Summary
Dit manuscript beschrijft een model lymfkliertest calvarial osteolyse door blootstelling aan CoCrMo deeltjes, die een ideale diermodel vormt voor de beoordeling van de interacties tussen deeltjes van slijtage en verschillende cellen in aseptische losraken.
Abstract
Slijtage deeltje-geïnduceerde osteolyse is een belangrijke oorzaak van aseptische losraken artroplastiek mislukking, maar het onderliggende mechanisme is onduidelijk. Als gevolg van lange follow-up nodig voor de detectie en sporadisch voorkomen, is het uitdagend om te beoordelen van de pathogenese ofparticle-geïnduceerde osteolyse in klinische gevallen. Vandaar, optimale dierlijke modellen zijn vereist voor verdere studies. De lymfkliertest model van calvarial osteolyse opgericht door blootstelling aan CoCrMo deeltjes is een effectieve en geldig instrument voor de beoordeling van de interacties tussen deeltjes en verschillende cellen in aseptische losraken. In dit model, werden CoCrMo deeltjes eerst verkregen door hoog-vacuüm drie-elektrode gelijkstroom en geresuspendeerde in een met fosfaat gebufferde zoutoplossing met een concentratie van 50 mg/mL. Vervolgens werd 50 µL van de resulterende schorsing toegepast op het midden van de lymfkliertest snuituil na scheiding van de craniale beenvlies door scherpe dissectie. Na twee weken, de muizen werden opgeofferd en snuituil exemplaren zijn geoogst; kwalitatieve en kwantitatieve evaluaties werden uitgevoerd door de haematoxyline en eosine-kleuring en micro computertomografie. De sterke punten van dit model zijn eenvoud van de procedure, kwantitatieve evaluatie van botverlies, snelheid van osteolyse ontwikkeling, potentiële gebruik transgene of knock-out modellen, en een relatief lage prijs. Dit model kan echter niet worden gebruikt om te beoordelen van de mechanische kracht en chronische effecten van deeltjes in de aseptische losraken. Lymfkliertest calvarial osteolyse model gegenereerd door blootstelling aan CoCrMo deeltjes is een ideaal hulpmiddel voor de beoordeling van de interacties tussen slijtage deeltjes en verschillende cellen, bijvoorbeeld, macrofagen, fibroblasten, botcellen en osteoclasten, in aseptische losraken.
Introduction
Aseptische losmaken is de meest voorkomende oorzaak van totale heup artroplastiek (THA) en totale knie-artroplastiek (TKA) falen, waarvoor herziening chirurgie1. Het onderliggende mechanisme blijft echter onduidelijk2. Een lange follow-up is nodig voor de detectie van deeltje-geïnduceerde osteolyse, wiens optreden zeldzaam is; dus is het uitdagend om te verkennen zijn pathogenese in klinische gevallen. Vandaar, verdere studies gericht op complexe cellulaire en weefsel mechanismen vereisen dat zowel in vivo experimenten in deeltje-geïnduceerde osteolyse modellen en in vitro tests in cellen gerelateerde tot bone homeostase3dragen. Een geldige diermodel is belangrijk in de gevolgen van slijtage deeltjes voor botverlies, bewijze voor het verder cellulaire assays onthullen.
Een lymfkliertest calvarial osteolyse model gebouwd door blootstelling aan CoCrMo deeltjes is een doeltreffende en geldige methode voor de beoordeling van de interacties tussen deeltjes en verschillende cellen in aseptische losraken. In dit model veroorzaken CoCrMo deeltjes calvarial osteolyse door inducerende ontsteking cytokinen in macrofagen, activeren osteoclasten osteoblast proliferatie remmen en bevordering van osteoblast apoptosis.
Het duurt slechts twee weken om dit model. Osteolyse kan worden gevisualiseerd en gekwantificeerd door de haematoxyline en eosine (H & E) kleuring en micro berekend tomografie (micro-CT)2. Bovendien, heeft dit model een relatief lage kosten, en transgene en knockoutstadia muis modellen kunnen worden gebruikt om een groot aantal verbindingen op verschillende doses3scherm.
