Summary
Крыс тревоги подобное поведение проверены повышенный плюс лабиринт сильно зависит от среды тестирования. Здесь мы покажем, как параметры аппарата, особенно руки структуры, влияют на поведение на лабиринт, и мы объясняем надежный протокол для выявления воздействия анксиолитическое наркотиков. Этот доклад будет способствовать тревоги исследования.
Abstract
Повышенные плюс лабиринт тест является поведенческие оценки животных тревоги в грызунов. Хотя этот тест широко применяется в области поведенческих наук, противоречивые результаты часто предоставляются из различных лабораториях. Для выявления причины различных результатов, мы ранее сосредоточены на руку функций, которые отличаются между лабораториями, наиболее особенно наличие/отсутствие выступы по бокам распростертыми объятиями и прозрачность/непрозрачность закрытой руке стен. В предыдущем докладе мы использовали контейнер пользовательских разработана для сравнения поведения крыс на различных комбинаций конструкций открытых и закрытых руку в идентичных условиях эксперимента и показал, что различия в руку функции вмешиваться с экспериментальной результаты. В краткой открытые руки выступами значительно увеличили тревоги подобное поведение у крыс, в то время как прозрачный оружия также сократились это поведение. Кроме того мы проверяли выше чувствительность обнаружения эффекта анксиолитическое наркотиков в сочетании без уступчатая открытой руки + непрозрачными стенами закрытых руку, по сравнению с комбинацией уступчатая открытой руки + прозрачной стеной Закрытая рука. В настоящем докладе мы представляем наш протокол для повышенных плюс лабиринт тест, а также обсуждение ключевых результатов от предыдущего доклада и экспериментальный опыт. Мы считаем, что этот доклад предоставит полезную информацию для исследователей, которые работают или которые планируют использовать повышенные плюс лабиринт в их исследованиях.
Introduction
Количество пациентов, страдающих от расстройства настроения, включая разлада тревожности и депрессии, растет. Хотя развитие этих расстройств включает генетических и экологических факторов, подробные патогенетических механизмов еще не полностью понял1. Таким образом исследования необходимо сосредоточить внимание на выявлении основных механизмов аффективных расстройств, а также развитие эффективных лекарственных препаратов, которые имеют меньше побочных эффектов.
Поведенческие тесты для лабораторных животных являются полезными для расследования выше функции мозга, включая эмоции. Как поведение животных сильно варьирует, экспериментальные результаты часто отличаются между лабораториями, даже если используется2идентичных инбредных деформации. Таким образом исследователи также нужно понять основные особенности экспериментальных устройств, которые они принимают для того, чтобы обеспечить надежный, точные результаты в лаборатории.
Повышенные плюс лабиринт тест первоначально была учреждена для изучения эмоциональных реактивности у грызунов3,4. Весь аппарат обычно расположены 500 мм над уровнем пола и состоит из двух открытых и два закрытых вооружений, которые делают фигуру плюс. Измерения руку исследования (в том числе продолжительность и частота записей на каждой руке), расстояние ездил и заданного поведения, такие, как растягивается посещающих осанки подвергли животных записываются во время наблюдений периоды. Эти меры животных тревоги оценивается как экспериментальный результат.
Повышенные плюс лабиринт тест используется во всем мире, но не все лаборатории используют же аппарат дизайн-5,-6, и эти различия могут повлиять на экспериментальных результатов. Например различия включают в себя наличие или отсутствие выступов вдоль распростертыми объятиями и/или использования прозрачной или непрозрачной стен для закрытых оружия5,6. Выступы вдоль распростертыми объятиями и использование прозрачные стены для закрытых оружия были разработаны для предотвращения падения аппарат7животных и для облегчения поведенческие наблюдения внутри закрытой оружия, соответственно8,9. Хотя там были некоторые исследования, которые изучали как индивидуальные различия структуры рука может повлиять на способность обнаруживать животных тревоги1,2,5,10,11 , комбинированные эффекты открытым (с/без коротких уступа) и закрытые (прозрачный/непрозрачные стены) руку функции на поведение животных еще не исследовано.
