Hier presenteren we een nieuwe methode voor gedeeltelijke resectie van de linker hepatische kwab bij neonatale (dag 0) muizen. Dit nieuwe protocol is geschikt voor de studie van acute lever schade en letsel reactie in de neonatale instelling.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Gedeeltelijke lobulair Hepatectomy: Een chirurgische Model voor morfologische lever regeneratie
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Morfologische orgel regeneratie na acute weefsel verlies is gemeenschappelijk onder lagere gewervelde dieren, maar wordt zelden waargenomen in zoogdieren postnatale leven. Volwassen lever regeneratie na 70% gedeeltelijke hepatectomy resulteert in hepatocyte hypertrofie met sommige replicatie in resterende lobben met herstel van de metabole activiteit, maar met permanent verlies van de gewonde kwab morfologie en architectuur. Hier, detail we een nieuwe chirurgische methode in de pasgeborene die een fysiologische omgeving dat bevorderlijk is voor de regeneratie laat. Dit model omvat amputatie van de linker kwab apex en een daaropvolgende conservatieve beheer regime, en mist de noodzaak voor afbinding van grote lever schepen of chemische schade, waardoor een fysiologische omgeving waar een regeneratie kan voorkomen. Wij breiden dit protocol amputaties op jonge muizen (P7-14), waarin de benadeelde lever van orgel regeneratie tot compenserende groei door hypertrofie overgangen. Het gepresenteerd, korte 30 min-protocol biedt een kader om te bestuderen van de mechanismen van de regeneratie, de leeftijd-geassocieerde daling bij zoogdieren en de karakterisatie van vermeende hepatische stam of progenitoren.
Inleiding
Het vermogen om een orgaan te regenereren, of om te herstellen van vorm en functie, is gedacht te worden meestal verloren evolutionaire mettertijd. Het regeneratieve potentieel van de volwassen zoogdieren lever na acute chemische of fysische schade is gebleken dat de mobilisatie van alle resterende hepatocyten resulterend in golven van hypertrofie en paar rondes van celdeling, wat resulteert in een functionele maar architectonisch verschillende orgel1,2,3,4,5. Studies hebben onlangs begonnen te karakteriser....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle dierproeven werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de richtsnoeren uiteengezet door de vereniging voor de beoordeling en de accreditatie van Laboratory Animal Care International (AAALAC) en Stanford University's administratieve Panel voor proefdier Zorg (APLAC), (protocolnummer #10266) en in de Verenigde Staten, of de Europese Animal Welfare Act, richtlijn 2010/63/EU. Het protocol is goedgekeurd door de Commissie op de ethiek van dier experimenten van de regering van Beieren, Duitsland, en de machtiging niet ontvangen: 55.2-1-54-2532-150-2015.
1. dierlijke voorbereiding
- Bereiden een lege kooi met passende beddengoed....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Figuur 1A detailleert een algemene tijdlijn van de neonatale gedeeltelijke lobulair hepatectomy (schematische in figuur 1B), en de verwachte duur van tijd om te wachten tot de regeneratie wordt waargenomen. Subtiele regeneratie van de linker kwab kan worden waargenomen 7-14 dagen post operatie. Volledige regeneratie werd vaak waargenomen na 56 dagen operatie post. Muizen moeten geen tekenen vertonen van fysiologische afwijkingen .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Acute hepatische letsel is traditioneel bestudeerd met behulp van chemische (paracetamol, ethanol, tetrachloorkoolstof) of chirurgische modellen (70% gedeeltelijke hepatectomy). De regeneratieve reactie na gedeeltelijke hepatectomy van 70% wordt gekenmerkt om globale hepatocyte hypertrofie en meerdere rondes van celdeling4,5te betrekken. Om te stoppen bloedingen, is dit model echter beperkt, zoals de grote bloedvaten moeten worden afgebonden verlaten van een abno.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen informatieverschaffing.
Dankbetuigingen
Wij danken P. Chu voor het uitvoeren van de H & E en histologie; en C. Wang en A. McCarty voor nuttige discussies. Onderzoek werd gesteund door middel van financiering van de Virginia en D. K. Ludwig Fund for Cancer Research; het nationale hart-, Long- en bloed Instituut (R01HL058770 en U01HL099999); en het California Institute voor regeneratieve geneeskunde (RC1 00354) subsidies aan I.W. onder werd gesteund door het Human Frontier Science programma carrière Development Award (CDA00017), de Duitse Research Foundation (2787/1 RI), de Siebel stamcel instituut, en de Thomas en Stacey Siebel Foundation (1119368-104-GHBJI). J.M.T. werd gesteund door de NIH (T32GM007365), d....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Dieren | |||
| Moeder met nest van dag 0 neonatale pups (elke stam) | |||
| Draagmoeder en draagnest (optioneel) | |||
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
| Standaard Reagentia | |||
| Fosfaat Gebufferd Serum (PBS) | |||
| Providine-jodium of gelijkwaardige antiseptische oplossing | |||
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
| Chirurgisch Materiaal | |||
| Dissectiemicroscoop | Zeiss | ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000 | |
| 3mm rechte veer microschaar | Vannas | 72932-01 | |
| 5SF Pincetten | Dumont | 11252-00 | |
| Rechte Kelly pincetten | Grainger | 17-050G | |
| Verwarmingskussen | Sunbeam | 000771-810-000 | |
| Isofluraan | Abbott Labs | 0044-5260-05 | |
| Rodent Anesthesie Systeem | Kent Scientific | 1205S | |
| Gaas, 10.16 x 10.16cm | Fisher Scientific | 13-761-52 | |
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
| Standaard Apparatuur | |||
| 1.5ml microcentrifuge buis | Eppendorf | 22363204 | |
| 6-0 monocryl hechtdraad | Ethicon | MCP489G | |
| Petrischaal | Fisher Scientific | S35839 | |
| Pipet-Aid, Gewoon, 110V | Drummond | 4-000-110 | |
| Mettler Toledo NewClassic ME Analytische Weegschalen | Fisher Scientific | 01-912-402 | |
| Goedkope Inductiekamer | Kent Scientific | SOMNO-0730 |
Referenties
- Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. Liver Regeneration. Science. 276 (80), 60-66 (1997).
- Ponfick, V. A. Surgery of the Liver. Lancet. 1, 881(1890).
- Higgins, G., Anderson, R. M. Experimental Pathology of the liver. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal. Arch. Pathol. 12, 186-202 (1931).
- Miyaoka, Y., et al.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
