Summary
هنا، نحن تصف طريقة أخذ عينات دم الوريد ذيل بسيط في الفئران تخديره من عدم استخدام نظام أنبوب استخراج بالمحجم. هذا الأسلوب يقلل من خطر التعرض المباشر للدم، ويبسط بأخذ عينات متعددة من فينيبونكتوري واحد.
Abstract
ويمكن جمع الدم من الفئران في عدد من مواقع أخذ العينات. على سبيل المثال، السياق الذيل موقع متفوقة لأخذ عينات من الدم. ومع ذلك، السياق ذيل رقيقة حيث أنه من الصعب في بعض الأحيان للثقب. وبالإضافة إلى ذلك، السياق ذيل تدفق الدم منخفضة ويتطلب وقتاً طويلاً أخذ عينات للحصول على الدم كافية. ويصف هذا التقرير أسلوب أخذ عينات دم بسيطة، طريقة جمع الدم الفراغ، الذي يستخدم عادة للحصول على عينات دم من المرضى، وهنا تستخدم للفئران غير تخديره. نصيحة إبرة الفراشة ز 22 تم إدراجه في أحد شرايين الذيل الأفقي وجمعت حوالي 2-3 سم من طرف الذيل بزاوية مقدارها حوالي 20 درجة، والدم في أنبوب جمع الفراغ عن طريق إدراج نهاية إبرة الفراشة المطاط في التحالف أنابيب جمع الدم كووم. وتبين النتائج التجريبية الحالية أن معدل النجاح كان 95 في المائة في المجموعة التجريبية و 90% في مجموعة المبتدئين. أن معدل النجاح وأوقات ثقب متشابهة بين الفريقين. وكانت مدة أخذ العينات أقصر بكثير في المجموعة التجريبية مقارنة بالمجموعة المبتدئين. وفي الختام، هذا الأسلوب جمع الدم فراغ لأخذ عينات من الدم متسلسلة من هذا السياق ذيل من غير تخديره من الفئران ممكنة وسهلة لتعلم، التي قد تكون بمثابة إيجاد بديل موثوق للآخر تقليديا تستخدم تقنيات أخذ عينات الدم الفئران.
Introduction
أخذ عينات من الدم من الفئران مطلوب لمجموعة متنوعة من الدراسات التجريبية. وتشمل تقنيات لجمع الدم من الفئران ثقب القلب والضفيرة الرجعية-المداري، حبل الوريد، الوريد الصافن، والأوعية الدموية الذيل، والشريان السباتي، الشريان الاورطي البطني، والوريد الأجوف. تتطلب معظم التقنيات (ما عدا الوريد الصافن وثقب السفينة الدم الذيل) التخدير1،2. يتم ثقب الأوردة ذيل الفئران بصورة روتينية لأخذ عينات من الدم وحقن الأوعية الدموية. بعد علاج الذيل مع الماء الدافئ، الأوعية الدموية المتوسعة جيد ومناسب للتلاعب، حتى عندما تكون الفئران تخديره من3.
وعلى الرغم من تطوير تقنيات جديدة ومحسنة للحصول على عينات الدم في الحيوانات المختبرية الصغيرة2، ليس دائماً سهلة للحصول على ما يكفي من الدم عند أخذ العينات من الحيوانات الصغيرة. والسياق ذيل الفئران موقع متفوقة ل أخذ عينات الدم4. بيد أن على المنوال الذيل رقيقة، وبالتالي من الصعب في بعض الأحيان للثقب وسوف يستغرق وقتاً طويلاً للحصول على ما يكفي من الدم بسبب تدفق الدم منخفض عن. جمع الدم عن طريق نظام أنبوب استخراج بالمحجم أسلوب نموذجي في الممارسة السريرية اليومية. هذا نظام مغلق لجمع الدم يقلل من خطر التعرض المباشر للدم، وجعلت من الأسهل لأخذ عينات متعددة من فينيبونكتوري واحد5. ويصف هذا التقرير طريقة أخذ عينات دم الوريد ذيل بسيط في الفئران تخديره من عدم استخدام نظام أنبوب الاستخراج بالمحجم. هذا الأسلوب السهل لإتقان ويمكن استخدامها للحصول على كمية كبيرة من الدم مرارا وتكرارا في الفئران.