В недавнем докладе мы обсудили влияние этих комбинаций конструкций руку на тревоги подобное поведение у крыс12. В краткой открытые руки выступами значительно увеличили тревоги подобное поведение у крыс, в то время как прозрачный оружия также сократились это поведение. Кроме того мы проверяли выше чувствительность обнаружения эффекта анксиолитическое наркотиков в сочетании без уступчатая открытой руки + непрозрачными стенами закрытых руку, по сравнению с комбинацией уступчатая открытой руки + прозрачной стеной Закрытая рука. В настоящем докладе мы будет ввести наш протокол для повышенных плюс лабиринт тест, вместе с обсуждения основных результатов от предыдущего доклада. Мы считаем, что этот доклад предоставит полезную информацию для тех, кто работает или кто планируете использовать повышенные плюс лабиринт в их исследованиях.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все экспериментальные методы, описанные здесь были одобрены институциональный уход животных и использование комитета университета Мэйдзи (IACUC 14-0002(1)). Животных, используемых в результатах представительных были подготовлены следующим: мужской Sprague-Dawley крыс были приобретены у лабораторных животных компании и размещены в группах по 4 животных каждого стандарта крыса Кейдж (W200 × D410 × H250 мм) для по крайней мере за одну неделю до начала поведенческие эксперимент. Номер стойлового содержания поддерживался на стандартных условий окружающей среды для света (12:12 свет/темно график с загорается в 10:00 ч), комнатной температуры (25.0 ± 0.5 ° C), влажности (55 ± 10%) и вентиляции (10 раз / ч), и животные имели ad libitum доступ к продовольственной ( Восточные дрожжи Co. Ltd., Токио, Япония) и воды. Животные находились в клетке Стандартный крыса (W410 x D250 x H200 мм, Toyoriko Co., Ltd., Айти, Япония) с бумагой, постельные принадлежности (альфа dri, лике МСУ, Токио, Япония).
1. повышенные плюс лабиринт тест
- Настройка повышенных плюс лабиринт аппарат в настроенный контейнер (W1, 500 × D1, 500 × H2, 000 мм) (рис. 1A) с плюс образный металлический каркас 500 мм над уровнем пола в поддержку запуска путь оружия (рис. 1B), освещения на потолке контейнера для освещают поверхность лабиринта необходимые интенсивности света (рис. 1 c), и цифровая видеокамера в центре потолка для включения живой видео наблюдения поведенческие тесты (рис. 1 c).
- Fix оружия (L500 x W100 мм) о рамках плюс формы и затем исправление площади центральной платформы (W100 x D100 мм) в центре четыре руки (рис. 1 d -F).
Примечание: В нашей лаборатории, у нас есть два типа распростертыми объятиями (L500 x W100 мм) и два типа закрытых оружия (L500 x W100 x H450 мм) (рис. 1 d). Закрытые оружия имеют прозрачные или непрозрачные стены (рис. 1 d), и распростертыми объятиями предназначены с или без коротких выступ (H5 мм, Рисунок 1E). Площадь Центральной платформы (W100 × D100 мм) помещается в центре четыре оружия (рис. 1 d -F). Таким образом, следующие четыре комбинации оружия могут быть подготовлены по данным экспериментальных цель: Открытое оружие с выступами + закрытые оружия с прозрачными стенами (карнизы/прозрачный), распростертыми объятиями с выступами + закрытые оружия с непрозрачными стенами (карнизы/непрозрачный), распростертыми объятиями без выступов + закрытые оружия с прозрачными стенами (No-карнизы/прозрачный) и распростертыми объятиями без выступов + закрытые оружия с непрозрачной стены (No-карнизы/непрозрачный). Поверхность руки взлетно-посадочная полоса черная, с тем чтобы лучше животных, отслеживание, анализ автоматизированной поведение программного обеспечения, как описано в разделе 2, поведенческого анализа. - Отрегулируйте интенсивность освещения на поверхности Дистальная часть каждой руке и центральной платформой для примерно 100 люкс.
