבר בחזרה לתוך הכלובים קונבנציונאלי שלהם.
- הצגת הפתרון שנאסף בסעיף 1.2 תחת מיקרוסקופ אור (100X) כדי לקבוע באיזה שלב של מחזור ייחום החולדה חווה והאם זרע נוכח. אם יש זרע, להקליט את וחזרת היום עוברי (E1) (איור 1). אם בהריון, לתת הנקבה הכלוב שלה על E14.
הערה: התאים למרוח נרתיקית ברורים, ולכן משתמשים בהגדרה תאורה חלשה. ודא כי המעבה מותאם ההגדרה הנמוכה ביותר שלה. מוֹדָעָהרק שליטת הבהירות כדי לעמעם את האור. אם חיוג בהירות זמין, ולהגדיר אותו 1.
2. תוספי תזונה
הערה: פרוטוקול זה נועד להעריך את ההשפעות הטיפוליות של צריכה ניבט ברוקולי התזונתי במהלך השבוע האחרון של הריון. לגדל את הנבטים פי ואח 'וו. 27.
- משרים את הזרעים נבטי ברוקולי עבור 2 - h 3. מורחים את הזרעים על קופסת נבטים משטח זרע ולהגדיר על משטח חם עבור הנביטה.
- להשקות את הזרעים פעם ביום, פעם אחת בבוקר (8 - 9 בבוקר) ופעם בערב (3 - 4 PM).
- ביום חמש, למקם את נבטי ידי חלון ליום (צריך נבטים שני עלים בכל ויהפוך ירוק במהלך היום).
- בסוף היום, לקצור את הנבטי בעדינות על ידי משייכת נבטי ברוקולי מהקופסה המנופית ולהניח על משטח שטוח לייבוש.
- לאחר נבטים הם יבשים לחלוטין, wEigh מתוך 200 מ"ג ומכניסים לשקית ניילון אטומה.
- החל על E14, להאכיל כל מ"ג בהריון עכברוש 200 של נבטי ברוקולי יבשים מדי יום עד השעה PD21 (היום הגורים נגמלים).
3. דלקת
- כדי לגרום לדלקת לשכפל פגיעה בחומר הלבן בצאצאים, להזריק חולדות הרות עם lipopolysaccharide (LPS) כל 12 h על E19 ו E20. ביום הזרקת, להביא את הכלוב למעבדה ממתקן הדיור. אפשר חולדה בהריון להסתגל ולהיות רגוע עבור שעות לפחות 1. אם עכברוש מראה סימנים קליניים של ניזק מערכתי או כליות קבע, זה יהיה מורדם מייד והוציא מן המחקר.
- לשקול את הסכר בהריון.
- ממיסים 200 מיקרוגרם / ק"ג של LPS (סרוטיפ 0127: B8) ב 100 μL של מלוחים. לשאוב את הפתרון לתוך מזרק 1 מ"ל מצויד 30 G ½ מחט.
- שימוש במחט חדשה עבור כל זריקה. אפשר הפתרון להתחמם במשך כמה דקות כדי למזער אי נוחות.
- הקלט את הזמן להזריק הסכר בהריון intraperitoneally. זריקות חלופיות בין צדדים כדי להבטיח חלוקה שווה.
הערה: Machholz ואח. מתאר נהלי איפוק הזרקה נכונים. 28
4. בדיקות רפלקס התפתחותית
- ביום PD1 (יום הלידה), להסיר את הגורים מן משקלי לידה הסכר שיא. מניחים את הגורים בחזרה לתוך הכלובים שלהם ולהעביר אותם למתקן חיה עד PD3. הדבר מבטיח את קשר אימהי בין סכר גור.
- רשום את בדיקות רפלקס לאמידה אמינה. כוון את מצלמת וידאו כך שזה במהירות תריס מקסימלית עבור ניתוחים מסגרת לפי מסגרת (1/1000 ימים). מקם את מצלמת וידאו כך שזה ממש מעל או ליד גור עכברים וכל החומרים המשמשים עבור כל רפלקס. לדוגמא, עבור צבת hindlimb, למקם את המצלמה ליד גור החולדה כדי להבטיח את הרמה ואת הצבת hindlimb נלכדה.
- "פיצוי מואץ, למקם את המצלמה מעל גור חולדה מנחת כדי להקליט את היכולת של הגור ימני באוויר.
- משקולות שיא יומי עד לסוף הניסוי. ביום PD3, להתחיל בדיקות רפלקס התפתחותיות (איור 4). הזז הכלובים לחדר שקט למשך תקופה מינימלית של 1 שעות לפני הבדיקה, כדי לאפשר התאקלמות לסביבה.
- בצע בדיקות רפלקס התפתחותיות בכל פעם עקבית בכל יום כמו חולדות הם ליליות. לדוגמה, מבחן בין 9 AM - 12 PM יומי. שמור את הגורים ישירות תחת מנורת חימום או על גבי משטח חום בכל העת, כדי לשמור על טמפרטורת גוף יציבה של 36.5 מעלות צלזיוס; גורי חולדה בגיל זה לאבד חום בקלות. למדוד עם בדיקת טמפרטורה רקטלית. אם נעשה ביעילות, טמפרטורות גוף גורים אינן משנים כיוון שהם אינם מוסרים מן הסכר ההמלטה מספיק זמן. הערה: צג הטמפרטורה של מנורת חום כדי לוודא שהוא אינו עולה על 37 מעלות צלזיוס.
- forelimb אחזה
- החל על PD3, לבצע את הבדיקה רפלקס הלפיתה forelimb. מניח מוט בוטה נגד כל כף רגל קדמית ו להפעיל לחץ קל באופן ידני. לחץ האור צריך מעט לעקור בכפו כדי להבטיח מגע כי הוא עשוי ואת הגורים יכולים להרגיש את המוט. תאחז יופיע כמו כפיפה של כל הספרות סביב המוט. רכישה מוצלחת של רפלקס זה מתרחש כאשר רגליו הקדמיות הן לתפוס את מוט במשך יומיים ברציפות.