Protocol
جميع إجراءات أقرها "مجلس الكلية الطبية تونغجى" في الحيوان رعاية اللجنة هواتشونغ جامعة للعلوم والتكنولوجيا (ووهان، الصين). أعدت المخطوطة وفقا سيصلون (بحوث الحيوان: الإبلاغ عن التجارب في فيفو )6من المبادئ التوجيهية.
1-تربية
- استخدام الفئران سبراغ داولي (SD) (n = 20، 10 ذكور، يزن ز 261 إلى 291، يعني عمره الأسبوع 8، = 272.85 ±9.07 ز) من جامعة العلوم والتكنولوجيا "مركز هواتشونغ الحيوانات التجريبية" والحفاظ على الفئران وفقا للدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية التي نشرتها "لنا المعهد الوطني للصحة" (المعاهد الوطنية للصحة المنشور No.85-23، تنقيح عام 1996)
- منزل تحت الظروف القياسية مع حرية الوصول إلى الغذاء ومياه الشرب. الاحتفاظ بالفراش الفئران في أقفاص2 سم 530 مع حلق الخشب. بيت الفئران اثنين في كل قفص. إبقاء جميع الأقفاص مفتوحة إلى غرفة البيئة (لا الصغرى والعزل أو حبس التهوية)
- ضمان معالجة الموظفين المشاركين في البروتوكول التجريبي بانتظام على الفئران.
- الحفاظ على درجة حرارة الغرفة بين 21 درجة مئوية و 23 درجة مئوية. تعطي معدلات غذائي ملح عادي (0.3% كلوريد الصوديوم) طوال فترة الدراسة.
2-الدم جمع الإجراءات
ملاحظة: يتكون نظام جمع الدم فراغ إبرة سهماً مزدوج [ز 22 (0.7 مم × 25 مم)]، حامل بلاستيك، وسلسلة من أنابيب فراغ (2 مل) مع سدادات مطاطية (الشكل 1).
- وضع الفئران في حامل زجري بلاستيك وتغسل الذيل مع الماء الدافئ (20-30 درجة مئوية) لإزالة أي أوساخ مرئية أو البراز. بينما يشغل مساعد الذيل في وضع موسعة، يمسح الذيل مع الإيثانول 70%، وتنظيف مع الشاش لجعل هذا السياق واضحة.
- إدراج تلميح إبرة الفراشة ز 22 في أحد الأوردة الذيل الأفقي (حوالي 5 ملم) في وضع يمكنها من 2-3 سم تقريبا بعيداً عن غيض الذيل في زاوية من حوالي 20 درجة (الشكل 2). جمع الدم في أنبوب جمع الفراغ عن طريق إدراج نهاية إبرة الفراشة المطاط إلى أنبوب جمع الدم فراغ (الشكل 3).
ملاحظة: حجم الدم جمع القصوى هو 1.2 مل7. - وبعد جمع الدم، وإزالة الإبرة والضغط بلطف إلى موقع الثقب مع الشاش عن 15-30 ثانية لوقف تدفق الدم. ثم الإفراج عن الفئران من صاحب الزجري البلاستيك وتعود الفئران إلى قفصة.
- استخدام أنابيب تحتوي على يدتا تخثر لجمع بلازما الدم. برفق عكس الأنبوب عدة مرات مزيج تخثر في الدم ووضع العينات في الثلج رأسياً.
- الطرد المركزي أنابيب جمع عينة الدم في أجهزة الطرد مركزي مبردة في 2,000 س ز لمدة 10 دقائق لفصل البلازما أو المصل.
- استخراج البلازما/المصل، مع الحرص على عدم تعكير طبقات خلايا الدم الحمراء والبيضاء. جمع مصل الدم، استخدام أنابيب دون تخثر الدم. كلا النوعين من عينة يمكن استخدامها فورا، أو تخزينها في-80 درجة مئوية لمدة تصل إلى سنة واحدة.
ملاحظة: يعرف أنه جمع الدم نجاح الحصول على الدم 1.2 مل كل مرة. تم تعيين وقت ثقب القصوى إلى ثلاث محاكمات، إذا كان حجم الدم الإجمالي أقل من 1.2 مل بعد الثقب الثالث، تم تعريفه كمجموعة دم فاشلة. يبدأ فترة أخذ العينات من ثقب الوريد ذيل إزالة إبرة فراشة بعد جمع الدم. -
جمع الدم مرتين في غضون أسبوعين7.
