Method Article

Запись синаптической пластичности в острой гиппокампа ломтики в малообъемной рециркуляции-, перфузии и погружения типа камерная система

DOI:

10.3791/55936

⸱

January 1st, 2018

 ,  ,  , 
1The Institutes of Brain Science, the State Key Laboratory of Medical Neurobiology, the Collaborative Innovation Center for Brain Science, Fudan University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает стабилизации уровня кислорода в небольшой объем переработанной буфера и методологические аспекты записи активности зависимых синаптической пластичности погруженной острый гиппокампа ломтиками.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Даже несмотря на то, что эксперименты на срезах головного мозга были в эксплуатации с 1951 года, сохраняются проблемы, которые снижают вероятность достижения стабильного и успешного анализа синаптической передачи модуляции при выполнении поле потенциальных или внутриклеточных записи. Эта рукопись описывает методологические аспекты, которые могут быть полезны в улучшении экспериментальных условий для поддержания острого мозга ломтиками и записи полевых возбуждающих постсинаптических потенциалов в камере коммерчески доступных погружения с блоком отток carbogenation. Отток carbogenation помогает стабилизировать уровень кислорода в экспериментах, которые полагаются на рециркуляции небольшой буфер водохранилища для повышения эффективности затрат наркотиков экспериментов. Кроме того рукопись представляет представитель эксперименты, которые изучить последствия различных carbogenation режимы и стимуляции парадигмы на деятельность зависимых синаптической пластичности синаптической передачи.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В 1951 году сообщил первый острый мозга срез эксперименты были проведены1. В 1971 году, после успеха в vitro записей от piriform коры2,3 и обнаружения, что Нейроны гиппокампа поперечно взаимосвязаны вдоль оси septotemporal гиппокампа4, один из Первые записи в vitro гиппокампа нейронной активности было достигнуто5. Схожесть нейрофизиологических или neurostructural параметров нейронов в vivo и in vitro условиях по-прежнему являются предметом некоторых прений6, но в 1975 году, Schwar....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Животные были сохранены в соответствии с установленными стандартами ухода за животными и процедур институтов мозга науки и государственного ключ лаборатории медицинского нейробиологии из Фудань университета, Шанхай, Китай.

1. решение подготовка

Примечание: Смотрите в таблице материалов.

  1. Подготовить нарезки буфера (изменение Gey раствор): 92 мм NaCl, 2,5 мм KCl, 1,25 мм NaH2PO4, 30 мм NaHCO3, глюкоза 25 мм, 20 мм HEPES, 3 мм Na+-пируват, 10 мм MgSO4и 0,5 мм2CaCl.
  2. Отрегулируйте пэ-аш 7.6, используя 1 M NaOH без carbogenation.
  3. Магазин буфера пр....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В разделе протокол мы описали подготовку острого гиппокампа фрагменты из брюшной и промежуточной части гиппокампа формирования (рис. 1) самцов мышей C57BL/6 и самцов крыс Wistar (5-8 недель). Положение полушарий на платформе среза помогает держать их стабильными и устраняет необходимость стабилизации с агар или агарозы. Сама система перфузии основана на Перистальтический насос работает на высокой ротации дать требуемый расход жидкости. Таким образом, быстрое .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Хотя интерфейс ломтик камеры более надежные синаптических ответы25,26,27,28, погружения камеры обеспечивают дополнительное удобство для записи патч зажим и флуоресценции обработки изображений. Таким образом мы описали несколько аспектов потенциальных записей поля в острой гиппокампа ломтики с использованием коммерческих погружения ломтик палаты, который может быть легко расширен для визуализаци.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W.W. провела, проанализированы и разработали экспериментов и написал рукопись. D.X. и К.П. помощь в подготовке рисунок и экспериментов. Эта работа была поддержана NSFC (31320103906) и 111 проекта (B16013) т.б.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<Требуются сильно>Реагенты
NaClХимический реагент, Китай10019318
Химический реактив KClSinopharm, Китай10016318
KH2PO4Sinopharm Chemical Reagent, Китай10017618
MgCl2 · 6H2OХимический реагент Sinopharm, Китай10012818
CaCl2Sinopharm Chemical Reagent, Китай10005861
NaHCO3Sinopharm Chemical Reagent, Китай10018960
GlucoseSinopharm Chemical Reagent, Китай10010518
2 PO4Sinopharm Chemical Reagent, Китай20040718
HEPESSigmaH3375
Пируват натрияSigmaA4043
MgSO4Sinopharm Chemical Reagent, Китай20025118
NaOHSinopharm Chemical Reagent, Китай10019718
Инструменты и материалы для вскрытия
DecaptorsГарвардский аппарат55-0012для обезглавливания крыс
Бинтовые ножницыSCHREIBER12-4227для обезглавливания мышей
двухлезвийное лезвиеFlying Eagle,Китай 74-C
IRIS НожницыRWD, КитайS12003-09
Костяные РонгерыRWD, КитайS22002-14
ЛожкаХаммахер HSN 152-13
шпатель для стоматологического цементаHammacher HSN 016-15
стоматологический двухсторонний экскаваторBlacksmith Surgical, СШАBS-415-017
Вибрационный микротомLeica, ГерманияVT1200S
хирургическое лезвие RWD,Китай S31023-02
хирургический держательRWD, КитайS32007-14
Электрофизиологическое оборудование и материалы
Вертикальный пипеточный пуллерNarishige,Япония PC-10
Виброизоляционный столMeirits, ЯпонияADZ-A0806
запись погружного типа камераWarner InstrumentsRC-26GLP
4-осевой микроманипуляторСаттер, СШАMP-285, MP-225
Платиновая проволокаWorld Precision InstrumentsPTP406
Усилитель Молекулярные устройства, СШАMulticlamp 700B
Система сбора данныхМолекулярные устройства, СШАDigidata 1440A
Anaysis программное обеспечениеМолекулярные приборы, СШАClampex 10.2
Nikon, ЯпонияFN1
Светодиодный источник светаLumen Dynamics Group, КанадаX-cite 120LED
микропипеткиГарвардский аппаратGC150TFвнеклеточной записи
боросиликатных микропипетокSutter, СШАBF150-86патч-зажим
Вольфрамовый электродA-M Systems, США575500
перистальтический насосLonger, КитайBT00-300T
трубки для перистальтического насосаISMATEC, Вертхайм, ГерманияSC0309 1xприток, ID: 1,02 мм
трубки для перистальтического насосаISMATEC, Вертхайм, ГерманияSC03192x трубки для оттока, ID: 2,79 мм
CCD камераPCO, Германияpco.edge sCMOS
бумага для чистки объективаKodak
50 мл коническая центрифужная трубкаThermo scientific339652
предкамерныйWarner InstrumentsBSC-PC
Встроенный нагревательWarner InstrumentsSF-28
Регулятор температурыWarner InstrumentsTC-324B
Флуоресцентный микроскоп

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McIlwain, H. Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain. Biochem J. 48 (4), (1951).
  2. McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. Responses in vitro from the piriform cortex of the rat....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hippocampal Slice PreparationField Potential RecordingSynaptic Plasticity AnalysisCarbogenation SystemSubmersion ChamberACSF RecyclingElectrophysiology TechniquesStimulation ProtocolsLong Term RecordingsNeuroplasticity Research

Related Articles