De procedure voor het vaststellen en evalueren van dit model is eenvoudig. Eerst werden CoCrMo deeltjes verkregen door hoog-vacuüm drie-elektrode gelijkstroom en geresuspendeerde in-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) met een concentratie van 50 mg/mL. Vervolgens werd 50 µL van de resulterende schorsing toegepast op het midden van de lymfkliertest snuituil na scheiding van de craniale beenvlies door scherpe dissectie. De muizen werden opgeofferd na twee weken, en snuituil monsters zijn geoogst; kwalitatieve en kwantitatieve analyses werden uitgevoerd door H & E kleuring van andmicro-CT.
Een lymfkliertest calvarial osteolyse model gebouwd door blootstelling aan CoCrMo deeltjes is een ideaal hulpmiddel voor de beoordeling van de interacties tussen deeltjes CoCrMo en verschillende cellen, zoals macrofagen, fibroblasten en botcellen osteoclasten, in aseptische losraken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle methoden die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) van Nanjing universiteit.
1. CoCrMo Particle voorbereiding
- Opvragen CoCrMo deeltjes met behulp van een kunstmatig hoog-vacuüm drie-elektrode gelijkstroom-4. Plaats CoCrMo legering in het instrument onder 10-3 Pa vacuüm, 0,04 MPa argon en waterstof 3:2 (v/v), en 650 A kathode huidige.
- Meet de diameter van de CoCrMo deeltjes.
- 1 mg CoCrMo deeltjes in 1,5 mL watervrij ethanol toevoegen.
- Resuspendeer CoCrMo deeltjes in watervrij ethanol door ultrasone schudden bij 28 kHz en 600 W gedurende 5 minuten.
- Een druppel (ongeveer 20 µL) van de toepassing van de resulterende schorsing voor de objectieve tabel van een transmissie-elektronenmicroscoop (TEM). Serie TEM foto's bij 200 kV versnelling spanning en 0,24 nm resolutie vastleggen.
- De meegeleverde software gebruiken voor het berekenen van de gemiddelde diameter en deeltje grootteverdeling in TEM microfoto.
- Decontaminatie van endotoxines
- Autoclaaf 50 g van deeltjes gedurende 15 minuten staan bij 121 ° C en 15 psi.
- Detecteren van endotoxines door een kwantitatieve Limulus Amebocyte Lysate (LAL) Assay (< 0,25% EU/mL werd geacht om aan te geven van endotoxinen afwezigheid)5.
- Resuspendeer de deeltjes in een met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) met een concentratie van 50 mg/mL stockoplossing6.
2. bouw van het Model Calvarial osteolyse
- Anesthetize 6 weken oude C57BL/J6 muizen (zes muizen per groep) withpentobarbital (50 mg/kg). Gebruik de snuifje-test om te beoordelen van het niveau van de verdoving. Voorkomen van ogen met normale zout drogen.
- Muizen in de vatbaar positie plaatsen. Verwijder de vacht op de schedel met een scheerapparaat en desinfecteren van de huid met behulp van medische katoenen ballen met 75% ethanol.
- Voor de lokalisatie van de punt, twee punten, waaronder de middelpunten tussen de twee ogen en oren, respectievelijk te identificeren. Vervolgens bepalen de lijn tussen de twee bovenstaande punten, en de huid langs de bovenstaande regel incise met een schaar (figuur 1A).
- Verwijder de craniale beenvlies uit de snuituil met een scalpel (figuur 1B)6.
- Sutuur (geologie) huid aan beide uiteinden voorzien van eenvoudige onderbroken hechtdraad.
- Maak een hechtdraad lijn door het midden van de incisie zonder knopen. Houd de twee uiteinden van de hechtdraad lijn.
- Insluiten 50 µL van het CoCrMo deeltje schorsing (50 mg/mL, in PBS) in het midden van de calvarias (Figuur 1 c)2.
- Knoop de laatste steek binnen eenvoudig onderbroken hechtdraad (Figuur 1 d).
- Muizen gedurende nog eens 2 weken.
3. evaluatie van Calvarial osteolyse Model door het scannen van Micro-CT
- De muizen met kooldioxide te offeren. Decapitate de muizen in het horizontale vlak. Verwijder het hersenweefsel binnen en de huid en vacht buiten. Oogst van de calvarias voor verdere experimenten.