- Перед каждым испытанием очистить весь аппарат с 70% этанола раствор и протрите с дистиллированной водой.
- Нажмите «запись» на жесткий диск рекордер для начала цифровая видеокамера, которая будет фиксировать поведение крыс для видео, изображений анализ, описанные в разделе 2, поведенческого анализа.
- Поместите животное на основе центральной платформы, стоящих перед открытой руки и позволить свободное исследование на аппарате за 5 мин.
- Нажмите кнопку «Стоп» на жесткий диск рекордер для завершения записи.
- Подсчитать количество Кала и urinations после возвращения протестированных животное в комнате стойлового содержания скота.
- Повторите шаг 1.4 до конца эксперимента.
Примечание: Сухой тестовый запуск всегда проводится перед началом каждого эксперимента, чтобы проверить, что все экспериментальные правильно задаются настройки перед любой подопытных животных подвергаются в экспериментальных условиях. В противном случае некоторые животные, особенно первое животное могут возникнуть различные экологические условия (например, шум, возможно индуцированных экспериментатора во время манипуляции и/или животного подсказки, возможно, оставленные ранее протестированных животных).
Примечание: Экспериментаторов находятся вблизи контейнера, когда животное проходит испытания. Таким образом даже несмотря на то, что экспериментаторов не видны крыса может быть возможность ощутить их через запах и/или звук.
2. поведенческого анализа
Примечание: Поведенческий анализ производится ручной наблюдения и автоматизированный анализ программного обеспечения.
-
Ручной наблюдения
- После того, как животное находится на выступ, соблюдайте следующее: количество записей (записи на руку определяется как любой экземпляр, когда все 4 лапы на руку), время, затраченное на каждой руке, и количество растягивается посещающих позы перед открытым arm , а отступать центральной платформы к закрытой руке.
- Измерить продолжительность и частота поведения, определенные выше, секундомер и рассчитывать на 5 мин, начиная с закрытия двери контейнера.
-
Автоматизированный анализ
- Используя имеющиеся программы, запишите следующие: расстояние ездил, время провел в различных позиций по распростертыми объятиями (проксимальный, средние и дистальные сегменты от центральной платформы), и каждую минуту анализ времени потратил на открытых и закрыт Герб.
- Нажмите кнопку «Пуск» программного обеспечения для автоматизированного анализа в то же время, как ручной наблюдения начинается (запись остановится автоматически, если продолжительность записи).
Примечание: Программное обеспечение поведенческого анализа, используемое в настоящем исследовании отслеживает животного через его контраст с полем фон; животное, которое назначается фиксированного размера, определяется как объект ярче и передвижения своей центральной точки таким образом может использоваться для отслеживания животных.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
В предыдущем исследовании мы сравнили совокупного воздействия открытой руки выступами и прозрачности стен закрытых руку на произвольное поведение на лабиринт12. Крысы значительно потратил гораздо меньше времени на распростертыми объятиями без выступов чем на распростертыми объятиями с выступами (F [1, 60] = 13.49, P = 0.0005) (рис. 2A). Аналогичные результаты были также найдены на количество записей в объятия (F [1, 60] 11.17, P = < 0,0014)12, предполагая, что наличие выступов увеличивает произвольное поведение крыс на распростертыми объятиями. Крысы значительно показали меньше растягивается посещающих позы на аппарат, который закрыт оружия с прозрачными стенами чем на аппарат, который закрыт оружия с непрозрачными стенами (F [1,60] = 4.03, P = 0.0492) (рис. 2B), предполагая, что стены прозрачные Закрытая рука сократилась тревоги подобное поведение у крыс. Крысы больше времени на Дистальный сегмент распростертыми объятиями на аппарат, что стены прозрачные закрытой руке чем на аппарат с непрозрачной Закрытая рука стены (F [1,60] = 8.00, P = 0.0983) (рис. 2 c), предполагая, что прозрачные стены мая также снижение крыса открытой руки произвольное поведение. Кроме того открытые руки разведки на Дистальный сегмент был значительно ниже в аппарате No карнизы/непрозрачный, по сравнению с выступами/прозрачный аппарат (рис. 2 c). Взятые вместе, эти результаты показывают, что чувствительность обнаружения для тревоги подобное поведение может отличаться в зависимости от типов руку конструктивных особенностей используется, и No карнизы/непрозрачный аппарата и карнизы/прозрачный аппарат может иметь относительно большой разница в чувствительность обнаружения.
