Summary
Reproducable 실험 동물 모델 소설 색전술 재료, 혈관 내 수술 intracranial 동맥 류 (IA)의 폐색을 치료 하도록 설계 되었습니다의 테스트 필요 합니다. 현재 공부 saccular 동맥 류 쥐 동물 모델에서의 텐트를 이용한 색전술에 대 한 안전 하 고 표준화 된 수술 기법을 개발 하는 것을 목표로 합니다.
Abstract
Intracranial 동맥 류 혈관 내 수술 치료에 사용할 수 있는 기술의 armamentarium에 꾸준한 progess stents 및 흐름 diverters 같은 소설 색전술 재료 테스트 실험 동물 모델을 저렴 하 고 reproducable를 요구 한다. 현재 프로젝트의 목표는 안전 하 고, 빠르고, 디자인 하 고 텐트에 대 한 표준화 된 수술 기법 쥐 동물 모델에서 saccular 동맥 류 색전술을 지원.
Saccular 동맥 류 하강 대동맥에서 동맥 이식에서 창조 되었다. 동맥 류 했다 microsurgically는 syngenic 남성 Wistar 쥐 무게의 infrarenal 복 부 대동맥에 엔드-투-사이드 문 합을 통해 이식 > 500 g. 동맥 문 합, 다음 동맥 류 색전술 풍선 확장 마그네슘 텐트 (2.5 m m x 6 m m)를 사용 하 여 수행 되었다. 텐트 시스템 퇴행 성 변형된 Seldinger 기술을 사용 하 여 더 낮은 복 부 대동맥에서 도입 했다.
6 동물의 파일럿 시리즈, 다음 67 쥐의 총 설립된 표준 운영 절차에 따라 운영 했다. 수술 시간, 말은 문 합 시간, 그리고 의미 했다 167 ± 22 분, 26 ± 동맥 펑크 사이트의 시간을 봉합 뜻 6 분 및 11 ± 5 분, 각각. 사망 율은 6% (n = 4). 병 적 율은 7.5% (n = 5)에 스 텐트 혈전 증 4 경우에 발견 되었다 (n 2 초기, n = = 스 텐트 혈전 증에 2).
결과 saccular sidewall 동맥 류 쥐-병 적 상태와 사망률의 낮은 속도의 표준화 된 텐트 폐색의 가능성을 보여 줍니다. 이 텐트 색전술 절차 결합 텐트의 소설 개념을 공부 하는 기회 또는 흐름 분배기 기반 장치 뿐만 아니라 치유의 분자 양상.
Introduction
때문에 파열된 intracranial 동맥의 거미 막 밑 출혈은 높은 사망 율 및 빈약한 신경학 상 결과 많은 생존자와 연결. 현재 두 가지 일반적인 방법을 IA를 가리고 하: 어느 microsurgical 클리핑 (이 동맥의 요원 노출 필요), 또는 혈관 내 수술 폐색. 좁은 센 IA의 보다 적게 침략 적 혈관 내 수술 코일 치료 (특히 후부 순환을1,2)에서 약간 낮은 병 적 상태와 관련 된 것으로 표시 되었습니다로 혈관 내 수술 치료 옵션이 되고있다는 많은 신경외과 센터의 선호 적임입니다. 수많은 장치 혈관 내 수술 치료의 표시를 확장 하 고 감기 후 아이오와 재발의 주요 한계를 극복 하기 위해 개발 되었습니다. Intracranial 텐트는 특히 그들은 네오-endothelization에 대 한 비 계 역할 및 헤 르 니 아 예방, 코일로 부모 동맥을 보호 하 고 개선 intraluminal intraaneurysmal 혈전 증으로 인 한 이러한 한계를 극복 하기 위해 유망한 혈액 유입의 감소입니다. 저기 저가 동물 모델; 소설 intracranial 스텐 트를 공부 필요 분자와 거시적인 수준.
이 연구의 목적은 빠르고, 안전 하 고, 디자인 하 고 텐트 쥐3,,45에 이미 설립된 saccular 동맥 모델에서 응용 프로그램에 대 한 수술 기법을 표준화. 현재 프로젝트에서 우리는 생 분해성 마그네슘 텐트의 역할 평가.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
남성 Wistar 쥐 592 g (± 50 SD)의 평균 무게와 20 주 세와 12 시간 명암 주기, 22-24 ° C의 실내 온도에 동물 시설에 보관 되어 있었다 수돗물을 펠 릿 다이어트 무료. 동물 기관 지침에 따라 인간에서 치료를 받았다. 실험 동물 구획 베른, 스위스 (수 102/13) 들에 대 한 위원회에 의해 승인 되었다. 우리는 엄격 하 게 동물 연구에 대 한 권장 사항을 따라: Vivo에서 실험 (도착 지침)의 보고.
1. 실험실 장비, 소모품 공급, 수술 도구
- 조용 하 고, 무 균 수술 실 사용 하 고 유지 온도 23 ± 3 ° c.
- 표면 청소 및 소독, 하기 쉬운 수술 책상을 사용 하 고 수술 드 레이프와 그것을 커버. 수술 전과 수술 후 동물을 따뜻하게 하는 적외선 빛을 기록 하는 카메라와 함께 테이블 탑 수술 현미경을 사용 합니다.
- 측 벽 동맥을 만들고는 스 텐트를 이식 다음 소모품 공급을 가져옵니다.
- 작고 큰 멸 균 셀 루 로스와 거 즈 면봉, 18 G와 26 G 속이 빈 바늘과 주사기 및 관개/볼륨 대체 무뚝뚝한 끝된 바늘 얻을.
