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Article de méthode

Actionneur à base de cellules musculaires cardiaques et Biorobot auto-stabilisant - Partie 2

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DOI :

10.3791/55643

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9 mai 2017

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* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Dans cette étude, un actionneur biologique et un biorobot de stabilisation auto-stabilisable avec des bras en porte-à-faux élastomères fonctionnalisés sont ensemencés avec des cardiomyocytes, cultivés et caractérisés pour leurs propriétés biochimiques et biomécaniques au fil du temps.

Résumé

Au cours des dernières années, des dispositifs hybrides constitués d'une cellule vivante ou d'un composant tissulaire intégré à un squelette mécanique synthétique ont été développés. Ces appareils, appelés biorobots, sont alimentés uniquement par la force générée par l'activité contractile du composant vivant et, en raison de leurs nombreux avantages inhérents, pourrait être une alternative aux robots conventionnels entièrement artificiels. Ici, nous décrivons les méthodes de semence et de caractérisation d'un actionneur biologique et d'un biorobot qui a été conçu, fabriqué et fonctionnalisé dans la première partie de cet article en deux parties. L'actionneur biologique fabriqué et les dispositifs de biorobot composés d'une base de polydiméthylsiloxane (PDMS) et d'un cantilever à film mince ont été fonctionnalisés pour la fixation de cellules avec la fibronectine. Après la fonctionnalisation, les cardiomyocytes néonatals de rat ont été ensemencés sur le bras en porte-à-faux PDMS à haute densité, ce qui a donné lieu à une feuille cellulaire confluente. Les appareils ont été imagés tous les jours et le mouvement du cantiLes bras de levier ont été analysés. Le deuxième jour après l'ensemencement, nous avons observé la flexion des bras en porte-à-faux en raison des forces exercées par les cellules pendant les contractions spontanées. Lors de l'analyse quantitative de la flexion en porte-à-faux, une augmentation graduelle du stress superficiel exercée par les cellules au fur et à mesure de leur maturation au cours du temps a été observée. De même, nous avons observé le mouvement du biorobot en raison de l'actionnement du bras en porte-à-faux PDMS, qui a agi comme une aileron. Lors de la quantification des profils de natation des dispositifs, on a observé différents modes de propulsion qui ont été influencés par l'angle de repos de la nageoire. La direction du mouvement et la fréquence de battement ont également été déterminées par l'angle de repos de l'aileron et une vitesse de nage maximale de 142 μm / s a ​​été observée. Dans ce manuscrit, nous décrivons la procédure pour peupler les dispositifs fabriqués avec des cardiomyocytes, ainsi que pour l'évaluation de l'actionneur biologique et de l'activité de biorobot.

Introduction

Les Biorobots sont des dispositifs basés sur des cellules vivantes qui sont incorporées dans un squelette mécanique qui est habituellement composé de matériaux doux et élastiques tels que PDMS ou hydrogels 1 . Les cellules subissent des contractions rythmiques, soit spontanément, soit en réponse à des stimuli, et fonctionnent ainsi comme actionneur. La puissance générée par la contraction des cellules entraîne différents biorobots. Les cellules cardiaques de mammifères (cardiomyocytes) et les cellules musculaires squelettiques sont souvent utilisées pour l'actionnement de biorobot en raison de leurs propriétés contractiles. Outre les cellu....

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Protocole

Toutes les procédures décrites ici ont été menées à l'aide d'un protocole approuvé et conformément aux règlements du Comité institutionnel pour les soins et l'utilisation des animaux de l'Université de Notre Dame.

1. Semence cellulaire et culture

  1. Avant de commencer, préparez les éléments requis: un petit entonnoir, des pipettes et un milieu Eagle Eagle modifié par Dulbecco complété par 10% de sérum bovin fœtal (FBS) et 1% d'antibiotique pénicilline (DMEM complet).
  2. Prenez les flacons T-25 avec le dispositif fonctionnalisé (actionneur biologique ou biorobot). Reportez-vous à la section 4 de la partie....

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Résultats

L'actionneur biologique constitué d'un mince PDMS en porte-à-faux (25 μm d'épaisseur) et de cardiomyocytes constitue le noyau de la natation biorobot, comme le montrent les schéma et la capture d'écran des dispositifs de la figure 1 . Les cellules commencent à présenter des contractions après 24 h en culture et la flexion des bras en porte-à-faux a été observée au jour 2. Le profil latéral de l'appareil a été enregistré tous les jours et le stress sup.......