Чтобы проверить различия в чувствительность обнаружения различных видов дизайна руку, дальнейшее эксперимент выполнялось с помощью анксиолитическое наркотиков диазепама (Dцифры 3A–). Короче говоря No-карнизы/непрозрачный аппарат обнаружен эффект от лечения диазепамом высок дозы на время, проведенное в объятия, тогда как выступы/прозрачный аппарат не (рис. 3A–B). Аналогичные результаты были также найдены для количество записей в объятия12 (данные не показаны). Отсутствие каких-либо значительное влияние на уступах/прозрачный аппарат могло быть связано с тем, что базальную активность (транспортное средство лечения) на этот аппарат был выше, чем на аппарат No-карнизы/непрозрачный, но что разведка открытых руки никогда не превышал 33% время, на любой стадии на любом аппарат. Таким образом этот узкий диапазон времени Разведка открытых руки сделал это более трудно отличить Анксиолитический эффект диазепама на аппарате фауна/прозрачный (рис. 3 c–D).
Рисунок 1 : Custom-designed оборудование для повышенных плюс лабиринт test. Панель (A): повышенные плюс лабиринт тестового контейнера. Аппарат находится в контейнере черный, и монитор рядом с контейнера изображения проекты живой фильм Записанная во время эксперимента. Панель (B): плюс лабиринт рамки в контейнере, который поддерживает установлены оружия. Весь аппарат является расположен 500 мм над уровнем пола. Группа (C): потолок освещения, которые могут быть скорректированы для интенсивности. Цифровая видеокамера (см. стрелку) в окружении освещения записи движений животных. Группа (D): повышенные плюс лабиринт оружия и центральной платформы, которые установлены для рамки; с слева направо непрозрачные стены закрыт руку, открытые руки без выступ, уступчатая открытой руки, центральной платформы, руку прозрачные стены закрыт. Группа (E): крупным планом зрения распростертыми объятиями; слева направо, открытые руки без выступов откройте руку с выступами (H5 мм). Группа (F): пример построен лабиринт (карнизы/прозрачный аппарат). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2 : Открытых руку выступами снизит тревоги подобное поведение, и прозрачные стены частично тревоги подобное поведение. Самцов крыс подвергся повышенный плюс лабиринт тест с различными комбинациями руку структур (карнизы/прозрачный, карнизы/непрозрачный, No карнизы/прозрачная и No карнизы/непрозрачный). Порядок тестирования нормализована в экспериментальных группах (каждой комбинации типа аппарата). Эта процедура нормализует непредвиденные последствия, которые может иметь место из-за время дня каждого теста. Панель (A): время потраченное на распростертыми объятиями; Панель (B): количество растягивается посещающих позы; Группа (C): время провел в дистальный сегмент распростертыми объятиями. Сплошная и пунктирная линии указывают существенные основные эффекты руку открытых и закрытых структур, соответственно (двусторонний ANOVA, #P < 0.1, * P < 0,05, **P < 0.01, ***P < 0,001). Различные буквы около баров в панели (C) указывают на существенное различие (Бонферрони множественные сравнения теста, < b, P < 0,0125). Данные были высказаны как средство с SEM (n = 16 процентов экспериментальной группы). Эти цифры были изменены из нашего предыдущего доклада12. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3 : Нет-карнизы/непрозрачный аппарат показывает выше чувствительность обнаружения Анксиолитический эффект диазепама. Самцов крыс подвергся повышенный плюс лабиринт тест с No-карнизы/непрозрачный или выступами/прозрачный аппарат, 30 мин после лечения с транспортного средства (0 мг/кг), низким (0,25 мг/кг) или высокого (0,5 мг/кг) дозы анксиолитическое наркотиков диазепама (внутрибрюшинного раствор для инъекций). Диазепам решение было растворено в нормальный физиологический раствор 0,9% с поверхности активация агента. В этом эксперименте порядок тестирования трех наркотиков лечения групп и двух