Summary
Vi beskriver en enkel og nem protokol til måling af antistof afhængig af forbedring af infektion af Zika virus rekreationshjem serum ved hjælp af Dengue virus Reporter viruspartikler.
Abstract
Antistof afhængig af forbedring af infektion har vist sig at spille en større rolle i Dengue viral patogenese. Traditionelle assays, der måler antistoffer eller serum evne til at øge infektion i utilladelig cellelinjer har påberåbt sig bruger viral output i medierne efterfulgt af plaque assays til at kvantificere infektion. For nylig, har disse assays undersøgt Dengue virus (DENV) infektion i celle linjerne ved hjælp af fluorescently mærket antistoffer. Begge disse tilgange har begrænsninger, der begrænser den udbredte brug af disse teknikker. Her, beskriver vi en simpel i vitro assay ved hjælp af Dengue virus reporter viruspartikler (RVP), express grøn fluorescerende proteiner og K562 celler til at undersøge antistof afhængig enhancement (ADE) af DENV infektion ved hjælp af serum, der var fremstillet af rhesus makakaber 16 uger efter infektion med Zika virus (ZIKV). Denne teknik er pålidelige, involverer minimal manipulation af celler, indebærer ikke anvendelse af levende replikering kompetente virus og kan udføres i en høj overførselshastighed format til at få en kvantitativ udlæsning bruger flowcytometri. Derudover kan dette assay tilpasses nemt for at undersøge antistof afhængig enhancement (ADE) af andre flavivirus infektioner som gul feber virus (YFV), japansk Equine Encephalitis virus (Kathrine VINDUM), West Nile-virus (VNV) etc. hvor RVP er tilgængelige. Lethed af opsætning af analysen, analysere data og fortolkning af resultater gør det meget åbne over for de fleste laboratorium indstillinger.
Introduction
Antistof afhængig enhancement (ADE) af infektion er en proces, hvorved delvist cross-reactive antistof svar induceret af en serotype af virus øger optagelsen af en anden serotype af virus, fører til øget viral replikation og viræmi. ADE er blevet udførligt dokumenteret i Dengue virus (DENV) infektioner hvor fire store serotyper er fremherskende. I en delmængde af patienter er ADE forbundet med Dengue hæmoragisk feber (DHF). Vi har for nylig vist, at Zika virus (ZIKV) infektion induceret betydeligt høje niveauer af DENV cross-reactive antistof reaktioner, der forårsagede ADE af DENV in vitro og sandsynligvis bidraget til en forbedring af DENV viræmi i vivo1 , 2. antistof afhængig enhancement assays er et værdifuldt redskab til at vurdere kapaciteten af antistoffer til at forbedre sekundær infektion med relaterede virus og give værdifuld indsigt i patogenesen af flavivirus infektioner og informere den udviklingen af vacciner.
Analysen beskrives bruger her DENV RVP sammen med K562 celler, der normalt utilladelig til infektion. RVP er strukturelt intakt replikering inkompetente DENV virale partikler at indkode en sub-genomisk grøn fluorescerende proteiner (NGL) replikon, der kommer til udtryk efter en enkelt runde af replikering3. Som sådan er celler, der bliver smittet med RVP fluorescerer grønt og let kan påvises ved hjælp af flowcytometri eller mikroskopi. RVP bruges i denne analyse blev indhentet fra kommercielle kilder. De kan dog være genereret mod andre vira og brugt i analysen beskrives i dette håndskrift. I mellemtiden, K562 celler er en FcγIII-receptor-udtrykker leukæmi cellelinie der binder til regionen Fc af antistoffer og blive smittet i overværelse af sub neutralisere koncentrationer af antistof4,5.