- 비 흡수 10-0 9 0 마이크로 봉합 사, 흡수 비 6-0 5-0 봉합, 그리고 흡수 3-0 봉합 사를 포함 하 여 봉합 사 물자를 얻을.
- 0.9% 염화 나트륨 isotonic 솔루션 관개/볼륨 대체 하 고 수술 하는 동안 계기의 청결을 보장 하기 위해 얻기
- 스 텐트 이식 하 다음 악기를 얻기: 펑크 19 G, 소수 성 가이드 와이어, 4 Fogaty 칼 집, 그리고 풍선 팽창에 대 한 inflator 주사기 바늘.
- 동맥 벽 decellularization에 대 한 다음과 같은 소모품 공급을 얻기:
- Microtubes-24 ° C에서 동맥 류 저장용 및 식별을 위해 라벨으로는 동맥의 전체 화학 처리를 지키기 위하여 실험실 셰이 커를 얻을.
- 0.1% 나트륨 라우릴 황산 염 (SDS)와 적절 한 decellularization 프로세스에 대 한 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)를 가져옵니다.
- 다음과 같은 표준 수술 악기를 얻기:
- 낮은 수술 도구를 얻을: 수술가 위, 집게를 연 조직, 연 조직 확장기, 직선과 곡선 겸 자, 3 모기 클램프, 바늘 홀더.
- 수술 마이크로 도구 얻기: 직선과 곡선 마이크로-가 위, 직선 및 곡선 마이크로-겸 자, 그리고 해당 혈관 클립 도포와 4 개의 임시 혈관 미니 클립.
2입니다. 마 취
- 가스 실에 쥐를 놓고 isoflurane 및 산소 (4 %isoflurane)의 혼합물으로 anesthetize. 동물의 식을 잃는 때까지 흡입을 유지 합니다.
- 가스 실에서 마 취 동물을 제거 하 고 intraperitoneally medetomidine 염 산 염 (0.5 mg/kg)과 케 타 민 염 산 염 (50 mg/kg)의 무게 적응 혼합물의 구성 된 확실 한 마 취 주사 (오른쪽으로 주입 하 여 또는 왼쪽된 아랫 배)입니다.
- 유해 발가락-핀치 하 쥐 응답 하 고 완벽 하 게 마 취와 수술 중 마 취의 깊이에서 정의 된 간격으로 모니터링 합니다. 만약 발가락 핀치 반사, readminster 마 취 제와 medetomidine의 무게에 맞게 복 주사로 마 취. 충분 한 마 취는 복 부 구멍을 열고 엔드-투-사이드 문 합 및 스 텐트 삽입을 수행 하기 전에 요구 된다.
- 수술 하는 동안 광범위 한 냉각을 방지 수술 효과적으로 지구 온난화로 복 마 취 효과 때까지 적외선 난방 램프 아래 쥐를 놓습니다.
3. 수술 준비와 쥐의 위치
- 쥐의 무게, 상부 기도 확보 하기 위해 혀를 추출 하 고 각 막 건조를 피하기 위해 눈 연 고를 적용.
- 접착 테이프를 사용 하 여 작은 빨 보드에 쥐를 해결 하 고 어떤 압력이 나 견인 발을 피할 수 있습니다.
- 조작 상 지역에 쥐 작은 동물 면도기로 면도 하 고 외과 영역을 소독.
- 두 개의 두꺼운 마커를 배치 가능한 만큼 허리와 thoraco-요 추 절곡을 동물의 뒷면에 떨어져 2-3 cm. 이렇게 하면 더 나은 박람회는 retroperitoneum는 텐트의 더 쉬운 신청 합니다.
- 살 균 조리개 드 레이프와 쥐를 커버 하 고 운영 현미경 아래 놓습니다. 실험의 손에 대 한 더 편안 하 게 위치를 용이 하 게 하도록 동물 옆에 2 개의 지원 설정.
- 세척 및 손 소독 하 고 멸 균 장갑에 넣어. 특히 스 텐트 이식에 대 한 현재 보조 하는 것이 유용 합니다.
- 실험실 동물6,7에 대 한 권장 사항에 따라 무 균 조건 하에서 수술을 수행 합니다.
4. 동맥 이식 수확
- 일반 마 취, 칼 프로세스 아래 복 부를 엽니다. 첫째, 피부 midventral 라인에 날카로운가 위로 잘라내어 피부는 근육에서 분리. 다음 복 부 근육을 절단 하 고 흉 강의 삽입 지점에 간 위의 횡 경 막을 식별 합니다.
- 횡 경 막과 결합 조직으로 갈비뼈를 절단에 흉 강 액세스 하 날카로운가 위로 잘라 큰 흉 골의 왼쪽과 오른쪽을 한 30 센티미터가를 위.
- 흉 곽 열려 있을 때, 케 타 민 염 산 염 (120 mg/kg)의 intracardiac 과다와 쥐를 희생.
- 왼쪽된 폐를 동원 하 고 펄프 면봉의 도움으로 오른쪽에 그것을 해결.
- 대동맥 아크의 적절 한 노출, 다음 azygos 및 왼쪽된 두개골 caval 혈관 대동맥 위에 두 모기 클램프와 클램프와 사이 잘라. 퇴행 성 정 맥 출혈을 피하기 위해 컷된 선박 엔딩에는 클램프를 둡니다. 클램프를 사용 하 여 심장 및 혈관 대동맥 아크에 대 한 더 나은 액세스를 허용 하 고 하강 하는 대동맥 쪽으로 이동.
- 마이크로-가 위 및 마이크로 포 셉 microsurgical 기술을 사용 하는 대동맥 해 부.