видов дизайн аппарата были рандомизированы для учета любых последствий, которые могут возникнуть из-за время дня каждого теста. Панели (A & B): общий процент времени (5 мин) на распростертыми объятиями карнизы/прозрачный и No карнизы/непрозрачный аппарата, соответственно. Панели (C & D):--минуту % время, потраченное на распростертыми объятиями карнизы/прозрачный и No карнизы/непрозрачный аппарата, соответственно. Различные буквы около баров в панель (B) указывают на существенное различие между процедурами (Бонферрони множественные сравнения теста, < b, P < 0.0167). Сплошная и пунктирная линии в панели (C & D) указывают существенные основные эффекты промежуток времени и диазепама лечения, соответственно (повторил мер ANOVA, *P < 0,05, **P < 0.01, ***P < 0,001). данные были высказаны как среднее с SEM. цифры в столбцах показывают животных, которые завершили эксперимент (цифры в скобках показывают животных падает аппарат). Эти цифры были изменены из нашего предыдущего доклада12. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
С увеличением числа пациентов, страдающих от психических расстройств, в том числе тревожное расстройство, важно развивать передовые исследования для улучшения понимания основных механизма тревоги. Для достижения этой цели, важно также оптимизировать экспериментальных процедур. Таким образом, чтобы улучшить применение повышенный плюс лабиринт тест, мы показали влияние особенностей руку на экспериментальных результатов с помощью крыс.
Повышенные плюс лабиринт первоначально был создан для тестирования животных тревоги в грызунов4, но хотя основные структуры обычно последовательно (например, повышенный 500 мм над уровнем пола с плюс формы), часто используются различные конструкции руку. Первоначально аппарат состоял из открытых оружия без выступов и закрытых оружия с деревянными непрозрачными стенами. Однако с выступами для предотвращения падения аппарат животных были разработаны более недавно распростертыми объятиями, и закрытые оружия были также разработаны с прозрачными стенами для облегчения наблюдения поведения на закрытой оружия. Однако поступали не вызывающих совокупное воздействие этих функций руку на экспериментальных результатов в повышенный плюс лабиринт тест. Как показывают наши результаты, наличие открытой руки выступами и прозрачности Закрытая рука стены снижение избегания открытой рукой исследования крыс (рис. 2), который может снизить чувствительность обнаружения Анксиолитический эффект диазепама ( Рисунок 3). Выступы/прозрачный аппарат появился, для поощрения большей разведки на распростертыми объятиями транспортного средства лечение крыс (рис. 3). Это сократило поведенческой дискриминации в открытой рукой исследования деятельности между транспортным средством и диазепама лечение крыс, таким образом делая его более трудно обнаружить различия в уровнях тревога. Таким образом, более низкую чувствительность карнизы/прозрачный аппарат может означать, что больше животных должны быть протестированы, чтобы продемонстрировать значительный лечения эффекты по сравнению с использованием аппарата No-карнизы/непрозрачный.
В нашем протокол продолжительность и количество записей на каждой руке вручную измерялась хорошо подготовленных экспериментаторов. Эта процедура позволяет точное измерение руку записей, определяется как все 4 лапы на руку. Хотя это правда, что системы автоматизированного отслеживания животных доступны для некоторых поведенческих параметров, таких как путешествия расстояние, в наш опыт, они не всегда точно различать записи и без записи на оружие, особенно когда животные выполняют позы растягивается посещающих вблизи границы между центральной платформы и руки. Таким образом мы рекомендуем использовать сочетание обоих ручного и автоматизированного наблюдения систем, основанных на их соответствующие сильные стороны для каждого параметра, поведенческие.