- Zachtjes opruimen al het zachte weefsel op de snuituil met een pincet. De calvarias in PBS 24 h vóór micro-CT scan de gewiste calvarias in 4% paraformaldehyde op 4 ° C voor 24 h. Immerse vaststellen.
- Analyseren van de muizen-calvarias met hoge resolutie micro-CT bij een isometrische resolutie van 18 µm en X-ray energie instellingen van 45 kV en 550 mA.
- Het gedrag van drie-dimensionale reconstructie van micro-CT data met de software.
- Kwalitatieve en kwantitatieve analyse.
- Selecteer eerst de vierkante streek rond de middellijn hechtdraad als de regio van belang.
- Ten tweede, het meten van de botmineraaldichtheid (BMD), bone volume/totaal volume (BV/TV), trabecular nummer (Tb.N), trabecular dikte (Tb.Th), trabecular scheiding/afstand (Tb.Sp) en percentage van totale porositeit met de meegeleverde software voor micro-CT.
- Ten derde, vergelijk de drie groepen voor verschillende metingen door one-way ANOVA. Toepassing voor post-hoc analyse van variantie, Bonferroni methode2.
4. evaluatie van Calvarial osteolyse Model door H & E kleuring
- Decalcify snuituil monsters in 15% Dinatriumethyleendiaminetetra-azijnzuuroplossing (NA2EDTA)-PBS bij 4 ° C. Veranderen de ontkalking oplossing elke dag voor 3 weken.
- De ontkalkte monsters inbedden in paraffine voor een 2 x 1 cm x 1 cm kubus en snijd ze in 2 µm secties op het gebied van deeltjes depositie.
- Vlekken van de secties met haematoxyline en eosine7zoals hiervoor is beschreven.
- De lichte microscopie van microfoto van de algehele pathomorphism vastleggen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De in-house geproduceerde nanoschaal CoCrMo deeltjes werden ongeveer 50 nm (3.56 standaardfout) in diameter, zoals gekwantificeerd door TEM (Figuur 2). Na Gasbedwelming met behulp van de muis calvarias CoCrMo deeltjes, de dieren (n = 6 per groep) twee weken voor een ander werden gehandhaafd. Binnen de twee weken, de calvarial incisie volledig genezen was, en de hechtdraad kan vallen. Een lokale infectie of nonunion mei bot verlies beoordeling beïnvloeden. Na muis offer, zijn snuituil monsters geoogst. Vervolgens alle weke delen het was voorzichtig opgehelderd, en micro-CT werd gebruikt voor het kwantificeren van botverlies. Van zowel driedimensionale wederopbouw beelden en representatieve coronale foto's op de doorsnede, werd aanzienlijk botverlies waargenomen in muizen behandeld met CoCrMo deeltjes (Figuur 3). Bot mineraal dichtheid (BMD), bone volume/totaal volume (BV/TV), trabecular nummer (Tb.N) en trabecular dikte (Tb.Th) werden aanzienlijk verlaagd, terwijl de totale porositeit en trabecular scheiding/afstand (Tb.Sp) werden aanzienlijk verhoogd in de CoCrMo groep in vergelijking met de en sham operatie controlegroepen (Figuur 4). Student t-test werd gebruikt voor de beoordeling van de verschillen tussen groepen, en p < 0.05 werd beschouwd als een statistisch significant. Daarnaast bevestigd H & E kleuring van snuituil secties botverlies in muizen behandeld met CoCrMo deeltjes (Figuur 5).