ADE assays har været flittigt brugt i studier undersøger risikofaktorer for svær denguefeber og afgrænse mekanismerne af in vitro- ADE6,7,8. ADE analysen beskrives her kan hurtigt og nemt bruges til at bestemme kapaciteten af serum til at styrke in vitro- infektion ved hjælp af RVP og flow flowcytometri, sammenlignet med andre assays anvendes i øjeblikket, som kræver enten bestemmelse af plak danner enheder (pfu) i Vero celler eller antistoffarvning af inficerede celler6,7,8,9,10,11, som begge er tidskrævende og labor intensiv.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Serumprøver bruges til at påvise protokollen beskrevet her var fremstillet af rhesus makakaber, der var opstaldet og plejet i overensstemmelse med lokale, statslige og føderale politik i en forening for evaluering og akkreditering af Laboratory Animal Care International (AAALAC)-akkrediteret facilitet. Alle dyreforsøg blev gennemgået og godkendt af institutionelle Animal Care og brug udvalget og prøver blev anskaffet gennem en væv deling protokol.
1. dag 1
Bemærk: Udføre alle trinene beskrevet nedenfor i en steril laminar flow biosikkerhed kabinet anvendes til vævskultur i et laboratorium, BSL-2.
- Tø serumprøver ved stuetemperatur og overføre 100 µL af hvert serum prøve til en steril tube. Varme inaktivere i 30 min. ved 56° C i et vandbad eller et temperatur-justerbar thermomixer. Gøre 10-fold serielle fortyndinger af serum prøve lige fra 1:1 til 1:1,000 ved hjælp af kold RPMI-10 (RPMI med 10% føtal bovint serum).
- Overfør 10 µL af seriefremstillede fortyndede serum prøve hvert hul i en steril 96-brønd V-bundplade. Omfatte to sæt af kontrolhullerne, RPMI-10 med RVP kun og uden serumprøven og RPMI-10 kun uden RVP og uden serumprøven. Konfigurer hver serumprøven og RPMI-10 kontrolelementer i tre.
- Fjerne Dengue-1, 2, 3 og 4 RVP fra-80 ° C fryser og tø dem i et 37 ° C vandbad. Overføre de optøede RVP straks til is. Opnå ca 170 µL RVP for hver serumprøven (10 µL af RVP x 3 brønde for hvert serumfortynding (1:1, 1:10, 1: 100, 1:1, 000) og 10 µL af RVP x 3 brønde for hver af RPMI-10 med RVP kun styre wells).
- Tilsæt 10 µL af RVP i hver godt 96-brønd V-bundplade indeholdende serumprøven og RPMI-10 med RVP (intet serum) kontrolhullerne. Tilføj ikke RVP til RPMI-10 kun (ingen serumprøven og ingen RVP) brønde. Blandes grundigt ved pipettering op og ned 5-10 gange. Tilsæt 10 µL koldt RPMI-10 i stedet for RVP til hver kold RPMI-10 kun (ingen serumprøven og ingen RVP) styre brønde.
- Overføre 96-brønd V-bundplade til en inkubator og inkuberes pladen i 1 time ved 37 ° C i 5% CO2. Mens 96-brønd V-bundplade inkubere, rengøre overfladen af biosikkerhed kabinet med 70% ethanol og køre UV lys i 15 min.
- En fuldt sammenflydende T75 kolben K562 celler fjernes fra rugemaskinen, bland cellerne godt ved hjælp af en steril 5 mL pipette og overføre 5 mL af celler til en steril 15 mL konisk slange.
Bemærk: K562 cellerne er fastholdt i RPMI-10 og podes på 1 x 106/mL. - Tæller antallet af celler ved at fjerne 10 µL celler fra sterile 15 mL konisk røret og blandes med 10 µL tryphan blå. Tælle celler ved hjælp af en hemocytometer til at bestemme det samlede antal celler i 15 mL konisk røret.
- Der centrifugeres i 15 mL konisk med celler på ~ 1200 x g i 10 minutter, den dekanteres og resuspend celler i varm RPMI-10 på en koncentration af 80.000 celler/30 µL af medier (2,66 x 106 celler /mL).
