Arbovírus infecções como ferramentas de triagem para a identificação de fatores Antiviral Viral de imunomoduladores e Host

Emily A. Rex; Dahee Seo; Don B. Gammon

doi:10.3791/58244

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Artigo de método

Arbovírus infecções como ferramentas de triagem para a identificação de fatores Antiviral Viral de imunomoduladores e Host

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DOI:

10.3791/58244

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13 de setembro de 2018

Emily A. Rex¹ , Dahee Seo¹ , Don B. Gammon¹

¹Department of Microbiology, University of Texas Southwestern Medical Center

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos os protocolos para identificar imunomoduladores 1) vírus-codificado que promovem a replicação de arbovírus e fatores do hospedeiro 2) eucariota que restringem a replicação de arbovírus. Esses métodos baseados em fluorescência e luminescência permitem aos investigadores para rapidamente obter leituras quantitativas de replicação de arbovírus em simplistas ensaios com baixa relação sinal-ruído.

Resumo

Interferência do RNA - e genoma de edição com base em plataformas de triagem têm sido amplamente utilizados para identificar fatores de célula do hospedeiro que restringem a replicação do vírus. No entanto, essas telas geralmente são realizadas em células que são naturalmente permissivas ao patógeno viral sob estudo. Portanto, a replicação robusta de vírus em condições de controle pode limitar a gama dinâmica dessas telas. Além disso, estas telas podem ser incapazes de identificar facilmente os caminhos de defesa celular que restringem a replicação do vírus, se o vírus é capaz de combater as defesas antivirais e adaptado para o host. Neste artigo, descrevemos um novo paradigma para explorar interações vírus-hospedeiro com o uso de telas o centro na naturalmente abortiva infecções por arbovírus, tais como o vírus da estomatite vesicular (VSV). Apesar da capacidade de VSV para replicar em uma ampla gama de inseto frequentes e hospedeiros mamíferos, VSV sofre uma infecção pós-entrada, abortiva em uma variedade de linhas de células derivadas de insetos lepidópteros, como a mariposa cigana (mariposa dispar). No entanto, essas infecções de VSV abortiva podem ser "resgatadas" quando as defesas antivirais de célula do hospedeiro estão comprometidas. Descrevemos como VSV cepas codificação genes repórter conveniente e restritivas dispar L. linhagens celulares podem ser emparelhadas com telas de configuração para identificar fatores do hospedeiro envolvidos na restrição de arbovírus. Além disso, mostramos também a utilidade dessas ferramentas de triagem na identificação dos fatores virally codificados que resgatar replicação VSV durante co-infecção ou por meio de expressão ectópica, incluindo aqueles codificada pelo vírus de mamíferos. A restrição natural de replicação de VSV nas células dispar L. fornece uma alta relação sinal-ruído quando rastreio para as condições que promovem o resgate VSV, permitindo assim o uso de simplista da luminescência e fluorescência-ensaios - based para monitorar as mudanças na replicação de VSV. Essas metodologias são valiosas para a compreensão da interação entre respostas antivirais hospedeiro e fatores de evasão imune viral.

Introdução

A capacidade de um vírus de forma produtiva replicar em um host específico em parte rege-se pela disponibilidade de fatores de célula do hospedeiro que suportam entrada viral e replicação¹. A gama de vírus-host também pode ser ditada pela capacidade de um vírus para contador celular antiviral as defesas que caso contrário iria impedir a replicação viral²^,³. É o resultado dessas interações vírus-hospedeiro complexo que, finalmente, decidir se um vírus serão capaz de completar o seu ciclo de vida em um host específico. Dadas as consequências potencialmente patogénicas para o host se segue....