Ovariële weefselkweek te visualiseren verschijnselen in muis eierstok

Samenvatting

Ovariële weefselcultures kan worden gebruikt als modellen van follikel ontwikkeling, ovulatie en follikel atresie en regulerende mechanismen van dynamische ovariële processen aan te geven.

Samenvatting

Zoogdieren vrouwtjes eisprong periodiek een bijna constante aantal eicellen tijdens elke cyclus van estrus. Om dergelijke regelmaat en periodiciteit, verordening treedt op op het niveau van de hypothalamische-hypofyse-gonadale as en op de ontwikkeling van de follikels in de eierstokken. Ondanks actieve studies zijn follikel ontwikkelingsmechanismen niet duidelijk, vanwege de verschillende stappen van de activering van de slapende primordiale follikel tot ovulatie, en de complexiteit van de verordening dat verschilt in elk folliculaire fase. Voor het onderzoek naar de mechanismen van ontwikkeling van de follikel en de dynamiek van de follikels gedurende de gehele estrus cyclus, we een muis ovariële weefselkweek model ontwikkeld dat kan worden gebruikt voor het observeren van de follikel ontwikkelen met behulp van een microscoop. Systematische follikel ontwikkeling, periodieke ovulatie en follikel atresie kunnen alles worden gereproduceerd in de gekweekte ovarium-model en de kweekomstandigheden experimenteel kunnen worden gedifferentieerd. We laten hier zien het nut van deze methode in de studie van de regelgevende mechanismen van ontwikkeling van de follikel en andere ovariële verschijnselen.

Inleiding

Vrouwelijke muis eierstokken verscheidene duizend follikels¹bevatten, en periodieke ovulatie rijpt ongeveer tien eicellen op elke cyclus van estrus. Follikels zijn ingedeeld in verschillende ontwikkelingsstadia: primordial, primaire, secundaire, follikelgroei, en Graafian de follikels, afhankelijk van de vorm van de granulosa cellulaire laag rond elke oöcyt. Meeste primordiale follikels zijn slapende, en sommige van hen zijn geactiveerd en uitgroeien tot primaire follikels bij elke estrus cyclus². Na de secundaire folliculaire fase, wordt ontwikkeling van de follikel voornamelijk geregeld door gonadotrofinen, folliculair....

Protocol

Muizen werden gehuisvest in een milieuvriendelijke gecontroleerde kamer op 23 ± 1 ° C met een 12 h licht/12 h donker cyclus. Dierenverzorgers protocollen en experimenten werden uitgevoerd overeenkomstig de richtsnoeren voor dier experimenten Aichi medische universiteit en door de zittende Animal Care en gebruik Comité zijn goedgekeurd.

1. voorbereiding van de voedingsbodem en gerechten

1. Toevoegen om te bereiden fundamentele kweekmedium, foetale runderserum (FBS, 5% v/v), FSH (100 mIU/mL), LH (10 mU/mL), en penicilline-streptomycine (100 U/mL penicilline; streptomycine, 100 mg/mL) minimale essentiële middellange Alfa (MEM-α) en mix ....

Resultaten

Figuur 1 toont het protocol voor wijzigingen in de media tijdens ovariële weefselkweek. Na dit programma 4-week-oude ICR muizen eierstokken werden gekweekt en beeld intervallen van 24 uur met behulp van de confocal microscopie (Figuur 2). Tijdens de cultuur van de eierstok weefsels voor 3 weken, meest follikelgroei en secundaire follikels zijn gedegenereerd door follikel atresie en sommige waren algemeen (Fig.......

Discussie

In deze studie ontwikkelden we twee nieuwe methoden voor het bestuderen van de ontwikkeling van de follikel in de eierstokken van de muis. De eerste methode houdt cultuur van gesneden ovariële volwassen muizen weefsels gevolgd door analyse van de ontwikkeling van de follikel en de tweede impliceert het gebruik van time-lapse imaging om te visualiseren van de vroege ontwikkeling van de follikel tijdens de gonadotrofinen-onafhankelijke-fase. Eerder, wij de huidige eierstok weefselkweek methode gebruikt ter beoordeling van .......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Follicle stimulerend hormoon uit menselijke hypofyse	SIGMA	F4021
Luteïniserend hormoon uit paardenhypofyse	SIGMA	L9773
Penicilline-streptomycine oplossing	Wako Pure Chemical Industries	168-23191
MEM a, GlutaMax, geen nucleotiden	Thermo Fisher	32561037
Glasbodemschaal	MatTek	P35G-0-10-C	35mm schaal, No. 0 dekglas, 10mm glasdiameter
Millicell celkweekinsert	Merck Millipore	PICM0RG50	Diameter: 315 mm, poriegrootte: 0,4 mm, materiaal: hydrofiel PTTE
3,5 cm celkweekschalen	greiner bio-one	627160
50 ml / centrifugeerbuis met drievoudig afsluitdop	IWAKI	2345-050
Laagprofiel wegwerpmessen 819	Leica	14035838925
LSM 710	Carl Zeiss		Confocale microscoop
CellVoyager, CV1000	Yokogawa Electric Corporation		Time-lapse beeldvorming
BZ-X700	KEYENCE		Time-lapse beeldvorming