- Fjerne 96-brønd V-nederste plade fra inkubator (trin 1,6), overføre 30 µL K562 celler til hvert hul i 96-brønd V-bundplade og blandes grundigt af pipettering op og ned 5-10 gange. Overføre 96-brønd V-bundplade til en inkubator og Inkuber pladen i 1 time ved 37 ° C i 5% CO2.
- Efter inkubation for 1 h, fjerne 96-brønd V-nederste plade fra inkubator og centrifugeres ved ~ 1200 x g i 5 minutter. Efter centrifugering, dekanteres medier fra brøndene ved at dreje pladen op og ned i en beholder, der indeholder 10% blegemiddel.
- Vaske cellerne i hver brønd ved resuspending dem i 125 µL af varm RPMI-10, blandes grundigt med en pipette, og der centrifugeres plade på ~ 1200 x g i 5 min. Decant i medierne ved at dreje pladen op og ned i en beholder, der indeholder 10% blegemiddel. Gentag trinnet vaskes to gange.
- Efter vask, tilsættes 100 µL af varm RPMI-10 til hver godt, blande op og ned med en pipette, og der inkuberes plade i 48 timer ved 37 ° C i 5% CO2.
2. dag 3
- Fjerne 96-brønd V-bundplade indeholdende 100 µL af celler og medier/brønd fra rugemaskinen og flytte det til et kabinet biosikkerhed. Ved hjælp af en multikanalpipette, mix indholdet af hvert godt og overføre cellerne og medier til en 96 godt U-nederste plade eller til forud mærket 5 mL polypropylen rør.
- Skyl hver brønd i 96-brønd V-bundplade med 100 µL 1% PARAFORMALDEHYD (PFA) i 1 x phosphat bufferet saltvand (PBS) og overførsel til de respektive brønde i 96 godt U-bundplade eller mærket 5 mL polypropylen rør fra trin 2.1 til at give en endelig koncentration på 0,5% PFA/brønd eller tube. Blandes grundigt ved hjælp af en multikanalpipette, dække plade med alufolie, og lad det sidde i rugemaskinen i 30 minutter til at løse cellerne.
- Forberede flow forskellige (Se Tabel af materialer for eksempel) ved at køre unstained K562 celler til at kalibrere side og forward scatter sammen med fluorescens indstillinger. Den eneste fluorescens kanal kræves er FL1, som normal god landbrugspraksis er den eneste fluorescens udledes fra cellerne. Erhverve ~ 30, 000 – 50.000 celler fra hver prøve.
Bemærk: Enhver flow Flowcytometret i stand til at læse en enkelt fluorescens kan bruges for at erhverve dataene, som celler inficeret med RVP vil kun udleder grønne fluorescens på grund af tilstedeværelsen af normal god landbrugspraksis, og ingen andre fluorescens kanal er nødvendige.
3. dataanalyse
-
Analysere data erhvervet på flow forskellige brug af flow flowcytometri analyse software (se tabel af materialer).
- Sæt den første port baseret på FSC-A (forward scatter-området) vs FSC-H (forward scatter-højde) til at omfatte enkelt celler og udelukke auto-fluorescerende dubletter fra analyse12. Derefter, gate singlet-gated celler baseret på VSK-A (side scatter-området) vs FSC-A at udelukke autofluorescent snavs.
- Analysere SSC-A vs FSC-en gated celler for udtryk for normal god landbrugspraksis baseret på VSK-A vs normal god landbrugspraksis-A. Bestemme procentdelen af normal god landbrugspraksis + celler for hver fortynding af serum og kontrol prøver ved at angive en port omkring normal god landbrugspraksis + celler.
- Bestemme den gennemsnitlige procentdel af normal god landbrugspraksis + celler for hvert serum prøveopløsning og kontrolhullerne ved at dividere den samlede procentdel af normal god landbrugspraksis + celler i tredobbelt brøndene med 3.