- ציון מאחיזתם forelimb:
0 ללא אחיזה
1 עבור אחיזה מוצלחת ידי בכפו אחד (שמאלה או right בכפו ניתן לציין כאן)
2 עבור אחיזה מוצלחת על ידי שתי כפות רגליו הקדמיות
- hindlimb אחזה
- החל על PD3, לבצע את הבדיקה רפלקס הלפיתה hindlimb. מניח מוט בוטה נגד הבלעדי של כל hindpaw ואת להפעיל לחץ קל באופן ידני. לחץ האור צריך מעט לעקור את hindpaw כדי להבטיח מגע כי הוא עשוי ואת הגורים יכולים להרגיש את המוט. אחיזה מוצלחת של המוט מופיעה כפיף של הספרות סביב המוט. רכישה מוצלחת של רפלקס זה מתרחש כאשר הן hindpaws לתפוס את מוט במשך יומיים ברציפות.
- ציון מאחיזתם hindlimb:
0 ללא אחיזה
1 עבור מוצלח אוחזת ידי hindpaw אחד (שמאלה או hindpaw תקין ניתן לציין כאן)
2 עבור אחיזה מוצלחת על ידי שני hindpaws
- "פיצוי
- החל על PD3, להתחיל בבדיקה רפלקס ליישר. היטב להחזיק את הגור במצב שכיבה, עם ארבע רגליים זקופה. עזוב oF הגור ומיד להפעיל את הטיימר. ליישר מושגת כאשר הגור הוא מסוגל להעיף / להתהפך על ארבע הרגליים, וכל כפה היא בניצב לגוף. תן לכל גור מקסימום של 15 s כדי להשיג מטרה זו.
- דרג את ליישר:
0 עבור שוכב על הגב (או 15 s בפעם שהוקצה מקסימלית)
1 עבור שוכב בצד (ניתן לציין שמאלה או בצד ימין כאן) או את היכולת של הגור לימין אך בתנוחה לא נכונה (או 15 s בפעם שהוקצה מקסימלית)
2 "פיצוי מוצלח יציבה מתאימה
- צבת hindlimb
- החל על PD4, להתחיל hindlimb הצבת מבחן רפלקס. החזק את הגור אנכי באוויר, על ידי פלג הגוף העליון. וליטף את dorsum של hindpaw עם משטח בוטה (כגון קצה של שולחן). רפלקס צבת נכון הוא כאשר גור העכברוש חזר בו hindlimb המגורה, ואחריו מיקום של hindlimb למטה באותו שטח.
- דרג את pl hindlimbacing רפלקס:
0 ללא הצלחה
1 עבור הצבת של hindpaw אחד (שמאלה או hindpaw תקין ניתן לציין כאן)
2 עבור הצבת hindlimb מוצלח עבור שני hindpaws
- קליף הימנעות
- החל על PD4, להתחיל את בדיקות למניעת המצוק. מניח את גור העכברוש בקצה משטח שטוח, כך הרגליים הקדמיות חוטם של הגור הם מעבר לקצה. התוצאה הנכונה היא תגובה מגן, שבו הגור עכברוש הופך הרחק בקצה הצוק. היד של הנסיין או נחיתת קצף מושם מתחת למצוק לתפוס את הגור מהנפילה.
- ציון סר צוק:
0 ללא תנועה או נפילה מהקצה
1 עבור ניסיונות להתרחק הצוק אבל עם גפיים תלויים
2 לתנועה מוצלחת מן הצוק
- הליכה
- בגין הערכת ההליכה על PD6. גורי מקום במרכז של diamet 15 סנטימטריםאה המעגל ולאפשר את הגור 30 s כדי להשלים את המשימה. 14 הילוך מוצלח מתבצע כאשר הגור החולדה הוא מסוגל לנוע שתי כפות רגליו הקדמיות מחוץ למעגל בפחות מ 30 s.
- דרג את ההליכה כמו הזמן בשניות שלוקח את גור העכברוש לנוע מחוץ למעגל. רשום את משך הזמן שלוקח את הגור לעבור שתי כפות רגליו הקדמיות מחוץ למעגל. שיא 30 s אם הגור אינו מסוגל להשלים את המשימה בתוך הזמן הנתון
- שמיעתי רתיעה
- בגין הניתוח של בהלה שמיעתית על PD10. הווה רעש חזק (פעמון) ישירות על הגור כדי להעריך אם תגובת בהלה נוכח. תגובה בהלה חיובית נצפתה כאשר הגור מציג תנועה "טלטול", הרחק את הצליל.
- דרג את הבהלה השמיעתית:
(או לא) ללא תגובה בהלה
(או כן) עבור תגובה בהלה חיובית
- יְצִיבָה
- בגין ניתוח יציב על PD12. גורי מקום על משטח פתוח שאינו חלקלק, ולבחון את היציבה את הגור יש בעת מעבר. ובתנוחה בשלה משתקפת על ידי גרירה של הבטן בעת מעבר, ומצביעים עלי בניצב של שתי כפות רגליו הקדמיות ו hindpaws ביחס לגוף. תנוחת בוגרת נרכשת כאשר הגור יכול להרים את הבטן מפני השטח ואת שני כפות רגליו קדמיות ו hindpaws הצביעו ישר, או מקבילה לגוף, בעת מעבר.