Figuur 1 : Schematische van de muismodel deeltje-geïnduceerde osteolyse (PIO). De linkerzijde bevat de muispositie in modellering. (A) wijs lokalisatie. Bepaal de middelpunten tussen de twee ogen en oren, respectievelijk en incise van de huid langs de lijn tussen hen. (B) bloot en verwijder de craniale beenvlies uit de snuituil. (C) de opschorting van de deeltjes van het CoCrMo insluiten in het midden van de snuituil. (D) hechtdraad huid in eenvoudige onderbroken hechtdraad. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2 : Transmissie Electronenmicroscopie scannen van CoCrMo deeltjes. (A) vertegenwoordiger Transmissie Electronenmicroscopie beelden van CoCrMo deeltjes. (B) de korrelgrootteverdeling van CoCrMo deeltjes werd gekwantificeerd met de software. Elke staaf vertegenwoordigt frequentie genormaliseerd naar het totale aantal deeltjes. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3 : Micro-CT analyse met 3-dimensionale reconstructie van monsters van controle muizen en degenen behandeld met PBS (sham werking) en CoCrMo deeltjes. De witte horizontale lijn geeft de locatie van de afbeelding Dwarsdoorsnede. De witte pijl geeft botverlies in de groep van de innesteling CoCrMo. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 4 : Kwantitatieve analyse van micro-CT beelden na drie-dimensionale reconstructie. Kwantificering van bot mineraal dichtheid (BMD) (A), bone volume/totale beursomzet (BV/TV) (B)percentage van de totale porositeit (C), trabecular nummer (Tb.N) (D), trabecular dikte (Tb.Th) (E), en trabecular scheiding/afstand (Tb.Sp) (F), in mean±standard fout. Student t-test werd gebruikt voor de beoordeling van de verschillen tussen de groepen, met p < 0.05 beschouwd als statistisch significant. **, P < 0,01; , P < 0,001. n = 6 muizen per groep. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 5 : Representatief beelden van H & E kleuring van snuituil monsters (10 ×) van het besturingselement muizen en die behandeld met PBS (sham werking) en CoCrMo deeltje. Rode pijl geeft aan dat osteolyse. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Er zijn twee belangrijkste methoden voor slijtage deeltje-geïnduceerde osteolyse in muizen: de lucht-etui-model en het model van calvarial osteolyse. Het model van de lucht-zakje, is een subcutaan gegenereerde lucht-etui eerst gevestigd, gevolgd door slijtage deeltje invoering en implantatie in het bot weefsel8. De muur zakje bootst het beenvlies in aseptische losraken. Bot-implantatie is echter nonvascular met geen biologische activiteit, waardoor het moeilijk te beoordelen van directe interacties tussen deeltjes en het botweefsel. De calvarial osteolyse model heeft diverse voordelen ten opzichte van de tegenhanger van de lucht-etui. Eerst, slijtage deeltjes worden rechtstreeks blootgesteld aan de snuituil, waardoor het mogelijk is om te beoordelen van interacties tussen deeltjes van slijtage en bot homeostase, met inbegrip van bot resorptie en osteoblast, osteoclast en macrofaag activiteiten9,10 . Ten tweede, kwantitatieve metingen van botverlies zijn beschikbaar, zodat de beoordeling van de verschillende mogelijke benaderingen van de genetische en biologische agentia in bot verlies preventie11. Ten derde is het mogelijk om te beoordelen van de relatie tussen slijtage deeltjes en botverlies in diverse genetische achtergronden, met inbegrip van transgene en gene knock-out muizen12,13. Ten vierde, het kan worden gebruikt om het scherm van een groot aantal verbindingen op verschillende doses. Echter het slagingspercentage van het traditionalcalvarial osteolyse model is relatief laag, en met behulp van bot histomorphometry voor het meten van osteolyse maakt de resultaten minder objectieve1.
Ter verbetering van het slagingspercentage van het model en maken resultaten objectiever, zijn verschillende wijzigingen aangebracht. Eerst, nanoschaal deeltjes werden gebruikt om de interacties tussen de snuituil verbeteren en dragen van deeltjes. Inderdaad, de interacties tussen nanoschaal deeltjes en de snuituil is verbeterd in vergelijking met commercieel legering deeltjes, met een gemiddelde diameter van 1,5 µm14,15. Ten tweede, een 1.0 cm2 -gebied op de snuituil werd afgebakend om voldoende blootstelling van de snuituil. Ten derde, micro-CT en drie-dimensionale reconstructie werden gebruikt om het kwantificeren van botverlies.
Er zijn verschillende beperkingen in het huidige model. Eerste, micro-CT apparatuur voor muizen is niet algemeen beschikbaar voor onderzoekers en technici zijn vereist voor scannen en drie-dimensionale reconstructie. Ten tweede, CoCrMo nanoparticles gebruikt in het huidige model niet commercieel beschikbaar zijn, en hun productie is gebaseerd op de support van technici van de materiaalkunde. Ten derde, dit model geen chronische effecten van deeltjes op de botmassa, en mist niet-biologische factoren met betrekking tot osteolyse, zoals oscillerende materiaaldruk of mechanische krachten. De werkzaamheid van het model kan aanzienlijk worden verhoogd met de hulp van nanoschaal deeltjes en genoeg blootstelling van de snuituil. Botverlies kan worden gekwantificeerd en meer objectieve gegevens verkregen met micro-CT.