- 대동맥 아치를 내림차순 섹션에서 위쪽 대동맥을 추적 하 고 왼쪽된 하 동맥과 대동맥을 떠나 첫 번째 있는 동맥을 식별.
- 비 흡수 봉합 사 6-0 첫 번째 있는 동맥의 단지 두개골 장소와 그것을 묶어. 근 위 끝에 오른쪽 왼쪽된 하 동맥의 기원 후 대동맥을 잘라. 그것은 하나의 수직으로 낮추고 혈관 이식의 최첨단에서 비리의 기회를 잘라 사용 하는 것이 중요. 마지막으로, 새로 만든된 동맥 바로 아래 합자 커트로 제거 합니다.
- 동맥을 측정 한 후 즉시 받는 사람 쥐에 이식 이식.
5. 동맥 생성 및 텐트 응용 프로그램
- 외과 접근
- 날카로운가 위 복 부의 원심 세 번째에서 피부 절 개를 시작 하 고는 midventral에서 컷 위치를 1 cm 칼 프로세스의 원심. 조심 스럽게에서 별도 피부 및 피하 조직은 근육. 같은 위는 교육에 따라 복 부 근육을 사용 하 여 알바. 집게를 사용 하 여 절단 intraabdominal 장기 손상을 방지 하면서 근육을 인상.
- 개복 술, 다음 오른쪽에 작은 창 자, caecum, 그리고 콜론을 이동 합니다. 자체 보유 견인을 사용 하 여 복 부 구멍을 열려있는 유지 하 고 장기를 해결. 외과 영역에서 그것을 제거 후 노출 향상을 간 아래 면봉을 배치 합니다.
참고: 경우 체 지방 량 보기 방해는, 그것은 복 부 구멍 밖에 배치 고 광범위 한 유체 소모를 피하기 위해 젖은 거 즈로 덮여. - Infrarenal 복 부 대동맥의 최대 노출을 달성 하 방광을 비우기. 이 중 방광 벽에 부드러운 압력을 통해 성취 또는 방광 방전 26 G 빈 바늘을 사용 하 여 수 있습니다.
- 방광과 고환 탈수 및 수술 하는 동안 광범위 한 조작에서 젖은 살 균 펄프 면봉으로 그들을 취재 하 여 보호 합니다.
- 정수 리 복 막 두 무뚝뚝한 겸 자는 대동맥 커버를 엽니다. 거의 투명 ureters, 고환 혈관와 우수한 mesenteric 동맥 돌. 마자 정수 리 복 막 오픈, 복 부 대동맥 바로 아래 위치할 것 이다. 그것은 종종 지방이 많은 직물의 얇은 층으로 덮여 있다.
- 두 개의 마이크로-집게를 사용 하 여 혈관의 길이 길게 표시 될 때까지 주변 후 지방에서 분리 하는 복 부 대동맥의 무딘 해 부 시작 합니다. 날카로운 해 부 마이크로-가 위 및 마이크로 집게를 사용 하 여 계속 합니다. 혈관 벽에 손상을 방지 하기 위해이 절차 동안 adventitia를 파악만.
- 복 부 대동맥 해 부
참고: 외과 전략의 설명을 촉진 하기 위하여 우리는 복 부 대동맥으로 분할 3 개의 독특한 세그먼트 (그림 1).- 기술적으로 도전적 이다 원심 세그먼트-해 부를 시작 합니다.
참고: 장 골 분기 및 iliolumbar 정 맥 및 동맥 사이의 원심 세그먼트 세분화 됩니다. 이 세그먼트는 원심 복 부 대동맥 펑크와 스 텐트 삽입에 대 한 포인트 역할을 합니다.- 두 용기 사이 동맥 adventitial 레이어 함께 절단 하 여 마이크로-가 위와 마이크로-집게 V. 카바에서 대동맥 해 부.
참고: 작은 요 추 동맥 복 부 대동맥의 등 쪽 표면에서 단편 선박으로 자주 발생 하 고 절차를 방해할 수 있습니다. 응고 및 혈관의 절단은 역행 돌아다니며 혈관 봉합 하는 동안을 피하기 위해 필요 합니다. - 식별 오른쪽 iliolumbar 동맥; 기원이이 분야에서 크게 다를 수 있습니다 하지만 가장 자주는 왼쪽 보다 더 꼬리 위치 해 있습니다.
참고:이 조건은 거의 계획된 텐트 삽입 펑크 사이트는 동맥에서 방해 하지만 멀리 제거 또는-에 대 한 가장 극단적인 해 부 변화-펑크 포인트 오른쪽 iliolumbar 동맥의 혈관 결 찰 필요할 수 있습니다. - 이 세그먼트에 대동맥을 준비 후 동맥 펑크 수행할 수 나타냅니다 배 아래 작은 색된 고무 패드를 놓습니다. 이 세그먼트에 있는 배를 스트레칭 하지 마십시오. 혈관 벽에 인장 스트레치 차례로 최종 재건 방해 것 이다 동맥 찔린 다음 통제 혈관 파열 될 수 있습니다. 그것은 따라서 동맥 펑크 사이트에서 모든 유착에서 대동맥을 놓고 대동맥 아래 거 즈 면봉의 어떤 배치 든 지 방지 하는 것이 중요.
- 두 용기 사이 동맥 adventitial 레이어 함께 절단 하 여 마이크로-가 위와 마이크로-집게 V. 카바에서 대동맥 해 부.
- 전에 설명한 대로 같은 방식으로 중간 세그먼트에 V. 카바에서 대동맥 해 부.