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Discussion

La procédure décrite ici décrit une méthode d'ensemencement réussie pour les actionneurs et les biorobots à base de PDMS, ce qui facilite la fixation de cardiomyocytes. En outre, le processus d'acquisition d'image et l'analyse ultérieure qui caractérise le comportement des cellules et la performance des appareils ont été décrits.

Nous avons observé une contraction spontanée des cellules sur les bras en porte-à-faux après 24 h; L'intensité des contractions a continué à aug.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n'ont rien à dévoiler.

Remerciements

MT Holley est soutenu par le programme Graduate Fellows du Louisiana Board of Regents, et C. Danielson est soutenu par le Howard Hughes Medical Institute Professors Program. Cette étude est soutenue par NSF Grant No: 1530884.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Produits chimiques et réactifs
Cardiomyocytes (cellules cardiaques primaires)Charles RiverNAIsolé chez des rats Sprague Dawley nouveau-nés âgés de 2 jours
Dulbecco' s aigle modifié' s milieu (DMEM)Hyclone Laboratories16750-074avec 4500 mg/L de glucose, 4,0 mM de L-glutamine et 110 mg/L de pyruvate de sodium
Sérum Fetalclone IIIHyclone industries, GE16777-240Sérum de bovin fœtal (FBS)
Dulbecco' s tampon phosphate (PBS)Sigma-AldrichD1408-100ML
Pénicilline-G sel sodiqueSigma-AldrichP3032
Sérum de chèvreSigma-AldrichG9023
4,6-diamidino-2-phénylindole dihydrocholride en poudre (DAPI)Sigma-AldrichD9542
Fibronectine du plasma bovinSigma-AldrichF1141Solution (1 mg/ ml)
Kit de calcéine-AM et d’homodimère-1 d’éthidium (dosage vivant/mort)Sondes moléculairesL3224
Calcium Fluo-4, Sondes moléculaires AMF14217Colorant indicateur de calcium
saline TyrodestamponSigma-AldrichT2397
Sondes moléculairesPluronic F-127P3000MPsolution de tensioactif non ionique à 20 % dans du diméthylsiloxane (DMSO)
16 % ParafomaldéhydeMicroscopie électronique15710Attention : Irritant et combustible
Triton x-100Sigma-AldrichX-100 100 mLlyses cellulaires détergent, (4-(1,1,3,3-Tétraméthylbutyl)phényl-polyéthylène glycol, t-Octylphénoxypolyéthoxyéthanol, Polyéthylène glycol tert-octylphényléther
Sondes moléculairesAlexa Fluor 594 PhalloïdineA12381Marqueur de filament d’actine
Anticorps secondaire IgG (H+L) anti-lapin de chèvre, Sondes moléculaires conjuguées Alexa Fluor 594A-11012
phaSondes moléculairesA-11001
Anticorps anti-connexine 43Abcamab11370Marqueur de jonction lacunaire
Anti-troponine cardiaque I anticorpsAbcamab10231Protéine contractile
16 % EM grade solution de paraformaldéhydeMicroscopie électronique100503-916
Polydiméthylsiloxane (PDMS)ElsevierSylgard 184
Materials and Equipment
CameraThor LabsDCC1545M
lumière LED bandeNANAN’importe quelle LED blanche sans émission de spectre
Microscope confocalNikkon C2NAMicroscope confocal avec jeu de trois filtres.
Objectif zoomInfinityModel# 252120
Software
MatlabMathworksNAUtilisé dans la section 4) pour l’analyse des actionneurs biologiques.
Image JNational Institute of HealthNALogiciel de traitement d’images basé sur Java. Utilisé dans la section 5) pour l’analyse des biorobots.
Logiciel gratuit de traitement et d’analyse d’images en java. (https://imagej.nih.gov/ij/)
Thor CamThor LabsNALogiciel d’exploitation de l’appareil photo
Solution Solution

Références

  1. Feinberg, A. W. Biological Soft Robotics. Annu. Rev. Biomed. Eng. 17, 243-265 (2015).
  2. Akiyama, Y., et al. Room Temperature Operable Autonomously Moving Bio-Microrobot Powered by Insect Dorsal Vessel Tissue. PLOS ONE. 7, 38274(2012).
  3. Herr, H....

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Réimpressions et autorisations

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