Method Article

Uso de Autometallography para localizar e quantificar semi prata em tecidos de cetáceos

DOI:

10.3791/58232

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October 4th, 2018

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1Graduate Institute of Molecular and Comparative Pathobiology, National Taiwan University, 2School of Veterinary Medicine, National Taiwan University, 3Department of Oceanography and Asia-Pacific Ocean Research Center, National Sun Yat-sen University, 4Graduate Institute of Veterinary Pathobiology, National Chung Hsing University

In This Article

Summary

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Um protocolo é apresentado para localizar Ag em cetáceos tecidos de fígado e rim por autometallography. Além disso, um novo ensaio, chamado o ensaio de Ag histológico cetáceos (CHAA) é desenvolvido para estimar as concentrações de Ag desses tecidos.

Abstract

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Nanopartículas de prata (AgNPs) têm sido usadas extensivamente em produtos comerciais, incluindo têxteis, cosméticos e itens de cuidados de saúde, devido aos seus fortes efeitos antimicrobianos. Eles também podem ser liberados no ambiente e se acumulam no oceano. Portanto, AgNPs são a principal fonte de contaminação de Ag, e está aumentando a consciência pública da toxicidade ambiental da Ag. Estudos anteriores têm demonstrado a bioacumulação (em produtores) e ampliação (em consumidores/predadores) da Ag. Cetáceos, como os predadores do apex do oceano, podem ter sido negativamente afetados pelos compostos Ag/Ag. Embora as concentrações dos compostos de Ag/Ag em cetáceos tecidos podem ser medidas por espectroscopia de massa de plasma indutivamente acoplado (ICP-MS), o uso de ICP-MS é limitado pelo seu elevado custo de capital e o requisito de armazenamento/preparação do tecido. Portanto, um autometallography (AMG) método com uma análise quantitativa de imagem usando formalin-fixas, parafina-encaixados do tecido (FFPE) pode ser um método adjuvante para localizar a distribuição de Ag a nível suborgan e estimar a concentração de Ag em cetáceos tecidos. Os sinais positivos de AMG são principalmente marrons a preto granulado de vários tamanhos no citoplasma das células de Kupffer, hepatócitos e epitélio tubular renal proximal. Ocasionalmente, alguns amorfo amarelo dourado a marrons sinais positivos de AMG são anotados no lúmen e membrana basal de alguns túbulos renais proximais. O ensaio para estimar a concentração de Ag é chamado o cetáceo histológica Ag ensaio (CHAA), que é um modelo de regressão estabelecido pelos dados da análise quantitativa de imagem do método AMG e ICP-MS. O uso de AMG com CHAA para localizar e quantificar semi metais fornece uma metodologia conveniente para estudos espácio-temporais e entre espécies.

Introduction

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Nanopartículas de prata (AgNPs) têm sido usadas extensivamente em produtos comerciais, incluindo têxteis, cosméticos e itens de cuidados de saúde, devido a seus efeitos antimicrobianos grande1,2. Portanto, a produção de AgNPs e o número de produtos que contenham AgNP são aumentadas por tempo3,4. No entanto, AgNPs pode ser liberado para o ambiente e se acumulam no oceano5,6. Eles se tornaram a principal fonte de contaminação de Ag, e está aumentando a consciência pública da toxicidade ambiental ....

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Protocol

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O estudo foi realizado em conformidade com as diretrizes internacionais, e o uso de amostras de tecido de cetáceos foi autorizado pelo Conselho de agricultura de Formosa (pesquisa permitir 104-07.1-SB-62).

1. tecido preparação de amostras para análise de ICP-MS

Nota: Os tecidos do fígado e rins foram coletados do recém morto e moderadamente autolisada encalhado cetáceos24, incluindo 6 Cetáceos encalhados de 4 espécies diferentes, 1 Grampus griseus (Gg), 2 Kogia spp. (Ko), 2 Lagenodelphis hosei (Lh), 1 Stenella attenuata (Sa). Cada Cetáceos encalhados tinh....

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Results

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Imagens representativas dos sinais positivos de AMG nos tecidos fígado e rim cetáceos são mostradas na Figura 5. Os sinais positivos de AMG incluem variàvel tamanho marrom ao preto granulado de vários tamanhos no citoplasma das células de Kupffer, hepatócitos e epitélio tubular renal proximal. Ocasionalmente, amorfo amarelo dourado a marrons sinais positivos de AMG são anotados no lúmen e membrana basal de alguns túbulos renais proximais. Há uma correlação po.......