- لاختبار والتحقق من جدوى هذا الأسلوب، تدريب طلاب الطب اثنين (للمبتدئين) ح 2 قبل تنفيذ هذا البروتوكول جمع الدم. استخدام الفئران العشرين وسحب الدم من الفئران 10 من الزملاء ذوي الخبرة 2 (المجموعة التجريبية) ومن الفئران 10 من طلاب الطب 2 (مجموعة المبتدئين).
3. التحليل الإحصائي
- التعبير عن البيانات كقيمة متوسط ± انحراف المعياري، وتحليل الإحصاءات الإحصائي للعلوم الاجتماعية 17. تم اختيار قيمة α 0.05، ولذلك ف < 0.05 اعتبرت يعتد به إحصائيا.
Representative Results
مدة أخذ العينات، وكتلة الجسم، وحجم جمع الدم بين الفريقين
تم جمع الدم من الفئران 10 (5 ذكور) مرتين في غضون أسبوعين في كل مجموعة. كانت كتلة الجسم يعني في كلتا المجموعتين مماثلة (272.00 ±9.66 ز وز 273.70 ±8.87). أخذ عينات من مدة كان أقصر بكثير في المجموعة التجريبية مقارنة بالمجموعة المبتدئين (2.77 ±0.53 دقيقة مقابل ±0.83 3.28 دقيقة، ف < 0.05) (الجدول 1).
نجاح معدل وثقب مرات مجموعتين
وكان معدل نجاح 95% (19/20) في المجموعة التجريبية و 90 في المائة (18/20) في مجموعة المبتدئين (p > 0.05). مرات ثقب لم تكن تختلف اختلافاً كبيرا بين المجموعتين (1.50 دقيقة ±0.61 مقابل 1.85 ±0.75 دقيقة, p > 0.05) (الجدول 2). تشير هذه النتائج إلى هذا الأسلوب من السهل على التعلم، ويمكن أن يتقن هذه التقنية بعد تدريب ح 2.
الشكل 1 : 2 مل جمع الدم فراغ أنبوب (يسار)؛ ز 22 الفراشة إبرة (في الوسط)؛ صاحب الزجري البلاستيك (يمين)- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : تم إدراج تلميح إبرة الوريد الذيل الأفقي (حوالي 5 ملم) في الموضع 2-3 سم تقريبا بعيداً عن غيض الذيل في زاوية 20 درجة تقريبية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : نجاح فينيبونكتوري. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| المجموعة التجريبية | مجموعة المبتدئين | |||||||||
| نوع الجنس | وزن الجسم (ز) | حجم الدم التي تم جمعها (mL) | أخذ العينات المدة (دقيقة) | نوع الجنس | وزن الجسم (ز) | حجم الدم التي تم جمعها (mL) | أخذ العينات المدة (دقيقة) | |||
| هاء-1-1 | أنثى | 291 | 1.2 | 3.12 | B1-1 | أنثى | 282 | 1.2 | 3.18 | |
| هاء-1-2 | أنثى | 291 | 1.2 | 2.73 | B1-2 | أنثى | 282 | 1.2 | 2.18 | |
| هاء-2-1 | أنثى | 276 | 1.2 | 2.3 | B2-1 | أنثى | 264 | 1.2 | 3.73 | |
| هاء-2-2 | أنثى | 276 | 1.2 | 2.37 | B2-2 | أنثى | 264 | 1.2 | 2.47 | |
| هاء-3-1 | أنثى | 267 | 1.2 | 2.73 | B3-1 | أنثى | 265 | 1.2 | 3.52 | |
| هاء-3-2 | أنثى | 267 | 1.0 | 3.88 | B3-2 | أنثى | 265 | 1.2 | 2.53 | |
| هاء-4-1 | أنثى | 263 | 1.2 | 2.41 | B4-1 | أنثى | 289 | 1.2 | 2.32 | |