참고: iliolumbar 정 맥 및 동맥, 신장 정 맥 사이 중간 세그먼트 세분화 됩니다. 이 세그먼트는 동맥 이식 및 텐트 위치에 사용 됩니다.- 복 부 대동맥에서 기원에 우수한 mesenteric 동맥을 확인 하 고 모든 절차 동안 보존 한다.
- 선 또는 뿐만 아니라이 섹션에서 대동맥의 등 쪽 표면에서 동맥 응고. Lumbosacral 총에 손상을 방지 하려면 충분 한 홍 조 확인 하 고 짧은 응고 시간 염두 해야 합니다.
- 이 세그먼트에서 대동맥의 해 부를 따라 텐트의 위치를 설정 합니다. 동맥 류와 텐트에 대 한 최종 위치를 정의 하기 전에 복 부 혈관으로는 텐트의 가능한 방해를 예상 합니다.
- 동맥 류와 텐트의 위치를 설정한 후 거 즈 및 더 나은 노출을 위해 대동맥에서 색된 고무 패드의 작은 조각을 넣으십시오.
- 마지막으로, 복 부 대동맥의 인접 세그먼트를 해 부. 이것은 기술적으로 원심 및 중간 세그먼트에 있는 동일한 절차 보다 간단입니다.
참고: 인접 세그먼트 신장 정 맥에 인접 위치입니다. Seldinger 기술 텐트 이식 중 가장 근 임시 클립의 응용 프로그램에 대 한 사용 됩니다.- 정수 리 복 막 후, 혈관 2 무딘 집게 구분 합니다.
- 곡선, 무뚝뚝한 겸 자와 대동맥의 등 주에 따라 인접 클립 나중 응용을 촉진 하기 위하여 밑 색된 고무 패드의 작은 조각을 넣으십시오.
- 기술적으로 도전적 이다 원심 세그먼트-해 부를 시작 합니다.
- 동맥 류 창조
- 선박의 회사 작성 되도록 인접 뒤 원심 클램프를 적용 하 여 중간 세그먼트에 대동맥을 클램프 및 후속 arteriotomy를 용이 하 게.
- Adventitia 계획된 문 합 사이트에서 제거 합니다. 마이크로-집게와 adventitia 파악 하 고 혈관 벽 부상 없이 마이크로 위로 조심 스럽게 잘라.
- 마이크로-집게와 혈관 벽의 작은 조각을 들어올린 마이크로-가 위를 가진 선형 절 개를 수행. arteriotomy 동맥 베이스로 서 동일한 크기 이어야 합니다.
- 무뚝뚝한 끝된 바늘에 식 염 수와 양방향에서 동맥을 플러시.
- arteriotomy의 인접 하 고 원심 끝에 9-0 비 흡수 봉합 하 여 수행 됩니다, 엔드-투-사이드 문 합의 처음 두 바늘을 놓습니다. 봉합 하는 동안 가능한 한 작은 혈관 벽을 잡고 하 고는 봉합 혈관 벽의 각 계층을 통해 전달 합니다. 그들은 한다만; 동맥의 수축 방지 하려면 대동맥의 복 부 부분을 잡을 수 혈관 파열 텐트 적용 하는 동안 발생할 수 있습니다.
- 중단 봉합 절 개를 닫습니다. 왼쪽에 봉합을 시작 하 고 이것을 다른 쪽으로 계속 하기 전에 완료. 뒤 벽이 끝나면 잘못 배치 봉합에 대 한 문 합 endoluminal 섹션을 확인 합니다.
참고:이 시점에서, 코일 응용 프로그램과 같은 다른 내부 aneurysmal 치료제 도입 될 수 있습니다. - 마친 후에 문 합, 원심 클램프를 먼저 제거 합니다. 혈 류에서 주요 출혈의 경우 추가 봉합을 놓습니다. 출혈의 소스에 거 즈의 작은 조각을 부드럽게 눌러 사소한 돌아다니며 관리 합니다. 지방 조직 또는 이전 취득된 adventitial 레이어 유용할 수 있습니다 또한. 이제 근 위 클램프를 제거 합니다.
- 문 합 사이트를 헹 구 고 동맥 돔 합자의 나머지 끝을 잘라.
- 직접 짤 테스트와 원심 복 부 대동맥 patency를 관찰 합니다.
- 대동맥의 모든 세그먼트 텐트 삽입 전에 동일한 높이에 약 해야 색된 고무 패드 아래 작은 거 즈 면봉을 제거 합니다. 텐트 스트럿 새로 만든된 동맥 아래 텐트를 배치 하는 동안 볼 수 있어야 합니다으로 지방 조직으로 문 합 봉합 라인을 취재 하지 마십시오.
- 장기의 허 혈에서 손상을 방지 하려면 reperfusion 인접 대동맥 클램핑 및 스 텐트 삽입으로 계속 하기 전에 10 분 동안 수 있습니다.
- 스 텐트 이식 전에 방광을 비우기.
- 스 텐트 이식
참고: 그것은 특히 마지막 텐트 인플레이션에 대 한 다음 단계에 대 한 보조를 손에 유용 합니다.- 먼저 원심 세그먼트에서 동맥 펑크 사이트를 클립. 원심 클램프와 함께 시작 하 고은 근 따라. 느슨한 결합 조직 그리고 (부분적으로) 마이크로 위 펑크 사이트 adventitia 제거 합니다.
- 주요 동맥 펑크 동안 출혈을 피하기 위해 인접 세그먼트에 큰 임시 클램프를 배치 합니다.
- 18 G 펑크 바늘으로 동맥 펑크 원심 세그먼트에서 수행 합니다. 마이크로-집게는 펑크 하며 모두 대동맥 혈관 벽을 피어 싱의 위험을 가진 혈관 벽의 작은 부분을 들어올립니다.