- Beregne fold-styrkelse af infektion ved at dividere den gennemsnitlige procentdel af normal god landbrugspraksis + celler i serumprøver for hver fortynding divideret med den gennemsnitlige procentdel af normal god landbrugspraksis + celler i RPMI-10 med RVP (ingen serumprøven) kontrolhullerne.
- Graf fold-ekstraudstyr (y-aksen) versus fortynding (x-akse), og statistisk analyse ved hjælp af ANOVA efterfulgt af Tukey's post-hoc test for flere sammenligninger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Sera fra 4 rhesus makakaber blev indsamlet 16 uger efter infektion med ZIKV og testet for deres potentiale til at forbedre DENV-1, 2, 3 og 4 infektion i K562 celler. Dyrene havde peak viræmi ~ 1 x 105 eksemplarer af ZIKV RNA/mL af plasma af dag 3 efter infektion, der faldt til et niveau, der lå under detektionsgrænsen ved 7 dage efter infektion. Ingen viræmi blev fundet i plasma på 16 uger efter infektionen. Derefter RVP analyse blev udført, og de indsamlede data blev analyseret, som beskrevet i ovennævnte protokol.
Gating strategien bruges til at identificere normal god landbrugspraksis + celler er vist i figur 1. Den oprindelige port blev sat til at udelukke autofluorescent dubletter og omfatter kun enkelt celler baseret på FSC-A vs FSC-H. Den næste plot viser kun celler fra enkelt celle porten; der, en gate var trukket baseret på VSK-A vs FSC-A at udelukke autofluorescent snavs. Disse gated celler blev derefter vises i en tredje plot baseret på VSK-A vs FL1-A at identificere normal god landbrugspraksis + celler. Celler inficeret med RVP udtryk for normal god landbrugspraksis, og procentdelen af normal god landbrugspraksis + celler blev fastsat ved at angive en port omkring disse celler. Ca. 12,2% af normal god landbrugspraksis + celler er påviselige i ZIKV inficerede serum prøve, i forhold til ingen normal god landbrugspraksis + celler i kontrolprøve. Denne gating strategi følges for hver fortynding og kontrol serumprøven inkluderet i analysen.
Procentdelen af normal god landbrugspraksis + celler blev fastsat for hver prøveopløsning og kontrolprøve som beskrevet ovenfor (figur 1). Data fra en repræsentativ dyr ved hjælp af DENV-1 RVP er vist i figur 2. Sammenlignet med ingen kontrol serumprøven der havde 0.253% normal god landbrugspraksis + celler, var procentdelen af normal god landbrugspraksis + celler 2,58% i ufortyndet prøve, 12,8% på 1:10, 0.735% på 1: 100 og 0,022% på 1:1,000 fortynding. Procentdelen af normal god landbrugspraksis + celler vil ændre som serum er fortyndet som følge af de faldende koncentrationer af antistof i prøven.
Som forstærkning af infektion er forbundet med den antistof koncentration, som er ideel til at øge optagelsen af virus, observeret vi en dramatisk stigning i andelen af normal god landbrugspraksis + celler på 1:10 fortynding i forhold til enten ufortyndet prøve eller andre fortyndinger, tyder på, at ufortyndet prøven havde højere koncentrationer af antistof, der henviser til, at 1: 100 og 1:1,000 Fortyndingerne havde lavere niveauer af antistof, der ikke var tilstrækkelig til at fremkalde ADE af infektion. Hvis antistof koncentrationer er markant høj, skal så yderligere fortyndinger af serum være medtaget for at bestemme den fortynding, hvormed ADE bliver synlige. I serumprøver vi undersøgt, konstaterede vi ADE ved en fortynding på 1:10. På den anden side kan ADE observeres på lavere fortyndinger, hvis koncentrationen af antistof i serum er ganske høj.