- דרג את היציבה:
0 ללא תנועה
1 עבור יציבה בשלה בעת מעבר
2 עבור יציבה בוגרת תוך כדי תנועה
- פותח עיניים
- בגין ניתוח מאיר עיניים על PD12. רשום את יום שני העפעפיים פתוחים:
0 ללא עיניים גלויות
1 עבור עין לעין אחת (ימין או שמאל ניתן לציין כאן)
2 עבור שתי עיניים גלויות
- בגין ניתוח מאיר עיניים על PD12. רשום את יום שני העפעפיים פתוחים:
- ליישר מואצת
- החל על PD14, להתחיל בדיקות ליישר מואצת. מניחים את הגור בתוך ג פרקדן עמדה 30.48entimeters מעל נחיתת קצף. זרוק את הגור ולבחון את יכולתו לתקן את עצמו. ליישר מתייחס כאשר הגור הוא מסוגל להתהפך למצב נוטה ולנחות על הכפות שלה.
- דרג את ליישר המואץ:
0 עבור נופל על גבו
1 עבור נופל על צידו (ימין או שמאל ניתן לציין כאן)
2 לנחיתה על כפותיו
הערה: סוגים שונים של כימות של רפלקסים זמינים תלוי בשאלת החוקרים. כימות של רפלקסים יכולה להיעשות כמו תצפית ראשונית של רפלקס, היום הראשון של הופעה עד להיעלמות של רפלקס, זמן שנדרש כדי לבצע את המשימה בהצלחה, מהירות ביצוע, ו / או שיפור של ביצועים לאורך זמן. 13, 14, 29, 30, 31 עבור גמחקר urrent, יום ההופעה הראשון שמש ציון. בעת שימוש במודלים חוזרים, גורים מאותה ההמלטה בדרך כלל מתנהגים באופן דומה בשל ההרכב הגנטי שלהם, ברחם וסביבה לאחר לידה, וזמינויות תזונתיות. 32 לכן, גור אחד לא יכול להיות היוו כ n = 1 עקב הטית המלטה. גורים בדקו בתוך חול יכולים להיות בממוצע, כך שכל המלטה מייצגת n = 1. 32, 33 לחלופין, כמה גורים בתוך אותה ההמלטה ניתן לנתח באמצעות מודל השפעות המעורבות, הלוקח בחשבון את גורים בתוך אותה ההמלטה. 32, 33
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ציר הזמן של תכנון הניסוי הזה מוצג באיור 2. 30 השיטות והתוצאות פורסמו בעבר. 30 מטרת המחקר הייתה להעריך האם תוספי תזונה עם נבטי ברוקולי במהלך הריון ותקופת preweaning מוגנים לצאצאים מן העיכוב התפתחותיות מושרה על ידי בחשיפה ברחם כדי LPS. חולדות הרות מתוזמן קיבלו זריקות intraperitoneal של מלוחים (שליטה, 100 μL) או LPS (200 מיקרוגרם / ק"ג מדולל 100 μL של תמיסת מלח סטרילית) על E19 ו E20 כל 12 h. אקראי סכרים בהריון שנבחרו גם קבלו תוספי תזונה של נבטי ברוקולי יבש (200 מ"ג / יום) מ E14 ל PD21. LPS שמש לחקות ניבטי דלקת וברוקולי אימהיים קבלו התערבות טיפולית פוטנציאל להגן על הצאצאים. גורים נולדו באופן טבעי על E23 (
משקלי לידה
ניתוח של משקלי לידה חשף ההשפעה העיקרית של הטיפול (F (1,23) = 18.5, 0.0003), דיאטה (F (1,23) = 6.5, p = 0.02), ואת אפקט אינטראקציה (F (1,23) = 7.4, p = 0.01). LPS, כבבואה של דלקת אימהית, ביאת גורים (5.1 ± 0.2 גרם) נולדו קטן יותר באופן משמעותי לעומת גורים מלוחים (6.3 ± 0.2 גרם, עמ 'של Tukey <0.001), מלוח + ברוקולי ניבט גורים (6.2 ± 0.2 גרם, עמ' של Tukey <0.001), ו LPS + הגורים נבטי ברוקולי (6.0 ± 0.1 גרם, עמ 'של Tukey <0.01). משקלי לידה של גורים נבטים LPS + ברוקולי היו לא שונה שולטת, מה שמרמז כי נבטי ברוקולי חסך את הגורים LPS מלהיות מוגבל צמיחה.
בדיקת רפלקס נוירו-התפתחותי
רפלקס אחזה
אין תופעות של טיפול או דיאטה נצפו הן forelimb וחמדנית hindlimb. כל הגורים היו מסוגלים לבצע משימות אלה.
צבת hindlimb
ההשפעה העיקרית של הטיפול (F (1,23) = 6.8, p = 0.02) זוהה עבור הצבת hindlimb. בהשוואה מלוחה (4.3 ± 0.1 ימים, p של Tukey <0.05) ו מלוח + נבטי ברוקולי (4.3 ± 0.0 ימים, p של Tukey <0.05), גורי LPS עוכבו באופן משמעותי (5.1 ± 0.3ימים). למרות הביצועים של גורים ניבטים LPS + ברוקולי לא היו שונים מזה גורי LPS, הם לא היו שונים שולטים, דבר המצביע על שיפור משימה רפלקס זה מאלה גורי קבלת LPS וללא טיפול.
קליף הימנעות
ההשפעה העיקרית של הטיפול (F (1,25) = 6.0, p = 0.02) בעקבות ניתוח הימנעות צוק זוהה. גורי LPS (5.8 ± 0.4 ימים) נפגעו באופן משמעותי בהשגת רפלקס זה לעומת מלוחים (4.4 ± 0.2 ימים, p של Tukey <0.05). גורי LPS + נבטי ברוקולי לא להתנהג באופן שונה מכל הקבוצות, דבר המצביע על שיפור בביצועים.