Een vastgesteld door blootstelling aan CoCrMo deeltjes lymfkliertest calvarial osteolyse-model is een ideaal hulpmiddel om te beoordelen van de interacties tussen deeltjes CoCrMo en verschillende cellen zoals macrofagen fibroblasten, botcellen en osteoclasten in aseptische losraken. Daarnaast kan een aantal medicijnen van hun effecten op aseptische losdraaien met behulp van dit model worden getest.
Er zijn vele kritische stappen van deze procedure. De eerste is de toepassing van CoCrMo nanodeeltjes met een gemiddelde diameter van 50 nm. Ten tweede, voldoende blootstelling van de snuituil werd bereikt. Een 1.0 cm2 -gebied op de snuituil was genoeg in dit model en het beenvlies op de snuituil zorgvuldig en volledig moet worden ontleed. Een duidelijke dissectie van het Beenvlies intensiveert de interacties tussen de deeltjes en snuituil. Ten derde, een kwantitatieve meting van botverlies door micro-CT is mogelijk. Kwantitatieve metingen van botverlies van drie dimensionale reconstructie, zoals BMD BV/TV, Tb.N, Tb.Th, Tb.Sp en percentage van totale porositeit, gemakkelijker om te onderscheiden van bot verlies verschillen in verschillende behandelingen, en solide bewijs leveren Osteolyse vergeleken met de traditionele bot histomorphometry.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Deze studie werd ondersteund door de nationale Natural Science Foundation van China (81572111), de Clinical Science en technologie Project Stichting van de oostelijke provincie Jiangsu (BL2012002), de wetenschappelijke onderzoek Project van Nanjing (201402007), de natuurwetenschappen Stichting van de provincie Jiangsu (BK20161385), en de speciale stichting van Chinese medische arts Association (2015COS0810).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| CoCrMo alloy from prosthesis | Waldemar Link GmbH & Co | GEMINI MK II | Raw material to obtain CoCrMo nanoparticles |
| Fabricated high-vacuum three-electrode direct current | College of Materials Science & Engineering , Nanjing University of Technology | Self designed machine | |
| 6 week old male C57BL/6J mice | Model animal research center of Nanjing University | N000013 | |
| 100% Ethanol | Nanjing Reagent | C0691514023 | Solvent of CoCrMo nanoparticles for transmission electron microscope scanning |
| 1.5 ml Microcentrifuge tubes | Taizhou Weierkang Medical Supplies co., LTD | W603 | |
| Microanalytical balance | Shenzhen Qun long Instrument Equipment Co,. LTD | EX125DZH | |
| Ultrasonic shaker | Shanghai Yuhao scientific instrument co., LTD | YH-200DH | To suspend CoCrMo nanoparticles |
| Transmission Electron Microscope | FEI | Tecnai G20 | |
| SimplePCI software | Compix Inc. | 6.6 version | To calculate the mean diameter and particle size distribution. |
| High-handed sterilization pan | QIULONGYIQI | KYQL-100DS | To decontaminate endotoxin |
| Limulus Amebocyte Lysate (LAL) Assay | Charles River | R13025 | To detect endotoxin |
| 15 ml Microcentrifuge tubes | Taizhou Suyi Medical | B122 | |
| Phosphate-buffered saline | Boster Biological Technology | AR0030 | Solvent of CoCrMo nanoparticles stock solution |
| Pentobarbital Sodium | Sigma | P3761 | To anesthetize mice |
| Normal saline | SACKLER | SR8572EP-15 | To prevent drying of mice eyes |
| 75% Ethanol | Nanjing Reagent | C0691560275 | Disinfection |
| Medical cotton ball | Shuitao | 1278298933 | Disinfection |
| Shaver | Kemei | KM-3018 | To shave the fur |
| Scissor | RWD LIFE SCIENCE | S12005-10 | To incise skin |