Næste, vi beregnet en fold-forbedring af infektion ved at dividere den gennemsnitlige procentdel af normal god landbrugspraksis + celler i tredobbelt brøndene for hver fortynding med den gennemsnitlige procentdel af normal god landbrugspraksis + celler i tredobbelt brøndene for ingen serumkontrol. Kinetik ADE mod DENV-1, 2, 3 og 4 serotyper blev fastlagt ved graftegning fold-ekstraudstyr på y-aksen og serum fortynding på x-aksen (figur 3). Data viser at serum indsamlet på 16 uger efter infektion betydeligt forbedret infektion af K562 celler ved DENV-1, 2, 3 og 4 serotyper i en fortynding på 1:10.
Figur 1: Gating strategi for erhvervelse og analyse ved flowcytometri. K562 celler inficeret med DENV RVP udtryk for normal god landbrugspraksis, der blev analyseret ved hjælp af en flow Flowcytometret. (A) ingen serumkontrol og (B) 16 uge post-ZIKV inficeret serum. Celler var først gated baseret på forward scatter område (FSC-A) vs forward scatter højde (FSH-H) at udelukke dubletter efterfulgt af en side scatter (SSC-A) vs FSC-A at udelukke debris. SSC-A vs FSC-en gated celler blev derefter gated baseret på VSK-A vs normal god landbrugspraksis-A (grøn fluorescens Protein-område). Sort rektangler og ellipser repræsenterer portene, og tal over portene er procentdelen af celler falder inden for denne port. Den sorte pil mellem FACS parceller viser rækkefølgen af gates anvendes. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: repræsentative dot parceller viser hyppigheden af DENV RVP + celler. Procentdelen af K562 celler, der var inficeret med DENV-1 RVP blev bestemt ved flowcytometri. Serum indsamlet fra en repræsentativ Rhesus makak på 16 uger efter infektion var inkuberes med DENV-1 RVP ufortyndet eller på en 1:10, 1: 100 og 1:1,000 fortyndinger og i forhold til ingen serum kontrolprøver. Procentdelen af normal god landbrugspraksis + celler for hver koncentration af serum er vist. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: betydelig forøgelse af Dengue-1, 2, 3 og 4 infektion er observeret ved 1:10 fortynding af serum. Antistof afhængig af forbedring af Dengue infektion blev undersøgt for 4 DENV serotyper af plotting serum fortyndinger på x-aksen og fold-ekstraudstyr (i forhold til ingen serum prøve kontrol) på y-aksen. Sera indsamlet fra 4 ZIKV immun rhesus makakaber på 16 uger efter infektion blev brugt i denne analyse. Fejllinjer udgør standard fejl og * repræsenterer p < 0,05. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Flavivira som DENV og ZIKV dele omfattende dokumentation af homologi i begge deres strukturelle og non-strukturelle proteiner, der genererer antistoffer, der krydsreagere med hinanden13,14. Disse cross-reactive antistof reaktioner har vist sig at øge infektion både i vivo og in vitro- med enten en heterolog serotype eller andre relaterede flavivira1,2. Potentiale til at krydse øge infektion har betydelige konsekvenser for forvaltning af sygdom og også for vaccine udvikling.
Traditionelle kultur baseret assays bruge ikke-eftergivende celler, der er smittet med smitsomme live DENV i serum. Forbedring af infektion er målt af kvantificere mængden af virus i supernatanten ved hjælp af standard plaque assays11. Denne analyse kræver kultur af virus i to cellelinjer og kræver betydeligt længere tid at udføre. Derudover, ikke alle DENV serotyperne plak på samme måde, tilføje et andet niveau af kompleksitet til disse assays.
Andre assays har ændret plaque baseret assay protokol for at måle infektion af cellelinjer ved at kombinere intracellulær farvning for DENV ved hjælp af fluorescently mærket antistoffer og flow flowcytometri9,10,14. Selvom dette reducerer tidsforbruget til at bestemme graden af infektion sammenlignet med plaque baseret er assays der en række optimering trin påkrævet for disse assays til at arbejde konsekvent. Intracellulære farvningsprotokoller er tidskrævende, da de kræver fastsættelse og permeabilizing af celler efterfulgt af intracellulær farvning og kræver godt titreret DENV specifikke antistoffer, der kan klart diskriminerer hver serotype. Derudover disse assays er ikke let indstillet til en høj overførselshastighed format og lider af høje niveauer af intra-assay variation.