- 철저 하 게 무딘 흘린된 바늘을 사용 하 여 양방향에서 식 염 수와 찔린 다음 동맥을 플러시.
- 펑크 사이트에 소수 성 가이드 와이어를 삽입 하 고 원심 세그먼트에 인접 클램프를 제거 합니다.
- 인접 세그먼트에서 클램프의 가이드 와이어를 앞으로 밀어. Seldinger 기술 이전 삽입된 가이드 와이어를 사용 하 여에 테 플 론 중개자를 삽입 합니다.
참고: 소수 성 가이드 전선은 우수한 그립 고 더 나은 수동 제어를 제공 친수성 것 들 보다 더 적합 합니다. 테 플 론 딜러는 폴 리 프로필 렌 딜러 보다 삽입 하기 쉽습니다, 그들은 펑크 사이트에서 통제 파열의 위험을 줄일 하 고. - 팽창 시키는 단지 위쪽으로 문 합 위치에 인접 밀어, 칼 집 위치 아래 약 30 센티미터 이다.
- 가이드 와이어와 팽창, 제거 하 고 혈액의 불필요 한 손실을 방지 하기 위해 3 방향 자 지 꺼져 확인.
- 풍선 시스템 진공 청소기로 청소 후 흡수 마그네슘 스텐 4 Fogarty 중개자를 사용 하 여 삽입 합니다. 중개자 장치 스트럿-손상에서 축소 된 혈관의 내 피를 보호 하 고 잘난 체 이전 이식된 intraaneurysmal에 얽혀 지 고의 위험을 줄일 수를 제거 하기 전에 압력에의 한 막대 풍선을 부 풀 려 재료 (그림 2)입니다.
- 텐트의 최종 위치에 있을 때 신중 하 게 8-9 바와 함께 풍선을 부 풀 려. 지속적으로 확인 가능한 추출에 대 한 엔드-투-사이드 문 합 봉합 합니다.
- 적절 한 텐트 팽창, 대동맥 혈관 벽에 접착 후 폐 하 고 풍선을 제거 합니다.
- 중개자를 제거, 퇴행 성 근 특허 동맥에서 돌아다니며 수 닥 펑크 사이트에 인접 하는 즉각적인 응용 프로그램에 대 한 임시 클립이 있다.
- 원심 세그먼트에서 인접 클립을 배치 후 인접 세그먼트에 임시 클램프를 제거 합니다. 관찰 엔드-투-사이드 문 합으로 원심 클리핑 때문 내 대동맥 혈압 증가 봉합 사이트에 출혈을 일으킬 수 있습니다.
- 두 방향 전부에서 무뚝뚝한 끝된 바늘에서 식 염 수와 펑크 사이트를 플러시. 다음 비 흡수 10-0 스레드를 사용 하 여 중단된 기법으로 봉합. 만약에 가능 하다 면, 마이크로-집게와 함께 혈관 벽을 잡고 방지 하 고 각 봉합 혈관 벽의 모든 레이어를 통과 하는 확인 하십시오. 가장 바깥쪽 그릇에 봉합 찔린 사이트 혈관 협 착 방지를 합니다.
- 주요 출혈 혈 류 결과로 발생 하는 경우 추가 봉합을 추가 합니다. 사소한 돌아다니며 경우 거 즈 면봉 또는 adventitia의 이전 보존된 세그먼트를 사용 하 여 출혈 사이트에 부드러운 압력을 통해 hemostasis 보안. 지방이 많은 직물의 작은 조각도 도움이 될 수 있습니다.
- 펑크 사이트 아래 색된 고무 패드를 제거 합니다. 대동맥의 맥이 명확 하 게 볼 수 있을 것 이다 인접 하 고 문 합 사이트에 원심. 말 초 동맥 patency 직접 짤 테스트를 확인 합니다.
6입니다. 폐쇄
- 모든 거 즈 면봉을 제거 하 고 부드럽게 isotone 볼륨 대체를 추진 하 고 어떤 파편 든 지 삭제 하는 식 염 수와 복 부 구멍을 플러시.
- 소프트-조직 확장기를 제거 하 고 그들의 정확한 해 부 학적 위치에 다시 소장, 맹, 그리고 뚱뚱한 질량을 반환 합니다.
- 5-0으로 비 흡수 봉합 사를 사용 하 여 복 부 근육을 가입. 피부 견인을 줄이기 위해 일부 피하 봉합 흡수 3-0 봉합 사를 사용 하 여 배치 합니다. 사용 하 여 같은 3-0 봉합 사를 피부를 닫습니다.
- 폐쇄, 후 피부를 소독 하 고 따뜻함을 제공 하는 적외선 빛에서 동물을 배치.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
수술의 평균 기간 167 (± 22) 분의 26 (± 6) 분 동맥 생성 및 추가 23 (± 7)에 대 한 필요는 텐트 응용 프로그램 및 arteriotomy (그림 3)의 재건에 필요한 분.
사망, 사망률, 그리고 거시적인 텐트 혈전 증 연구의 기본 끝점을 했다. 정기적인 후속 기간 7 일을 했다 (n = 28), 21 일 (n = 32) 각각. 사망 또는 사건이 병 적 연구의 조기 종료를 리드. 수술 하는 동안 아무 사망 했다. 4 동물 (6%)는 초기에 텐트 혈전 증으로 인해 처음 3 일 동안 수술에서 죽 었 다. 5 쥐 (7.5%)는 두 뒷 다리의 마비에 초기에 텐트 혈전 증으로 인 한 수술 후 합병증을 경험 했다. 이 동물 그들의 심각한 신경학 상 적자 인해 안락사 되었다. 실험을 끝낸 후 다른 두 경우에, 후반에 텐트 혈전 증 하루 21에 보였다. 이 동물 그 시점까지 아무런 신경학 상 적자를 표시 했다. 한 쥐를 연속 손실 볼륨의 두 번째 수술 후 하루에 모든 복 벽 층의 상처 dehiscence 당하고 결과적으로 안락사 되었다. 결합 된 사망률과 병 적 속도 (그림 4 및 그림 5) 13.4% 이었다.