הליכה
השפעה משמעותית של טיפול (F (1,24) = 15.1, p = 0.0007), דיאטה (F (1,24) = 6.3, p = 0.02), וכן שארפעולה בין הטיפול ותזונה (F (1,24) = 9.5, p = 0.005) נמצאה הליכה בעקבות הניתוחים. רכישה לא מתעכבת על ההליכה זוהתה גורי LPS (9.7 ± 0.4 ימים) לעומת מלוחים (7.5 ± 0.3 ימים, p של Tukey <0.001), נבטי ברוקולי מלוח + (7.7 ± 0.3 ימים, p של Tukey <0.001), ו LPS + נבטים הגורים ברוקולי (7.9 ± 0.2 ימים, p של Tukey <0.01).
שמיעתי רתיעה
לא נצפו הבדלים.
"פיצוי
תופעת המין זוהה (F (1,43) = 16.3, p = 0.0002) "פיצוי, ולכן, זכר ונקבה הגורים נבדקו בנפרד. אין הבדלים אותרו עבור גברים. אצל נקבות, השפעה עיקרית של דיאטה (F (1,21) = 11.8, p = 0.002) ו אפקט אינטראקציה (F (1,21) = 15.6,p = 0.0007) נמצא. LPS + הגורים נבטי ברוקולי (4.9 ± 0.4 ימים) הצליחו תקין מוקדם לעומת גורים LPS (6.7 ± 0.6 ימים, p של Tukey <0.05).
ליישר מואצת
המבחן ליישר מואצת חשף השפעה עיקרית משמעותית של טיפול (F (1,25) = 4.51, p = 0.04). LPS (17.4 ± 0.6 ימים) ו LPS + גורים נבטיים ברוקולי (16.9 ± 0.2 ימים) בוצעו באיחור ביצועים מואץ ליישר לעומת מלוחים (16.0 ± 0.4 ימים) ו מלוח + נבטי ברוקולי (16.4 ± 0.5 ימים).
יְצִיבָה
אפקט אינטראקציה משמעותית של טיפול ותזונה (F (1,24) = 5.8, p = 0.02) זוהה בעקבות ניתוח של היציבה. LPS + ברוקולי ניבט גורים (14.9 ± 0.4 ימים) היו יציבים בוגר מוקדם יותר LPS (17.0 ± 0.4 ימים, p של Tukey <0.05).
פותח עיניים
השפעה עיקרית משמעותית של דיאטה (F (1,23) = 4.71, p = 0.04) נצפה לגבי פתיחת עין. שניהם המלוחה + BrSp (15.9 ± 0.1 ימים) ו LPS + גורים נבטיים ברוקולי (15.4 ± 0.2 ימים), משיגים רפלקס זה מוקדם יותר מלוח (16.0 ± 0.2 ימים) ואת גורי LPS (16.0 ± 0.1 ימים).
בסך הכל, צריכה ניבטו ברוקולי במהלך הריון מאוחר תקופת preweaning הייתה מסוגלת להרשות לעצמו הגנה מפני עיכובים התפתחותיים מושרים LPS בכמה רפלקסים נחקרו. עיין במאמר ההפניה לפרטים נוספים. 30
איור 1. Positive בנרתיק למרוח. דוגמא למרוח נרתיקית צלמה עם עדשה 10X אובייקטיבית על מיקרוסקופ אור. שקופית זו מייצגת שקופית חיובית שצוינה על ידי הנוכחות של זרע (חץ). בעת ביצוע למרוח בנרתיק, מחזור הייחום של עכברוש ניתן להעריך כמו גם proestrus, ייחום, metestrus, או diestrus. דבר זה מסייע תזמון הרבייה במדויק עבור שיעור הצלחה גבוה ההריון.
איור 2. ציר עיצוב ניסיוני. ציר הזמן הניסיון להערכה לצאצאים שנולדו סכרים נתוני זריקות intraperitoneal של LPS. תוספי תזונה עם נבטי ברוקולי מתחיל על E14 עד PD21. סכרים מוזרקים על E19 ו E20 בכל 12 שעות (מסומן כמו חיצים צהובים). משקולות אימהיות נרשמות עם סולם משקל טמפרטורת גוף עם בדיקה רקטלית טמפרטורה מכוסית חומר סיכה. גורים נולדים naturall y על E23 (מסומן בחץ שחור). החל על PD3, גורים עוברים בדיקות רפלקס מספר. ביום PD21, גורים עוברים את המבחן בשדה הפתוח כדי להעריך תגובות התנהגותיות.
איור 3. דוגמא Timeline עבור הערכה של רפלקסים נוירו-התפתחותי. רפלקסים להופיע בשלבים שונים של פיתוח, ובכך, לכידת רכישת רפלקסים אלה מחייבת בדיקה להתחיל כמה ימים לפני. מחקר זה השתמש גורי חולדה הארוך אוונס, אבל הבדלים בין זנים ומינים להתקיים, ולכן ניסוי ראשוני צריכה להתבצע על סמך תאריכים כהנחיה כללית. הבנת Forelimb, אחיזת hindlimb, וכן ליישר מוערך על PD3, הצבת hindlimb והימנעות צוק על PD4, ועל הליכה על PD6. בהלה שמיעה מוערכת על פתחי PD10, יציבים ואת העין על PD12, מואצת ליישר על PD14.
