Reconstituição das oscilações do ciclo celular em microemulsões dos extratos de ovo sem célula Xenopus

Ye Guan; Shiyuan Wang; Minjun Jin; Haotian Xu; Qiong Yang

doi:10.3791/58240

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Artigo de método

Reconstituição das oscilações do ciclo celular em microemulsões dos extratos de ovo sem célula Xenopus

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DOI:

10.3791/58240

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27 de setembro de 2018

Ye Guan¹^,² , Shiyuan Wang¹ , Minjun Jin² , Haotian Xu³ , Qiong Yang¹^,⁴

¹Department of Biophysics, University of Michigan, Ann Arbor, ²Department of Chemistry, University of Michigan, Ann Arbor, ³Department of Computer Science, Wayne State University, ⁴Department of Physics, University of Michigan, Ann Arbor

Neste artigo

Resumo

Nós apresentamos um método para a geração de em vitro auto-sustentado mitótica oscilações no nível de célula única encapsulando extratos de ovos de Xenopus laevis em microemulsões de água em óleo.

Resumo

Medição em tempo real das oscilações no nível de célula única é importante para desvendar os mecanismos de relógios biológicos. Apesar de extratos em massa preparados a partir de ovos de Xenopus laevis foram poderosos em dissecando redes bioquímicas subjacentes a progressão do ciclo celular, sua medida média ensemble normalmente leva a uma oscilação amortecida, apesar de cada um oscilador individual sendo sustentada. Isto é devido à dificuldade de sincronização perfeita entre os osciladores individuais em sistemas biológicos barulhentos. Para recuperar a dinâmica de célula única do oscilador, desenvolvemos um sistema de célula artificial baseada em gotículas que pode reconstituir ciclos mitóticos em compartimentos de célula, como encapsular ciclismo citoplasmáticos extratos de ovos de Xenopus laevis . Essas células somente citoplasmática simples apresentam oscilações sustentadas por mais de 30 ciclos. Para construir mais complicadas células com núcleos, nós adicionamos demembranated cromatina de espermatozoides para acionar núcleos auto-montagem no sistema. Observamos uma progressão periódica de cromossomo condensação/ocorre descondensação e núcleos envolvem avaria/reforma, como nas células reais. Isso indica que o oscilador mitótico fielmente as funções para conduzir vários eventos mitóticos a jusante. Seguimos simultaneamente a dinâmica do oscilador mitótico e processos a jusante em gotículas individuais usando microscopia de fluorescência de lapso de tempo de multi-canal. O sistema de ciclo celular artificial fornece uma estrutura de alto rendimento para manipulação quantitativa e análise das oscilações mitóticas com resolução de célula única, que provavelmente fornece insights importantes sobre as máquinas reguladoras e funções de o relógio.

Introdução

Citoplasmáticos extratos preparados a partir de ovos de Xenopus laevis representam um dos modelos mais predominantes para o estudo bioquímico da célula ciclos, dado o grande volume de oócitos, a progressão do ciclo celular rápido e a capacidade de reconstituir eventos mitótica em vitro¹^,². Este sistema permitiu a descoberta inicial e caracterização mecanicista dos reguladores do ciclo celular essencial como fator de promoção da maturação (MPF), bem como a jusante processos mitóticos incluindo eixo montagem e cromossomo segregação¹ ^,²....