| هاء-4-2 | أنثى | 263 | 1.2 | 2.52 | B4-2 | أنثى | 289 | 1.2 | 3.62 | |
| E5-1 | أنثى | 265 | 1.2 | 3.61 | B5-1 | أنثى | 277 | 1.2 | 3.48 | |
| E5-2 | أنثى | 265 | 1.2 | 2.42 | B5-2 | أنثى | 277 | 1.2 | 3.12 | |
| E6-1 | أنثى | 285 | 1.2 | 3.33 | (ب) 6-1 | أنثى | 274 | 0.9 | 4.87 | |
| E6-2 | أنثى | 285 | 1.2 | 3.03 | B6-2 | أنثى | 274 | 1.2 | 3.37 | |
| E7 1 | أنثى | 271 | 1.2 | 2.82 | B7-1 | أنثى | 268 | 1.0 | 3.93 | |
| E7-2 | أنثى | 271 | 1.2 | 2.42 | B7-2 | أنثى | 268 | 1.2 | 3.82 | |
| E8-1 | أنثى | 268 | 1.2 | 1.93 | B8-1 | أنثى | 262 | 1.2 | 2.07 | |
| E8-2 | أنثى | 268 | 1.2 | 3.05 | ب 8-2 | أنثى | 262 | 1.2 | 3.67 | |
| E9-1 | أنثى | 273 | 1.2 | 2.52 | B9-1 | أنثى | 281 | 1.2 | 4.38 | |
| E9-2 | أنثى | 273 | 1.2 | 3.17 | B9-2 | أنثى | 281 | 1.2 | 4.57 | |
| E10-1 | أنثى | 261 | 1.2 | 1.82 | B10-1 | أنثى | 275 | 1.2 | 2.53 | |
| E10-2 | أنثى | 261 | 1.2 | 3.25 | B10 2 | أنثى | 275 | 1.2 | 2.28 | |
| في المتوسط | 2.77 | 3.28 | ||||||||
| أون-1: الرقم التسلسلي للفئران في المجموعة التجريبية لجمع الدم الأولى. | ||||||||||
| أون-2: الرقم التسلسلي للفئران في المجموعة التجريبية لجمع الدم الثاني. | ||||||||||
| Bn-1: الرقم التسلسلي للفئران في مجموعة المبتدئين لجمع الدم الأولى. | ||||||||||
| Bn-2: الرقم التسلسلي للفئران في مجموعة المبتدئين لجمع الدم الثاني. | ||||||||||
الجدول 1: نتائج الدم التي تم جمعها في مجموعة المبتدئين ومجموعة تجريبية.
| أوقات جمع الدم | مرات ثقب متوسط | ثقب مرة واحدة | ثقب مرتين | ثقب ثلاث مرات | فشل | معدل النجاح | |
| المجموعة التجريبية | 20 | 1.50 ±0.61 | 11 | 8 | 0 | 1 | 95 في المائة |
| مجموعة المبتدئين | 20 | 1.85 ±0.75 | 7 | 9 | 2 | 2 | 90% |
| ثقب مرة واحدة: عدد من الفئران بجمع الدم ناجحة بعد الثقب الأول | |||||||
| ثقب مرتين: عدد الفئران مع جمع الدم ناجحة بعد ثقب الثانية | |||||||
| ثقب ثلاث مرات: عدد الفئران مع جمع الدم ناجحة بعد الثقب الثالث | |||||||
| فشل: فشل عدد من الفئران بجمع الدم بعد الثقب الثالث | |||||||
الجدول 2: مقارنة بين أوقات ثقب ومعدلات النجاح للمجموعة التجريبية والمجموعة المبتدئين.
Discussion
ويصف هذا التقرير أسلوب جمع دم سهلة لتعلم في الفئران. وأظهرت النتائج التي توصلنا إليها أن هذا الأسلوب من الممكن جمع كمية كبيرة من الدم مرارا وتكرارا من الفئران. وعلاوة على ذلك، يمكن بسهولة يتقن هذا الأسلوب مع منحنى التعلم قصيرة الأجل. هذا الإجراء يمكن أن يؤديها في الفئران غير تخديره وإلا تسبب الإجهاد الحد الأدنى للحيوانات.