EP-together.within-page = "1"> 
איור 4. תמונות של התפתחותית רפלקסים. תמונות של בדיקות רפלקס שבוצעו על PD3 ב גורי חולדה ארוך אוונס. הבנת Forelimb (א), אחיזת hindlimb (B), ואת ליישר (ג) בדיקה מתחילה על PD3. הימנעות קליף (D), הטלת hindlimb (E) בדיקות מתחילות על PD4. הילוך (F) מנתח מתחיל על PD6. מנגנון "פיצוי המואץ מתואר (G). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
| פרמטר לבחינה | קבוצות (ממוצע ± SEM) | תופעות ראשיות (p-value) | |||||
| גודל ומשקולות זבל | מִלְחִית | נבטים מלוחים + ברוקולי | LPS | LPS + נבטי ברוקולי | יַחַס | דִיאֵטָה | אינטראקציה |
| גודל זבל (מספר הגורים) | 13.3 ± 1.0 | 13.1 ± 1.0 | 10.3 ± 1.5 | 11 ± 1.2 | 0.03 | 0.8 | 0.7 |
| משקלי לידה * # ד | 6.3 ± 0.2 | 6.2 ± 0.2 | 5.1 ± 0.2 | 6.0 ± 0.1 | .0003 | 0.02 | 0.01 |
| משקולות PD7 * ד | 15.0 ± 0.5 | 15.5 ± 0.4 | 11.4 ± 1.1 | 13.6 ± 0.3 | .0006 | 0.09 | 0.2 |
| משקולות PD21 ד | 50.0 ± 1.4 | 48.7 ± 1.6 | 46.4 ± 1.2 | 48.2 ± 1.4 | 0.2 | 0.9 | 0.3 |
| Neurodevelop- רפלקסים נפשי | |||||||
| הבנת Forelimb | 3.0 ± 0.0 | 3.0 ± 0.0 | 3.0 ± 0.0 | 3.0 ± 0.0 | n / a | n / a | n / a |
| הבנת Hindlimb | 3.6 ± 0.3 | 3.5 ± 0.3 | 4.6 ± 0.6 | 3.3 ± 0.1 | 0.3 | 0.1 | 0.1 |
| הצבת Hindlimb * A | 4.3 ± 0.1 | 4.3 ± 0.0 | 5.1 ± 0.3 | 4.5 ± 0.2 0.02 | 0.07 | 0.2 | |
| קליף הימנעות * A | 4.4 ± 0.2 | 4.7 ± 0.2 | 5.8 ± 0.4 | 5.0 ± 0.4 | 0.02 | 0.4 | 0.1 |
| הילוך * A # | 7.5 ± 0.3 | 7.7 ± 0.3 | 9.7 ± 0.4 | 7.9 ± 0.2 | .0007 | 0.02 | 0.005 |
| בהלה שמיעתית | 11.5 ± 0.3 | 11.5 ± 0.1 | 12.0 ± 0.5 | 11.8 ± 0.2 | 0.2 | 0.8 | 0.9 |
| תנוחת #A | 15.6 ± 0.5 | 15.9 ± 0.6 | 17.0 ± 0.4 | 14.9 ± 0.4 | 0.8 | 0.08 | 0.02 |
| פתחי עיניים | 16.0 ± 0.2 | 15.9 ± 0.1 | 16.0 ± 0.1 | 15.4 ± 0.2 | 0.08 | 0.04 | 0.2 |
| מואץ הנלחמים | 16.0 ± 0.4 | 16.4 ± 0.5 | 17.4 ± 0.6 | 16.9 ± 0.2 | 0.04 | 1 | 0.3 |
| "פיצוי #A (נקבות) | 4.9 ± 0.5 | 5.1 ± 0.4 | 6.7 ± 0.6 | 4.6 ± 0.4 | 0.09 | 0.003 | .0007 |
| נלחמים (זכרים) | 3.9 ± 0.2 | 4.6 ± 0.3 | 5.9 ± 1.9 | 4.2 ± 0.6 | 0.4 | 0.6 | 0.2 |
| יום של הופעה | * שונה באופן משמעותי בין LPS ו מלוח | ||||||
| מספר b פעילות פעמים בוצע | # שונה באופן משמעותי בין LPS ו LPS + BrSp | ||||||
| שניות ג | |||||||
| ד גרם | |||||||
משקולות בטבלה 1. ותוצאות רפלקס נוירו-התפתחותי. התוצאות שהתקבלו הצאצא חשוף לדלקת ברחם ו / או תוספי תזונה נבטי ברוקולי. 30 המשקלים שהוצגו כאן הם מלידה, PD7, ו PD21. נקודות הזמן נבחרו לייצג פגים, טווח, ו 1-2 בן תינוק. הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM. מחקרים סטטיסטיים מצביעים השתמשו במחקר היה ANOVA דו סטרי ואחריו מבחן פוסט הוק של Tukey.a = יום של ההופעה, B = מספר הפעמים הפעילות בוצעה, ו- C = הזמן (ים) בוצעה פעילות, * = הבדלים משמעותיים בין LPS ובקרה, # = הבדל משמעותי בין LPS ו LPS + נבטי ברוקולי. n = 5 - 7 המלטות לכל קבוצה (ערכים מארבעה גורים, שני זכרים ושתי נקבות, בתוך אשפה היו ממוצעים לייצג את ההמלטה).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בדיקות רפלקס נוירו-התפתחותי היא מדד חזוי של התפתחות קליפת מוח נורמלית והתבגרות, אשר עשוי להיות בעל משמעות בנסיבות שבן בנוירופתולוגיה הגלויה אינה ברורה. במהלך בדיקות התפתחותיות, הוא קריטי כדי להבטיח כי גורים נבחנים באותו הזמן יומי. חולדות הם ליליות ולכן, קצב היממה שלהם עלול לשנות את ביצועים אם בדיקות מתבצעות בזמנים שונים במהלך היום. 34 הבדיקה צריכה להתבצע בחדר שקט כמו רעשים חזקים יכולים להוסיף מתח על הגורים. 35 הגורים דורשים מינימום של 1 h להסתגל לסביבה החדשה, שכן תחבורה, טיפול אנושי, והגדרות רומן יכול לגרום ללחץ על הגורים. 35 גורים גם צריכים להיבדק ישירות מתחת לפנס מחומם או על משטח לוהט. הצעיר את הגורים, כך פוחתת היכולת שהם מסוגלים לווסת את חום גופו. 36 מסיבה זו, גורים מקבלים 15ים ו 30 ימים לביצוע ליישר על PD3 ועל ההליכה על PD6, בהתאמה. 36 בנוסף, גורים מלאים לא צריכה להיות מוגבל צמיחה כאשר נולדו, כמו משקל מהווה גורם בלבול. המלטות צריכות גם להיות ונבחרות עד 8 - 10 עד לספק מזון ושווה ועל יסוד נציגות של סקס. לאחר הגורים נולדים, חשוב לאפשר יום עבור החולדה ליצור קשר עם הסכר כדי למנוע הזנחה מצד האם.