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Discussion

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O propósito do estudo do artigo é estabelecer um método adjuvante para avaliar a distribuição do Ag em níveis de suborgan e para estimar as concentrações de Ag em tecidos de cetáceos. Os protocolos atuais incluem 1) determinação das concentrações de Ag em cetáceos tecidos por ICP-MS, análise 2) AMG de amostras de tecido par-combinadas com concentrações conhecidas de Ag, 3) o estabelecimento do modelo de regressão (CHAA) para estimar as concentrações de Ag por valores positivos de AMG, 4) avaliação da exatidão e precisão .......

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Disclosures

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Os autores não têm nada para divulgar.

Acknowledgements

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Agradecemos a rede de encalhe de cetáceos Taiwan para coleta e armazenamento, incluindo a sociedade de cetáceos de Taiwan, Taipé; o laboratório de pesquisa de cetáceos (Prof Lien-Siang Chou), o Instituto de ecologia e biologia evolutiva, Universidade Nacional de Taiwan, Taipé; Museu Nacional de ciências naturais (Dr. Yao Chiou-Ju), Taichung; e a biologia marinha & centro de pesquisa de cetáceos, Universidade Nacional de Cheng-Kung. Agradecemos também o departamento de silvicultura, Conselho de agricultura, Yuan executivo pela sua licença.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Kit de aprimoramento de prata HQNanoprobes#2012
Surgipath ParaplastLeica Biosystems39601006parafina
100% etanolMuto Pure Chemical Co., Ltd4026
Não-xilenoMuto Pure Chemical Co., Ltd4328
corrediça revestida de silanoMuto Pure Chemical Co., Ltd511614
Tampa de vidro (25 x 50 mm)Muto Pure Chemical Co., Ltd24501
MalinolMuto Pure Chemical Co., Ltd20092
GM Coloração de HematoxilinaMuto Pure Chemical Co., Ltd3008-1
Solução de formalina tamponada neutra a 10%Chin I Pao Co., Ltd---
Tip (1000 μ L)MDBio, Inc.1000
PIPETMAN Classic P1000Gilson, Inc.
Tubo de centrífuga de 15 mlGeneDireX, Inc.PC115-0500
Fígado de caçãoConselho Nacional de Pesquisa do CanadáDOLT-2
Músculo de caçãoConselho Nacional de Pesquisa do CanadáDORM-2
Espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado (ICP-MS)PerkinElmer Inc.PE-SCIEX ELAN 6100 DRC
FreeZone 6 litros sistema de liofilizaçãoLabconco7752030Para liofilização
MARCA® Balão volumétrico SILBERBRANDMerckZ326283
frasco padrão de 30 mL, interior plano com fecho de 33 mmSavillex Corporation200-030-12Para diagestação
Ácido nítrico, superpur®, 65.0%Merck1.00441Para diagestação
Placa Quente/AgitadoresCorning®PC-220Para diagestion
Misturador de laboratório de alto cisalhamentoSilversonSL2TPara homogeneização
Frasco de amostra de polipropileno estéril (250mL)Thermo Scientific™6186L05Para homogeneização
Câmera digitalNikon CorporationDS-Fi2
Microscópio de luzNikon CorporationECLIPSE Ni-U
Shandon™ Delicadeza&comércio; 325 micrótomo manualThermo Scientific™
Accu-Cut® SRM & trade; 200 micrótomo rotativoSakura1429
Lâmina de micrótomo S35FEATHER®207500000
Prato de coloração deslizante e tampaBrain Research Laboratories#3215
Suporte de coloração de açoBrain Research Laboratories#3003
Centro de incorporação ShandonThermo Scientific™S-EC
Shandon Citadel® processador de tecidosThermo Scientific™
Aquecedor de slidesLab-Line Instruments26005
Shandon Capshaw3964
Papel de filtroMerck1541-070
Prism 6.01 para WindowsGraphPad SoftwareSoftware estatístico
ImageJNational Institutes of Health
Aço inoxidável tecido que encaixa o comércioCo. de Shenyang Roundfin, LtdRD-TBM003para emedding da parafina
F123602A78100001H69800003Banho-maria

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McGillicuddy, E., et al. Silver nanoparticles in the environment: Sources, detection and ecotoxicology. Science Total Environment. 575, 231-246 (2017).
  2. Yu, S. J., Yin, Y. G., Liu, J. F. Silver nanoparticles in the environment. Enviro....

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