ويمكن جمع الدم من الفئران في أماكن مختلفة. وعلى المنوال الذيل موقع متفوقة ل أخذ عينات الدم4. بيد أنها ليست دائماً سهلة للحصول على ما يكفي من حجم الدم من الوريد ذيل تدفق الدم رقيقة ومنخفضة من الفئران. نظام جمع الدم فراغ عادة ما تستخدم لجمع عينات الدم من المرضى في الممارسة السريرية اليومية. قد استخدمت هذا النظام جمع الدم فراغ في المرضى وأبحاث الحيوانات لوقت طويل8،،من910. يتكون هذا النظام من أنبوب جمع الدم فراغ سيليكون الأنبوب الداخلي المغلفة بالجدار والفراشة إبرة. أنها كانت تقوم على مبدأ الضغط السلبي فراغ ويسمح الرسم المستمر للدم دون التعرض لخطر لجمع الدم، مما يقلل أيضا من فرصة ل التلوث وانحلال الدم11. حجم عينة الدم في القسطرة حوالي 0.3 مل. بعد سحب الإبرة من الوريد الذيل، سوف يتدفق الدم منعت في القسطرة إلى أنبوب جمع بسبب الفراغ. هذا الأسلوب ينطبق أيضا لجمع الدم من الفئران وزنها أقل من 100 غرام باستخدام إبرة الثقب أصغر.
هذا أسلوب جمع الدم على العديد من المزايا. يؤدي هذا الإجراء سوى الحد الأدنى من الضرر للفئران وجمع الدم يمكن القيام بها دون استخدام المسكنات، وهكذا يمكن تجنب تأثير إجهاد استجابة والمسكنات في عينة الدم. ملاحظاتنا أظهرت أن الفئران كانت هادئة في حامل الزجري البلاستيك أثناء الإجراء وكانت هناك أية وفيات خلال هذه التجارب. ثانيا، وكرر جمع الدم كل واحد أو يومين من الممكن، التي تمكن المتكررة لأخذ العينات من الدم مع وحدة تخزين كافية لأغراض بحثية مختلفة. وأخيراً، هذا الأسلوب سهلة التعلم وكان بسهولة يتقن من المبتدئين وبعد فترة قصيرة (ح 2) تعلم، كما يتبين من معدلات نجاح مماثل وأوقات ثقب بين المجموعات التجريبية والمبتدئين في هذا التقرير. في تقرير سابق، أظهر لي et al. أسلوب مماثل لأخذ عينات من الدم من الوريد الذيل الأفقي من الفئران4. أسلوبنا أبسط من ذلك عنها لي et al. 4 في هذا نحن مباشرة إدراج ثقب الإبرة في الوريد الذيل وعلى الطرف الآخر من الأنبوب متصل مباشرة بالانبوب لجمع الدم، دون استخدام حقنه إضافية والشفط اليدوي للدم، ودون الحاجة إلى ' الحليب جي ' السياق لتسهيل تدفق الدم. جمع الدم مع هذا النظام المغلق يقلل من فرصة تلوث الدم. استخدام حامل الزجري البلاستيك أيضا يقلل من الإجهاد للفئران ويسهل تثبيت الذيل.
اثنين الخطوات التالية حاسمة بالنسبة لنجاح تطبيق هذا الأسلوب. 1) تمديد الذيل وتجنب حركة الذيل؛ 2) برفق ثقب في الاتجاه بزاوية مقدارها 20 درجة تجنب ثقب عن طريق الوريد، وإبقاء ثقب الإبرة في الوريد.
وفي الختام، أسلوب جمع الدم الفراغ الذي اعتمد في الفئران آمنة ومجدية وسهلة للممارسة. يتيح هذا الأسلوب المتكرر لأخذ العينات من الدم مع حجم دم كافية التي تم الحصول عليها من الفئران غير تخديره.
Disclosures
الكتاب لا تمت بصلة إلى الكشف عن
Acknowledgments
الكتاب قد لا شكر وعرفان لجعل.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 22G | (0.7×25mm) |
| vacuum tubes | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 2 ml | |
| rat restraining holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 250g rat hoder model | |
| normal salt diet for rats | Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study | ||
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. |
References
- Brown, C. Blood collection from the tail of a rat. Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods. Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).
- Lee, G., Goosens, K. A. Sampling blood from the lateral tail vein of the rat. J. Vis. Exp. (99), (2015).
- WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).
- Reynolds, B. S., et al. Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment. J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).
- Wiwanitkit, V. Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes. J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).