גורים חייבים להיבדק יום או ימים לפני היום הם רוכשים את רפלקס כדי ללכוד את התחלתה של מראה. בהתאם לדגם הניסיוני, שינויים מסוימים עשויים להידרש. עכברים ילודים קטנים בהרבה חולדות. לכן, בגודל של הציוד המשמש עשויה להיות מותאם לגודל של עכברי היילוד. כמה מהכלים ייתכן גם שיהיה צורך. זנים ומינים שונים עשויים להיות עיתוי שונה במקצת של תחילת רפלקסים. 13 העיתוי המפורטים בדוח זה הנו ספציפיג גורים הארוך אוונס, עם בדיקות רפלקסים חדשים המתחילים ביום PD3, 4, 6, 10, 12, ו 14 (איור 3). החוקר ייתכן שיהיה צורך לבצע בדיקות רפלקס על 2 - 3 המלטות להקים את התקדמות רפלקס טבעי לפני בדיקה ניסיונית. יתר על כן, כאשר ניתוחים סטטיסטיים ביצוע על הנתונים שנאספו, הנסיין חייב להשתמש בטכניקות מתאימות כדי למנוע הטית המלטה. גורים מאותה ההמלטה נוטים לבצע באופן דומה לזה, ולכן ההמלטה מייצגת n = 1, לא את גור הפרט. 32, 33
בדיקת רפלקסים התפתחותיות חשובה כי הוא הבדיקה בלבד זמינה עבור מכרסמי יילוד, שכן בדיקות התנהגותיות מורכבות יותר אינן אפשריות בגילים אלה. אין אמצעים אחרים זמינים בתקופה הקדומה הזאת מלבד משקל ומראה פיזי. השיטות הניתן כאן כבר בשימוש על ידי מספר חוקרים, ובכך לתמוךשימוש בבדיקת רפלקס נוירולוגים, בעיקר מכרסמים צעירים שבו בדיקות התנהגותיות אחרות הם לא ריאליות. 13, 14, 29, 30, 31, 37, 38 בדיקות אלה במקביל רפלקס בדיקות שנערכו אצל תינוקות אנושיים, הם חזוי של הפרעות התפתחותיות כגון שיתוק מוחין, ולספק מידע נוסף לגבי ontogeny של רשתות עצביות. הופעה של רפלקסים מתרחש בשעות ספציפיות בתקופת preweaning, המשקף את ההתבגרות של מערכת העצבים. 39 מגבלה של פרוטוקול זה היא כי לא כל יכול להיות נתון דגמים ניסיוניים לרפלקס בדיקות. מכרסמים נולדים לא מפותחים, כך התפתחות הלידה שלהם מציעה את היתרון של לכידת תחילת הפיתוח רפלקס. במודלים של בעלי חיים אחרים כגוןכמו כבש נולדים להתבגר ולהשתנות באופן שונה מכרסמים, כך שחלק בדיקות רפלקס אינו ישים מודל זה. כמו כן, בדיקות רפלקס אינן מהווה מדד ישיר של פרעות קוגניטיביות או התנהגותיות, וכן לא ברור האם כל שהחריגויות הן חולפות או מתמשכות.
בנוסף רפלקסים, בדיקות התנהגותיות יכולות להתבצע עבור ניתוחים משלימים בגילים מבוגרים. זו היא בעלת חשיבות משום עיכובי רפלקס סוטים לא תמיד להוביל להפרעות התפתחותיות. 2, 40 הבדיקות בדרך כלל מנוהלים המתחילות ביום PD21 (יום גמילה) כאשר מכרסמים מסוגלים לבצע משימות קוגניטיביות ומוטוריות. בדיקות אלה כוללות בוט לא מוגבל rotarod, מבוך המים של מוריס, ועל מבוך פלוס גבוה. בקצרה, מבחן rotarod מתבצע על ידי צבת מכרסם על מוט מסתובב, והקלטת ביצועיו על המוט לתקופה של זמן או עד המפלים המכרסמיםכבוי. בדיקה זו מעריכה למידה מוטורית וכוח, כמו גם את היושרה של מבנים מוחיים כגון בגרעיני הבסיס במוח הקטן. 41 מבוך מי מוריס מורכב צבת המכרסמת בתוך שלולית של מים לבנים חלבי, והקלטת הזמן שלוקח למכרסם למצוא פלטפורמה שקועה. רמזים ניתן להציב מעל כל רביע של הברכה עם אותה האות תמיד מעל הפלטפורמה. זה בוחן אגוצנטרי vs צורות allocentric של הלמידה והזיכרון המרחביים בתיווך בהיפוקמפוס. 42 החשש וחרדת בדיקה המודדים הגבוהים פלוס מבוך, כמו גם התנהגות גישוש טבועה. מכרסמים ממוקמים במרכז ארבע זרועות, שתי סגורה והשנייה פתוח, מוגבה מעל פני הקרקע. 43 ההימנעות וההתנהגות חוקרת (הערך כמו משך זמן בכל יד) של המכרסמים נרשמים. 43 בדיקות נוספות אלו לבחון sensorimotor ותפקוד קוגניטיבי, המאפשר לחוקר בשםsess אם העלבון נמשך אל בגרות, או אם זה חולף.