| Suture | RWD LIFE SCIENCE | F34001-01 | To suture skin |
| Needle holder | RWD LIFE SCIENCE | F33001-01 | To suture skin |
| Needle | RWD LIFE SCIENCE | R14003-12 | To suture skin |
| Vessel forceps | RWD LIFE SCIENCE | F22003-09 | To suture skin |
| Scalpel | RWD LIFE SCIENCE | S31010-01 | To harvest calvaria |
| Tweezers | RWD LIFE SCIENCE | F12006-10 | To harvest calvaria |
| 100 µL pipettes | Eppendorf | 3120000240 | To embed particles suspension in the calvatias |
| 100 µL pipette tips | AXYGEN | T-200-Y | To embed particles suspension in the calvatias |
| 5 ml Microtubes | Taizhou Weierkang Medical Supplies co., LTD | W621 | |
| 4% Paraformaldehyde | Servicebio | G1101 | Fixation |
| Micro Computed Tomography | SkyScan | SkyScan1176 | |
| Ethylene Diamine Tetraacetic Acid | Servicebio | G1105 | Decalcification |
| Paraffin | Servicebio | #0001 | |
| Paraffin slicing machine | Leica | RM2125RTS | |
| Glass slide | Servicebio | G6004 | |
| Cover glass | Servicebio | 200 | |
| HE staining kit | Servicebio | #1-5 | HE staining |
| Light microscope | Nikon | E200 |
References
- Dong, L., et al. Antisense oligonucleotide targeting TNF-alpha can suppress Co-Cr-Mo particle-induced osteolysis. J Orthop Res. 26 (8), 1114-1120 (2008).
- Deng, Z., et al. SIRT1 protects osteoblasts against particle-induced inflammatory responses and apoptosis in aseptic prosthesis loosening. Acta Biomater. 49, 541-554 (2017).
- Langlois, J., Hamadouche, M. New animal models of wear-particle osteolysis. Int Orthop. 35 (2), 245-251 (2011).
- Wang, P., Zhao, F. X., Zhang, Z. Z. Preparation of ultrafine zinc powders by DC arc plasma evaporation method. Chinese Journal of Nonferrous Metals. 21 (9), 2236-2241 (2011).
- Wang, Z., et al. The fibroblast expression of RANKL in CoCrMo-particle-induced osteolysis is mediated by ER stress and XBP1s. Acta Biomater. 24, 352-360 (2015).
- Wang, Z., et al. Autophagy mediated CoCrMo particle-induced peri-implant osteolysis by promoting osteoblast apoptosis. Autophagy. 11 (12), 2358-2369 (2015).
- Wang, R., et al. Particle-induced osteolysis mediated by endoplasmic reticulum stress in prosthesis loosening. Biomaterials. 34 (11), 2611-2623 (2013).
- Yang, S. Y., et al. Adeno-associated virus-mediated osteoprotegerin gene transfer protects against particulate polyethylene-induced osteolysis in a murine model. Arthritis Rheum. 46 (9), 2514-2523 (2002).
- Liu, N., et al. Autophagy mediated TiAl(6)V(4) particle-induced peri-implant osteolysis by promoting expression of TNF-alpha. Biochem Biophys Res Commun. 473 (1), 133-139 (2016).
- Wang, Z., et al. ER Stress Mediates TiAl6V4 Particle-Induced Peri-Implant Osteolysis by Promoting RANKL Expression in Fibroblasts. PLoS One. 10 (9), e0137774 (2015).
- Wang, Z., et al. TiAl6V4 particles promote osteoclast formation via autophagy-mediated downregulation of interferon-beta in osteocytes. Acta Biomater. 48, 489-498 (2017).
- Chen, S., et al. Lycorine suppresses RANKL-induced osteoclastogenesis in vitro and prevents ovariectomy-induced osteoporosis and titanium particle-induced osteolysis in vivo. Sci Rep. 5, 12853 (2015).
- Neuerburg, C., et al. The role of calcitonin receptor signalling in polyethylene particle-induced osteolysis. Acta Biomater. 14, 125-132 (2015).
- Catelas, I., Jacobs, J. J. Biologic activity of wear particles. Instr Course Lect. 59, 3-16 (2010).
- Liu, A., et al. The biological response to nanometre-sized polymer particles. Acta Biomater. 23, 38-51 (2015).