그림 1 : 복 부 대동맥의 3 개의 독특한 세그먼트의 그림.
베 나 정 맥 및 그들의 처분은 색깔의 블루, 복 부 대동맥 및 그들의 제거 기는 빨간색을 표시 하는 동안. * 복 부 대동맥 펑크와 스 텐트 삽입 이루어집니다 원심 세그먼트를 표시 합니다. * * 동맥 주입 및 마지막 텐트 위치 발생 중간 세그먼트를 표시 합니다. 스 텐트 이식 중 가장 근 임시 클립의 응용 프로그램에 사용 되는 인접 세그먼트를 표시 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 마그네슘 텐트 1 바에서 비정상적 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 외과 특성.
각 지점 대표 한 동물; 평균 값 (긴 줄); 표준 편차 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 : 플로우 차트.
연구;에 사용 된 동물의 수 사망률과 질병 률 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5 : Mg-텐트의 거 시 및 현미경 (10 배 확대) 개요 치료 21 일에 수확 하는 조직에 따라 엔드-투-사이드 이식된 동맥 류.
A: 왼쪽 사진은 특허 복 부 대동맥입니다. 오른쪽에 사진 취재는 텐트는 텐트 뒤에 insinuated 동맥 ostium 얇은 neointima 경도 열린된 대동맥을 보여줍니다. B: 왼쪽 사진은 복 부 대동맥의 텐트에서 혈전 증입니다. 오른쪽에 사진 배 루멘을 취재 하는 혈전으로 경도 열린된 대동맥을 보여줍니다. 퇴 화 한 텐트 스트럿츠는 혈전에 의해 발생 했다. C:는 미세한 개요 (되며 오신 얼룩) A. 에서처럼 동맥의 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bioabsorbable 스텐 트 및 동물 모델
최근 몇 년 동안에서 의학의 일반적인 경향 영구 임 플 란 트 (는 그들의 삶의 나머지 부분에 대 한 환자의 시체에 남아)에서 바이오 흡수 재료에 되었습니다. 마그네슘 stents, 특히, 이미 상당히 심장8,9에 설치 된다. 불행히도이 텐트는 아직 테스트 되지 뇌혈관 질환 같은 다른 응용 프로그램에 대 한. 이런 이유로 우리는 saccular 동맥 치료에서 bioabsorbable 텐트의 유용성을 연구 하기로 결정 했다. 연구 수행 되었다-그들은 쥐 같은 다른 작은 실험 동물-는 낮은 관련된 구입 및 생활비 때문에 적당. 또한, 그들은 유전 수정10가능성 덕분에 연구의 다른 영역에서 사용할 수 있습니다. 낮은 비용, 쉬운 취급 및 상대적으로 빠른 수술 동물의 많은 수를 사용 하 여 수행 하는 연구를 수 있습니다. 새로운 혈관 내 장치를 평가 하기 위하여 그것은 상수 interindividual 조건; 수 있는 표준화 된 동맥 모델 사용 하 여 중요 한 특히 혈액 흐름, 벽 전단 응력, 선박 turtuosity, 동맥 위치 및 동맥 류 크기 관련 쥐 sidewall 동맥 모델 설명 모든 이러한 이점을 제공 합니다. 또한 모델 소설 혈관 내 수술 접근 다른 벽 조건에서의 테스트 수 있습니다. 동맥 치유와 치료 응용 프로그램-텐트-등의 생물 학적 개념 분석 될 수 있는 가장 작은 가능한 동물 모델을 제공 합니다. 그 크기 덕분에 비슷한 크기의 장치를를 나중에 인 간에 있는 임상 사용에 대 한 테스트할 수 있습니다. 장점/단점, 자세한 설명과 다양 한 종4,11extracranial 동맥 전 임상 모델의 생물학적 차이 대 한 이전 게시 된 작업을 참조 하십시오.
병 적 상태와 사망률
이전 연구 복 스 텐트 이식에서 사망률의 높은 속도으로 나타났습니다. 값은 5.7-5712,13,,1415다. 대부분 동물 혈전 증 스 텐트 이식16중 intima 부상 다음 죽 었 다. 비록 우리의 연구에서 사망률이 낮은, 텐트 관련 혈전 증 수술 후 합병증과 사망자 (7.5% 초기에 텐트 혈전 증, 3% 후반에서 스 텐트 혈전 증)의 중요 한 원인이 있다. 우리는 우리의 연구에서 텐트와 배 사이 감소 된 접촉 6% (5 개 중 67 동물)의 낮은 사망률에 대 한 중요 한 이유는 가설. 연락처는 Seldinger 기술와 중개자;를 제거 하기 전에 1 개의 막대기에 풍선의 인플레이션 감소 되었다 풍선으로 마그네슘 텐트의 예리한 가장자리를 다루고 있습니다. 펑크 사이트 가이드 와이어, dilatator와 칼 집의 연속, 부드러운 팽창, 통해 펑크 사이트 보관할 수 있습니다 작은, 차례로 혈관 벽의 개조를 용이 하 게 그리고 의원 성 동맥 수축의 위험을 감소 시킨다. 쥐의 무게 해야 합니다 적어도 500 g 4 층 중개자의 문제가 Seldinger 기술 삽입에 대 한. Antiplatelet 치료에 텐트 텐트 배치12,17,,1819로 인 한 정비사 intima 부상에 관계 없이 혈전 증을 줄이기 위해 표시 되었습니다. 또한, 신나-스트럿 텐트 장치 혈관 협 착 증 스 텐트 치료20다음 줄일. 물병자리 외. 12 쥐 그 위에서 설명한 비슷한 수술 기술을 사용 하 여 흐름 diverters와 sidewall 동맥 류를 치료. 그들은 그들의 시리즈에 더에 텐트 혈전 증 보고. 이 연구에 주요 차이점은 그들은 듀얼 antiplatelet 치료 우리의 마그네슘 스 텐트에 비해 얇은 스트럿 텐트 장치 사용. 우리의 연구 동맥 스텐 후 치유의 생물학을 탐구 하는 목적으로, 우리는 약물 자연 intraaneurysmal 응고와 proinflammatory 상태에 영향을 하지 않고 실험을 수행 하기로 결정. 우리는 따라서 혈전 증의 위험이 높은 허용.