עיכובים התפתחותיים הם חזויים, ובדיקת התנהגותית משלימה נדרשת לספק ראיות משלימות עבור בנוכחות הפרעה בשלב מאוחר יותר בחיים. בנוסף, תגובות שליטה חייבות להיות מותאמות לפני להתנסות עם הבדלי זן ומינים, שינויים גנטיים, מנהל תרופות, וכו 'למרות תנאים אלה, הטכניקות המתוארות נלמדות במהירות, שולטות בקלות, זול, ולספק מידע חשוב לגבי ההתפתחות מערכת עצבים. הם מציעים הזדמנות להעריך את ontogeny והתבגרות של מערכת העצבים גורים בגיל שבו הם אינם מסוגלים לבצע משימות התנהגותיות בוגרת. יתר על כן, תינוקות אנושיים קרובים עוברים בדיקת רפלקס התפתחותית, ובכך, בדיקות מכרסמות רפלקס מספקים אמצעי translatability. לסיכום, זוהי שיטה מצוינת עבור סינון ראשוני של חריגההתפתחות נוירולוגית של היילוד שיכולה להוביל לחקירה מאוחר יותר של קוגניציה והתנהגות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
החוקרים אין לחשוף.
Acknowledgments
המחברים מבקשים להודות סוכנויות מימון שלנו, הכוללים NeuroDevNet (א מרכזי לאומי של מצוינות), קרן ALVA, של נשים ושל המכון לחקר בריאות ילדים, ואת אוניברסיטת אלברטה.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Breeding | |||
| Transfer pipettes | Fisherbrand | 12-711-9AM | Used for vaginal flushes. |
| Sterile Saline | Hospira | 7983254 | The solution used to collect cells during vaginal flushes. |
| 400 µL Microcentrifuge tubes | Fisherbrand | 05-408-120 | Used to hold the saline solution. |
| Light microscope | Leica | Leica ATC 2000 | For observation of the saline solution. Can be any light microscope used in the lab. |
| Slides | Fisherbrand | 12-552-5 | The saline solution is placed on the slide. Can be any slides used in the lab. |
| Coverslips | Fisherbrand | 12-545-F | To coverslip the slides. Can use any coverslips used in the lab. |
| Dietary Supplementation | |||
| Broccoli Sprouts seeds | Mumm's Sprouting Seeds | Broccoli sprouts seeds are ordered and grown in the lab. | |
| Countertop Seed Sprouter Box | Mumm's Sprouting Seeds | A box is used to germinate and grow the seeds prior to harvest. | |
| 250 mL beaker | The beaker is used to soak the seed. Any size beaker that would fit can be used. | ||
| Maternal Inflammation | |||
| Lipoplysaccharide (LPS) | Sigma | L3129 | The endotoxin used to mimic maternal inflammation. |
| 1 mL Syringe | BD Syringe | 309659 | Used to inject the pregnant rat. |
| Gauge (30 G x 1/2) | BD PrecisionGlide Needle | 305106 | Use the smallest needle to avoid pain and discomfort. |
| Sterile Saline (0.9% Sodium Chloride, USP) | Hospira | Saline is used to dissolve LPS. | |
| Weights | |||
| Scale | Denver Instrument | For recording the weights. Can be any scale with 2 decimal places used in the lab. | |
| Neurodevelopmental Reflexes | |||
| Thin blunt rod | Can be a paperclip or toothpick. This is for forelimb and hindlimb grasping. | ||
| Round filter paper | Whatman | 1001 150 | 15 cm diameter paper used for gait analysis. |
| Timer | Fisher Scientific | 06-662-51 | For timing the time allocated to righting and gait. |
| Blunt surface | Can be an edge of a table. This is for hindlimb placing and cliff avoidance. | ||
| Foam landing | For when the pups perform accelerated righting. | ||
| Video recorder | Sony | VCT-D580RM | To record all reflexes tested. Must be able to record at 1/1,000 fps |
| Bell | For auditory startle. | ||
| Heat lamp or pad | To maintain the body temperature of the pups underoing examination. |
References
- Farber, J. M., Shapiro, B. K., Palmer, F. B., Capute, A. J. The diagnostic value of the neurodevelopmental examination. Clin Pediatr (Phila. 24 (7), 367-372 (1985).
- Zafeiriou, D. I. Primitive reflexes and postural reactions in the neurodevelopmental examination). Pediatr. Neurol. 31 (1), 1-8 (2004).
- Clancy, B., Finlay, B. L., Darlington, R. B., Anand, K. J. S. Extrapolating brain development from experimental species to humans. Neurotoxicology. 28 (5), 931-937 (2007).
- Dobbing, J., Sands, J.
- Semple, B. D., Blomgren, K., Gimlin, K., Ferriero, D. M., Noble-Haeusslein, L. J. Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species. Prog. Neurobiol. , (2013).
- Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch. Dis. Child. 48 (10), 757-767 (1973).
- Tucker, A. M., Aquilina, K., Chakkarapani, E., Hobbs, C. E., Thoresen, M. Development of amplitude-integrated electroencephalography and interburst interval in the rat. Pediatr. Res. 65 (1), 62-66 (2009).
- Dean, J. M., et al. Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with. Dev. Neurosci. 33 (3-4), 251-260 (2011).
- Back, S. A., Riddle, A., McClure, M. M. Maturation-dependent vulnerability of perinatal white matter in premature birth. Stroke. 38, 724-730 (2007).
- Back, S. A., et al. Late oligodendrocyte progenitors coincide with the developmental window of vulnerability for human perinatal white matter injury. J. Neurosci. 21 (4), 1302-1312 (2001).
- Downes, N., Mullins, P.
- Jakovcevski, I., Filipovic, R., Mo, Z., Rakic, S., Zecevic, N. Oligodendrocyte development and the onset of myelination in the human fetal brain. Front. Neuroanat. 3 (5), (2009).