Существуют некоторые другие протокол различия между лабораториями. Например некоторые исследователи место животных на основе центральной платформы, стоящих перед закрытой руки13,14, тогда как другие места крысы, стоящих перед открытой руки15,16. Кроме того некоторые исследователи проверить поведение сразу же после принятия крысы от их дома клетки, тогда как другие позволяют крысам некоторое время, чтобы акклиматизироваться к поведению тестирование Обслуживание перед запуском теста. В отношении бывшего случай в предварительных испытаний мы испытали, как результаты отличаются в зависимости от которой рука крыса изначально сталкиваются; там было увеличение случаев въезда на руку, что крыса была помещена перед. Кроме того когда крысы были помещены перед закрытой руку, некоторые животные не двигался из этой закрытой руки после первой записи. В таком случае трудно отличить ли крысы опыт конфликта между открытой и закрытой оружия или что они просто предпочитают быть в закрытом месте без когда-либо признавая наличие распростертыми объятиями. Хотя в нашем исследовании мы решили разместить крыс, стоящих перед открытым руку, чтобы обеспечить высокую распространенность стадии конфликта, мы рекомендуем, что дальнейшие исследования, чтобы убедиться, что эффект этой разницы протокол на экспериментальных результатов надлежащим образом расследование.
Измерения разведки дистального сегмента распростертыми объятиями и анализа минуту представила дополнительную подробную информацию о крыса тревоги подобное поведение. Эти измерения, помогли показать различия в чувствительность обнаружения конструкций различных руки. Несмотря на это сообщил результаты тревога исследования с использованием повышенных плюс лабиринт тест часто не сообщают об этих видов детальные измерения13,17,18. Поэтому мы настоятельно рекомендуем, что исследователи также далее сообщают информацию о крыса исследовательской деятельности, включая дистальной разведки, минута за минутой анализ, а также растягивается посещающих осанки.
В заключение наши результаты показывают, что различные типы аппараты могут иметь свои собственные характеристики. От этих испытаний мы продемонстрировали, что No карнизы/непрозрачный аппарат лучше может обнаружить влияние препаратов, потенциально имеющие Анксиолитический эффект. Напротив это мыслимо, что уступы/прозрачный аппарат могут иметь аналогичные преимущества при тестировании потенциальных anxiogenic наркотиков. На сегодняшний день, поведенческие тесты были использованы не только для скрининга наркотиков, но и для фенотипирование анализов в мутанта животных. Действительно генома передовых методов редактирования позволяют быстрое производство мутанта животных. Таким образом очень важно разработать процедуры тестирования с лучшей точностью и чувствительностью лучше выявления отклонений в поведении. Этот отчет демонстрирует более эффективное применение повышенный плюс тест для животных тревоги исследования, основанные на ожидаемых функций наркотиков или целевых генов. Таким образом мы считаем, что наши усилия будут содействовать продвижению исследований, используя повышенный плюс лабиринт.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Авторы хотели бы поблагодарить г-н Акихиро Hirano за его помощь в производстве настроить аппарат. Авторы хотели бы поблагодарить г-н Косукэ Такахаси и г-н Синго Накадзима за их технической помощи. Эта работа была поддержана исследования риска химических веществ, здравоохранения и лабораторных наук научно-исследовательских грантов, Министерство здравоохранения, труда и социального обеспечения, Япония (H25-KAGAKU-IPPANN-003) и A исследовательский проект Грант института науки и технологии Мэйдзи Университет, Япония.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Customized container (W1500 × D1500 × H2000 mm) | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Lighting | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Elevated plus maze apparatus | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Digital video camera | Watec | WAT-250D2 | Any suitable video camera can be attached to a hard disk recorder for recording tracking profiles. |
| Hard disk recorder | TOSHIBA | RD-R200 | Any suitable hard disk recorder can be attached to the digital video camera. |
| Sprague-Dawley rats | Charles River Laboratories Japan, Inc. | NA | Any suitable rats can be used for your study |
| Standard rat cage | Toyoriko | TP-105 | Any suitable rat cage be used for your study |
| Instrument to measure light intensity | AS ONE | 1-5818-02 | Any suitable instrument to measure light intensity |
| EthoVision XT version 8.0 | Noldus | NA | Any suitable software to measure animal behavior |
| Diazepam | Taiyo Pharmaceutical Industry | 1124402A2061 | Any suitable drug can be used for your study |
| Tween 80 | Wako Pure Chemical Industries | 9005-65-6 | Any suitable drug can be used for your study |
References
- Nestler, E. J. Role of the Brain's Reward Circuitry in Depression: Transcriptional Mechanisms. Int Rev Neurobiol. 124, 151-170 (2015).
- Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment. Science. 284 (5420), 1670-1672 (1999).
- Handley, S. L., Mithani, S. Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 327 (1), 1-5 (1984).
- Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat. J Neurosci Methods. 14 (3), 149-167 (1985).
- Violle, N., Balandras, F., Le Roux, Y., Desor, D., Schroeder, H. Variations in illumination, closed wall transparency and/or extramaze space influence both baseline anxiety and response to diazepam in the rat elevated plus-maze. Behav Brain Res. 203 (1), 35-42 (2009).
- Hogg, S. A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety. Pharmacol Biochem Behav. 54 (1), 21-30 (1996).
- Martinez, J. C., Cardenas, F., Lamprea, M., Morato, S. The role of vision and proprioception in the aversion of rats to the open arms of an elevated plus-maze. Behav Processes. 60 (1), 15-26 (2002).
- Anseloni, V. Z., Brandao, M. L. Ethopharmacological analysis of behaviour of rats using variations of the elevated plus-maze. Behav Pharmacol. 8 (6-7), 533-540 (1997).
- Anseloni, V. Z., Motta, V., Lima, G., Brandao, M. L. Behavioral and pharmacological validation of the elevated plus maze constructed with transparent walls. Braz J Med Biol Res. 28 (5), 597-601 (1995).
- Hagenbuch, N., Feldon, J., Yee, B. K. Use of the elevated plus-maze test with opaque or transparent walls in the detection of mouse strain differences and the anxiolytic effects of diazepam. Behav Pharmacol. 17 (1), 31-41 (2006).
- Fernandes, C., File, S. E. The influence of open arm ledges and maze experience in the elevated plus-maze. Pharmacol Biochem Behav. 54 (1), 31-40 (1996).
- Horii, Y., Kawaguchi, M. Higher detection sensitivity of anxiolytic effects of diazepam by ledge-free open arm with opaque walled closed arm elevated plus maze in male rats. Behav Brain Res. 294, 131-140 (2015).
- Santos, R. O., et al. Evaluation of the effect of acute sibutramine in female rats in the elevated T-maze and elevated plus-maze tests. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 114 (2), 181-187 (2014).
- Lynn, D. A., Brown, G. R. The ontogeny of anxiety-like behavior in rats from adolescence to adulthood. Dev Psychobiol. 52 (8), 731-739 (2010).
- Horii, Y., et al. Male Hatano high-avoidance rats show high avoidance and high anxiety-like behaviors as compared with male low-avoidance rats. Exp Anim. 61 (5), 517-524 (2012).
- Walf, A. A., Frye, C. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nat Protoc. 2 (2), 322-328 (2007).
- Yang, Y., et al. Behavioral and pharmacological investigation of anxiety and maternal responsiveness of postpartum female rats in a pup elevated plus maze. Behav Brain Res. 292, 414-427 (2015).
- Albani, S. H., et al. Behavior in the elevated plus maze is differentially affected by testing conditions in rats under and over three weeks of age. Front Behav Neurosci. 9, 31 (2015).