Transaortic 스텐 배치
경 동맥13,15,,2122 배, 희생을 통해 스 텐트 삽입에 반하는 찔린 사이트 (및 혈관의 보존)의 기본 재건 수 있습니다. 복 부 대동맥 이나 장 골 동맥14큰 선박을 통해 스 텐트를 삽입 하 여 달성. Transaortic stenting의 또 다른 장점은 직접 비주얼 모니터링 정확한 스텐 배치에 필요한 허용 하 고 관련 복 부 지류 손상을 방지입니다. 시각적 컨트롤 없이 거짓 배치의 경우21의 최대 12%에서 발생합니다. 또한, 혈관 벽의 overexpansion을 피하기 위해 풍선 및 동맥의 크기를 관찰할 수 있습니다. 복 부에 동맥 류 생성 및 텐트 응용 프로그램 prevailingly decellularized 벽5동맥 류에서 볼 수 있는 그대로, 성장 하는 동맥을 수 있습니다. 이 해 부 학적 위치에의 유일한 단점은 위장과는 동맥 사이 가능한 세포질이 고 분자 상호 작용입니다.
현재 아무 다른 변환, extracranial 동물 모델 반영 하는 거미 막 밑 공간에서 인간의 intracranial 동맥이 있다.
요원의 차이
물병자리 외12 흐름 diverters을 사용 하 여 쥐 모델에서 측 벽 동맥 류를 치료 하는 방법을 설명 합니다. 스 텐트 삽입에 필요한 시간은 우리의 시리즈 26±6 분 대 (24.5±6.4)와 유사한 동안, 그들은 짧은 총 시간 (167±22 분 대 126±23.0)과 문 합 시간 23±7 분 대 (16.3±6.4)를 운영 했다. 우리의 시리즈에 있는 더 긴 수술 시간이 더 확장 된 복 부 대동맥 해 부에 의해 설명 될 수 있습니다. 으로 우리가 삽입 내 부상을 피하기 위해 미리 확장 풍선 텐트, 우리 신장 동맥에 우수한 인접 클립을 배치 하도록 강요 했다. 근 위 선박 클립의 더 원심 응용 프로그램 풍선의 초기 장애 이어질 하 고 잠재적으로 동맥 ostium는 텐트에 포함 되지 않습니다 의미 수 있습니다. 허 혈 성 시간 23 분 대 fractioned (40) 현재 프로토콜 hypoxic 손상의 위험을 했다. 장기는 적어도 10 분의 reperfusion 단계 동안 reoxygenated 했다. 하나 하나의 긴 허 혈 성 시간 수술 기간을 단축 하지만-제시 하는 경우에 발생 하지 않은 수술 후 멀티 유기 실패의 위험을 증가 시킬 수 있습니다. 필요한 학습 기간이 후 제시 절차 사전 microsurgical 훈련 없이 외과에 관리 해야 합니다.
결론
결론적으로, 쥐 복 부의 측 벽 동맥 모델에이 텐트 응용 기술 표준화, 병 적 상태와 사망률과 낮은 비용의 낮은 속도의 높은 학년으로 편법 입증 했다. 이러한 특성 텐트를 이용한 동맥 색전술을 위한 재료의 미래 연구에 대 한 적합 한 모델을 확인 합니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
이 작품은 연구 위원회, Kantonsspital 아라우, 아라우, 스위스의 연구 기금에 의해 지원 되었다. 생 분해성 마그네슘 스텐 트 Biotronik AG, 혈관 중재, Buelach, 스위스 센터에 의해 공급 되었다. 저자는 전적으로 디자인 제시 연구의 행위에 대 한 책임 고 아무 경쟁 관심사를 선언 합니다.