I modsætning til de ovenfor beskrevne assays, DENV RVP baseret assay er nem at sætte, bruger ikke smitsomme virus, og er meget modtagelig for høj produktivitet, der let kan anvendes til at måle serum potentiale til at forbedre infektion. Desuden, denne analyse er ikke som arbejdsintensive som andre assays, og kan afsluttes inden for 2-3 dage, som byder på en stor fordel i forhold til nuværende ADE assay protokoller. Selvom analysen beskrives i håndskriftet undersøgt ZIKV inficeret serum evne til at øge infektion af DENV-1, 2, 3 og 4 serotyper, analysen kan være let tilpasses til at undersøge serum fra både eksperimentel og klinisk prøver fremstillet af andre flavivirus infektioner som gul feber virus (YFV), japansk Equine Encephalitis virus (Kathrine VINDUM) og West Nile-virus (VNV) Hvis RVP er tilgængelige, og med andre cellelinjer. Det er imidlertid afgørende at optimere analysen af tilsætningen volumen af RVP, antallet af celler/brønd og varigheden af inkubationen giver mulighed for optimal farvning af celler uden baggrunden farvning.
Titreringer skal udføres ved at inkubere et defineret antal målceller (f.eks 80.000 K562 celler eller en cellelinje testes) med varierende mængder af RVP (for eksempel, 2.5 µL, 5 µL, 7,5 µL, 10 µL, 20 µL, osv.). Når den korrekte titer for hver RVP er opnået, kan varigheden af inkubationen bestemmes ved hjælp af den opnåede titer sammen med det definerede antal celler og inkubere dem som beskrevet i protokollen for variabel perioder (eksempelvis 24 h, 48 h 72 h, osv.).
Vi observerede ADE af infektion af alle 4 serotyper af DENV ved en fortynding på 1:10, tyder på, at et antistof niveauer i serum skulle fortyndes 10-fold ægprodukters forbedring af infektion. På den anden side, har andre undersøgelser rapporteret ekstraudstyr på lavere fortyndinger, som ville indikere, at koncentrationerne af antistof i serum prøve var sandsynligvis for højt behov for lavere fortyndinger at opdage ADE in vitro. Da ADE afhænger den rigtige koncentration af antistof i serum prøve, er de fleste prøver tilbøjelige til at vise ADE på fortyndinger lavere end den ufortyndet serum.
Til sidst, den protokol, der er beskrevet i dette håndskrift er enkel og let at vedtage, og giver mulighed for skalere op til aktiverer high throughput screening af et stort antal prøver i en kort periode tidsramme at give data af høj kvalitet, der kan let analyseres og fortolket.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Beskrevet projektet var støttet af midler fra Uniformed tjenester University of Health Sciences at JJM. Udtalelser eller påstande heri er privat dem af forfatterne og ikke skal fortolkes som officielle eller reflekterende visninger af Department of Defense, Uniformed tjenester University of Sundhedsvidenskab eller ethvert andet agentur i USA Regeringen.