- Fox, W. M. Reflex-ontogeny and behavioural development of the mouse. Anim. Behav. 13 (2), 234-241 (1965).
- Lubics, A., et al. Neurological reflexes and early motor behavior in rats subjected to neonatal hypoxic-ischemic injury. Behav. Brain Res. 157 (1), 157-165 (2005).
- Futagi, Y., Toribe, Y., Suzuki, Y. The grasp reflex and moro reflex in infants: hierarchy of primitive reflex responses. Int. J. Pediatr. , 191562 (2012).
- Hashimoto, R., Tanaka, Y. Contribution of the supplementary motor area and anterior cingulate gyrus to pathological grasping phenomena. Eur. Neurol. 40 (3), 151-158 (1998).
- Isaza Jaramillo, S. P., et al. Accuracy of the Babinski sign in the identification of pyramidal tract dysfunction. J. Neurol. Sci. 343 (1-2), 66-68 (2014).
- Donatelle, J. M. Growth of the corticospinal tract and the development of placing reactions in the postnatal rat. J. Comp. Neurol. 175 (2), 207-231 (1977).
- Palanza, P., Parmigiani, S., vom Saal, F. S. Effects of Prenatal Exposure to Low Doses of Diethylstilbestrol, o,p'DDT and Methoxychlor on Postnatal Growth and Neurobehavioral Development in Male and Female Mice. Horm. Behav. 40 (2), 252-265 (2001).
- Pantaleoni, G. C., et al. Effects of maternal exposure to polychlorobiphenyls (PCBs) on F1 generation behavior in the rat. Fundam. Appl. Toxicol. 11 (3), 440-449 (1988).
- Yeomans, J. S., Frankland, P. W. The acoustic startle reflex: neurons and connections. Brain Res. Rev. 21 (3), 301-314 (1995).
- Vinay, L., Brocard, F., Clarac, F. Differential maturation of motoneurons innervating ankle flexor and extensor muscles in the neonatal rat. Eur. J. Neurosci. 12 (12), 4562-4566 (2000).
- Geisler, H. C., Westerga, J., Gramsbergen, A.
- Heinen, K., et al. Gabaa receptor maturation in relation to eye opening in the rat visual cortex). Neuroscience. 124 (1), 161-171 (2004).
- Whishaw, I. Q., Gorny, B., Foroud, A., Kleim, J. A. Long-Evans and Sprague-Dawley rats have similar skilled reaching success and limb representations in motor cortex but different movements: some cautionary insights into the selection of rat strains for neurobiological motor research. Behav. Brain Res. 145 (1-2), 221-232 (2003).
- Prusky, G. T., Harker, K. T., Douglas, R. M., Whishaw, I. Q. Variation in visual acuity within pigmented, and between pigmented and albino rat strains. Behav. Brain Res. 136 (2), 339-348 (2002).
- Wu, L., et al. Dietary approach to attenuate oxidative stress, hypertension, and inflammation in the cardiovascular system. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (18), 7094-7099 (2004).
- Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and. J. Vis. Exp. (67), (2012).
- Rousset, C. I., et al. Maternal exposure to lipopolysaccharide leads to transient motor dysfunction in neonatal rats. Dev. Neurosci. 35 (2-3), 172-181 (2013).
- Nguyen, A. T., Bahry, A. M. A., Shen, K. Q., Armstrong, E. A., Yager, J. Y. Consumption of broccoli sprouts during late gestation and lactation confers protection against developmental delay induced by maternal inflammation. Behav. Brain Res. 307, 239-249 (2016).
- Black, A. M., Armstrong, E. A., Scott, O., Juurlink, B. J., Yager, J. Y. Broccoli sprout supplementation during pregnancy prevents brain injury in the newborn rat following placental insufficiency. Behav. Brain Res. 291, 289-298 (2015).
- Wainwright, P. E. Issues of design and analysis relating to the use of multiparous species in developmental nutritional studies. J. Nutr. 128 (3), 661-663 (1998).
- Lazic, S. E., Essioux, L. Improving basic and translational science by accounting for litter-to-litter variation in animal models. BMC Neurosci. 14, 14-37 (2013).
- Sergio, D. P., Sanchez, S., Ruben, V. R., Ana, B. R., Barriga, C. Changes in behaviour and in the circadian rhythms of melatonin and corticosterone in rats subjected to a forced-swimming test. J Appl Biomed. 1 (47), (2005).
- Castelhano-Carlos, M., Baumans, V. The impact of light, noise, cage cleaning and in-house transport on welfare and stress of laboratory rats. Lab. Anim. 43 (4), 311-327 (2009).
- Zimmerberg, B., Ballard, G. A., Riley, E. P. The development of thermoregulation after prenatal exposure to alcohol in rats. Psychopharmacology (Berl. 91 (4), 479-484 (1987).
- Fan, L. W., et al. Hypoxia-ischemia induced neurological dysfunction and brain injury in the neonatal rat). Behav. Brain Res. 165 (1), 80-90 (2005).
- Smart, J. L., Dobbing, J. Vulnerability of developing brain. VI. Relative effects of foetal and early postnatal undernutrition on reflex ontogeny and development of behaviour in the rat. Brain Res. 33 (2), 303-314 (1971).
- Fox, M. W. Neuro-Behavioral ontogeny: A synthesis of ethological and neurophysiological concepts. Brain Res. 2 (1), 3-20 (1966).
- Piper, M. C., Mazer, B., Silver, K. M., Ramsay, M. Resolution of neurological symptoms in high-risk infants during the first two years of life. Dev. Med. Child Neurol. 30 (1), 26-35 (1988).
- Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J. Neurosci. Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
- Vorhees, C. V., Williams, M. T. Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nat. Protoc. 1 (2), 848-858 (2006).
- Walf, A. A., Frye, C. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nat. Protoc. 2 (2), 322-328 (2007).