Acknowledgments
우리 감사 합니다 오이겐 호프만 Philine Zumstein에 그들의 우수한 기술 지원을 텐트 신청 절차에서 자신의 전문성을 공유. 우리 해 부 드로잉 Majlinda Kalanderi 감사합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Medetomidine | any generic | ||
| Ketamin | any generic | ||
| Buprenorphine | any generic | ||
| Phosphate buffered saline | |||
| Sodium dodecyl sulfate (0.1%) | |||
| 3-0 resorbable suture | Ethicon Inc., USA | VCP428G | |
| 5-0 non absorbable suture | Ethicon Inc., USA | 8618G | |
| 6-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | C0766070 | |
| 9-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | G1111140 | |
| 10-0 non-absorbable suture | Covidien, USA | N2530 Monosof | |
| Operation microscope | Zeiss, Germany | ||
| Digital microscope camera | Sony, Japan | HXR-MC1P | |
| Standard surgical instruments | multiple | see protocol 7.a | |
| Microsurgical instruments | multiple | see protocol 7.b | |
| Vascular clip applicator | B. Braun, Germany | FT495T | |
| Temporary vascular clamps | B. Braun, Germany | ||
| 19G Puncture needle | Angiomed GmbH, Germany | 15820010 | |
| Hydrophobic guide wire | Cook Medical, USA | G00650 | |
| 4F sheat | Cordis Corporation, USA | 504-604A | |
| Inflation syringe | |||
| Laboratory shaker | Stuart | SRT6 | |
| Magnesium Stent 2.5/6 AMS with Polymer coating | Biotronik, Switzerland | ||
| Surgery drape | |||
| Sterile cellulose swabs | |||
| Syringes 1 ml and 2 ml | |||
| Hollow needles 18G and 26G | |||
| Isotonic sodium chloride | |||
| Microtubes | |||
| Eye ointment | Bausch + Lomb Inc, USA | Lacrinorm | any generic |
| Small animal shaver |
References
- Molyneux, A., et al. International Subarachnoid Aneurysm Trial (ISAT) of neurosurgical clipping versus endovascular coiling in 2143 patients with ruptured intracranial aneurysms: a randomised trial. Lancet. 360 (9342), 1267-1274 (2002).
- Molyneux, A. J., et al. International subarachnoid aneurysm trial (ISAT) of neurosurgical clipping versus endovascular coiling in 2143 patients with ruptured intracranial aneurysms: a randomised comparison of effects on survival, dependency, seizures, rebleeding, subgroups, and aneurysm occlusion. Lancet. 366 (9488), 809-817 (2005).
- Marbacher, S., et al. Intraluminal cell transplantation prevents growth and rupture in a model of rupture-prone saccular aneurysms. Stroke. 45 (12), 3684-3690 (2014).
- Marbacher, S., Marjamaa, J., Abdelhameed, E., Hernesniemi, J., Niemela, M., Frosen, J. The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model. J Vis Exp. (92), e51071 (2014).
- Marbacher, S., et al. Loss of mural cells leads to wall degeneration, aneurysm growth, and eventual rupture in a rat aneurysm model. Stroke. 45 (1), 248-254 (2014).
- Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J Vis Exp. (47), (2011).
- Bernal, J., et al. Guidelines for rodent survival surgery. J Invest Surg. 22 (6), 445-451 (2009).
- Flege, C., et al. Development and characterization of a coronary polylactic acid stent prototype generated by selective laser melting. J Mater Sci Mater Med. 24 (1), 241-255 (2013).
- Zartner, P., Cesnjevar, R., Singer, H., Weyand, M. First successful implantation of a biodegradable metal stent into the left pulmonary artery of a preterm baby. Catheter Cardiovasc Interv. 66 (4), 590-594 (2005).
- Hakamata, Y., et al. Green fluorescent protein-transgenic rat: a tool for organ transplantation research. Biochem Biophys Res Commun. 286 (4), 779-785 (2001).
- Bouzeghrane, F., Naggara, O., Kallmes, D. F., Berenstein, A., Raymond, J. International Consortium of Neuroendovascular C. In vivo experimental intracranial aneurysm models: a systematic review. AJNR Am J Neuroradiol. 31 (3), 418-423 (2010).
- Aquarius, R., Smits, D., Gounis, M. J., Leenders, W. P., De Vries, J. Flow diverter implantation in a rat model of sidewall aneurysm: a feasibility study. J Neurointerv Surg. , (2017).
- Indolfi, C., et al. A new rat model of small vessel stenting. Basic Res Cardiol. 95 (3), 179-185 (2000).
- Oyamada, S., et al. Trans-iliac rat aorta stenting: a novel high throughput preclinical stent model for restenosis and thrombosis. J Surg Res. 166 (1), e91-e95 (2011).
- Kwon, J. S., et al. Comparison of bare metal stent and paclitaxel-eluting stent using a novel rat aorta stent model. J Vet Sci. 12 (2), 143-149 (2011).
- Rouer, M., Meilhac, O., Delbosc, S., et al. A new murine model of endovascular aortic aneurysm repair. J Vis Exp. (77), e50740 (2013).
- Hardhammar, P. A., et al. Reduction in thrombotic events with heparin-coated Palmaz-Schatz stents in normal porcine coronary arteries. Circulation. 93 (3), 423-430 (1996).
- Guerrero, A., et al. Antioxidant effects of a single dose of acetylsalicylic acid and salicylic acid in rat brain slices subjected to oxygen-glucose deprivation in relation with its antiplatelet effect. Neurosci Lett. 358 (3), 153-156 (2004).
- Niitsu, Y., et al. Repeat oral dosing of prasugrel, a novel P2Y12 receptor inhibitor, results in cumulative and potent antiplatelet and antithrombotic activity in several animal species. Eur J Pharmacol. 579 (1-3), 276-282 (2008).
- Kastrati, A., et al. Intracoronary stenting and angiographic results: strut thickness effect on restenosis outcome (ISAR-STEREO) trial. Circulation. 103 (23), 2816-2821 (2001).
- Lowe, H. C., James, B., Khachigian, L. M. A novel model of in-stent restenosis: rat aortic stenting. Heart. 91 (3), 393-395 (2005).
- Finn, A. V., et al. A novel rat model of carotid artery stenting for the understanding of restenosis in metabolic diseases. J Vasc Res. 39 (5), 414-425 (2002).