WGV udførte alle eksperimenter og analyseret data; JJM udviklet og overvåget undersøgelse; WGW og JJM skrev avisen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DENV 1-4 RVP | Integral Molecular | RVP-501 | |
| K562 cells | ATCC | CCL-243 | |
| RPMI | Corning | 10-040-CV | |
| FBS | GE lifesceinces | SH 30910.03 | 10% FBS in RPMI-10 |
| Penicillin-Streptomycin | MP biomedicals | 1670049 | 100 IU Pen/mL, 100 ug Strep/mL in RPMI-10 |
| HEPES | Cellegro | 25-060-Cl | 0.025M in RPMI-10 |
| MEM Non-essential Amino Acid Solution (100×) | Sigma | M7145 | 1x in RPMI-10 |
| Sodium Pyruvate | Cellegro | 25-000-Cl | 1mM in RPMI-10 |
| L-glutamine | Fisher Scientific | MT25005CI | |
| Sterile V-bottom plates | Thomas Scientific | 333-8001-01V | |
| BD Falcon Polypropylene 5 ml FACS tubes | VWR | 60819-728 | |
| Non-sterile U-bottom plates | Falcon | Ref 353910 | A high throughput alternative to FACS tubes |
| 5mL, sterile, serological pipette | Denville | P7127 | |
| 200uL sterile pipette tips | Denville | P3020 CPS | |
| 20uL sterile pipette tips | Denville | P1121 | |
| 50-200uL multichannel pipette | Denville | P3975-8-B | |
| 5-50uL multichannel pipette | Denville | P3975-9-B | |
| 20% formadehyde | Tousimis | #1008B | |
| Water Bath | ThermoFisher | TSCOL35 | |
| thermomixer | Eppendorf | 2231000387 | An alternative to a waterbath for heat inactivation |
| CO2 Incubator | ThermoFisher | 13-998-213 | |
| Ethanol | Sigma Aldrich | E7023 | |
| Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 | |
| Flowjo 9.8 | TreeStar, Inc. | Flow cytometry analysis software | |
| BD FACSDiva 6.1.2 | Becton Dikinson | ||
| BD LSR II flow cytometer | Becton Dikinson | ||
| Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 |
References
- George, J., et al. Prior exposure to zika virus significantly enhances peak dengue-2 viremia in rhesus macaques. Sci Rep. 7 (1), 10498 (2017).
- Stettler, K., et al. Specificity, cross-reactivity, and function of antibodies elicited by Zika virus infection. Science. 353 (6301), 823-826 (2016).
- Mattia, K., et al. Dengue reporter virus particles for measuring neutralizing antibodies against each of the four dengue serotypes. PLoS One. 6 (11), e27252 (2011).
- Chiofalo, M. S., Teti, G., Goust, J. M., Trifiletti, R., La Via,, F, M. Subclass specificity of the Fc receptor for human IgG on K562. Cell Immunol. 114 (2), 272-281 (1988).
- Klein, E., et al. Properties of the K562 cell line, derived from a patient with chronic myeloid leukemia. Int J Cancer. 18 (4), 421-431 (1976).
- Kliks, S. C., Nisalak, A., Brandt, W. E., Wahl, L., Burke, D. S. Antibody-dependent enhancement of dengue virus growth in human monocytes as a risk factor for dengue hemorrhagic fever. Am J Trop Med Hyg. 40 (4), 444-451 (1989).
- Littaua, R., Kurane, I., Ennis, F. A. Human IgG Fc receptor II mediates antibody-dependent enhancement of dengue virus infection. J Immunol. 144 (8), 3183-3186 (1990).
- Wang, T. T., et al. IgG antibodies to dengue enhanced for FcgammaRIIIA binding determine disease severity. Science. 355 (6323), 395-398 (2017).
- Dejnirattisai, W., et al. Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans. Science. 328 (5979), 745-748 (2010).
- Kawiecki, A. B., Christofferson, R. C. Zika virus-induced antibody response enhances dengue virus serotype 2 replication in vitro. J Infect Dis. 214 (9), 1357-1360 (2016).
- Morens, D. M., Halstead, S. B. Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies. J Gen Virol. 71 (Pt 12), 2909-2914 (1990).
- Perfetto, S. P., et al. Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry. J Immunol Methods. 313 (1-2), 199-208 (2006).
- Priyamvada, L., et al. B Cell responses during secondary dengue virus infection are dominated by highly cross-reactive, memory-derived plasmablasts. J Virol. 90 (12), 5574-5585 (2016).
- Priyamvada, L., et al. Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (28), 7852-7857 (2016).
