We presenteren een protocol om te induceren en te detecteren CMHs veroorzaakt door LPS injectie bij Sprague-Dawley ratten, die kan worden gebruikt in de toekomst onderzoek onderzoek naar de pathogenese van CMHs.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Sub acute cerebrale Microhemorrhages geïnduceerd door Lipopolysaccharide injectie bij ratten
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Cerebrale microhemorrhages (CMHs) komen vaak voor bij oude patiënten en zijn gecorreleerd aan verschillende neuropsychiatrische aandoeningen. De etiologie van CMHs is complex, en neuroinflammation wordt vaak waargenomen als een co voorkomen. Hier beschrijven we een sub acute CMHs rat model geïnduceerd door injectie van het lipopolysaccharide (LPS), evenals een methode voor het opsporen van CMHs. systemische LPS injectie is relatief eenvoudig, economisch en kosteneffectieve. Een groot voordeel van LPS injectie, is zijn stabiliteit voor het opwekken van ontsteking. CMHs veroorzaakt door LPS injectie kon worden opgespoord door bruto observatie, haematoxyline en eosine (HE) kleuring, Perl's Pruisische kleuring, Evans blauw (EB) dubbel-labeling en magnetische resonantie beeldvorming-gevoeligheid gewogen imaging (MRI-Zwi) technologie. Ten slotte worden andere methoden van de ontwikkeling van diermodellen CMHs, met inbegrip van hun voordelen en/of nadelen, ook besproken in dit verslag.
Inleiding
Klassieke cerebrale microhemorrhages (CMHs) verwijzen naar gerelateerde kleine deposito's van bloed afbraakproducten zoals Hemosiderine van rode bloedcellen in de hersenen-1. Volgens de studie Rotterdam Scan kan CMHs worden gevonden in bijna 17,8% van de personen in de leeftijd 60-69 jaar en 38,3% in die meer dan 80 jaar2. De prevalentie van CMHs bij ouderen is relatief hoog, en een correlatie tussen de accumulatie van CMHs en cognitieve en neuropsychiatrische dysfunctie geweest gevestigde3,4. Verschillende dierlijke modellen van CMHs hebben onlangs gemeld, met i....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle methoden die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door de Animal Care en gebruik Comité (ACUC) van het PLA Army General Hospital.
1. materialen
- Voorbereiding van LPS injectie
- Voeg 25 mL gedestilleerd water tot 25 mg van LPS poeder een eindconcentratie van 1 mg/mL, afgeleid van S. typhimurium . Winkel de injectie in een steriele buis bij 4 ° C.
Let op: LPS is giftig. - Bereid een 2% EB oplossing in normale zoutoplossing 0,9% EB injectie om op te houden werken concentratie.
- Voeg 25 mL gedestilleerd water tot 25 mg van LPS poeder een eindconcentratie van 1 mg/mL, afgeleid van S. typhimurium . Winkel de injectie in een steriele buis bij 4 ° C.
2. dieren
- LPS toedienen aan mannelijke ratten Sprague-Dawley (SD), ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
CMHs kunnen worden opgespoord met behulp van diverse benaderingen. De meest goed geaccepteerde methoden omvatten het volgende: (1) bruto observatie en evaluatie van oppervlakte CMHs (weergegeven in afbeelding 1, bovenste); (2) hij kleuring voor de opsporing van rode bloedcellen (afgebeeld in figuur 2A, bovenste deelvenster) of Pruisische kleuring detecting ijzer(III) ijzer afgeleid van lysis van de rode bloedcellen (
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In de afgelopen jaren toegenomen onderzoeken op CMHs. Het mechanisme van CMHs blijft echter onduidelijk is, te vragen wetenschappers om dierlijke modellen die deze bijzondere voorwaarde te simuleren. Bijvoorbeeld, Hoffmann et al. een hypoxie-geïnduceerde CMHs muismodel ontwikkeld dat laat zien dat CMHs worden veroorzaakt door hypoxie en verstoring van cerebrovasculaire autoregulatie12. Reuter et al. 5 een CMHs model in APP23-transgene muizen, waaruit bleek.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Wij danken leraar Jian Feng Lei en collega's uit de hoofdstad Medizinische Universität voor begeleiding tijdens de MRI. Wij danken ook Jing Zeng van de afdeling Neurologie, de tweede Volksrepubliek ziekenhuis van Yichang voor het verstrekken van technische ondersteuning.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| LPS | Sigma-Aldrich | L-2630 | voor ontstekingsinductie |
| EB | Sigma-aldrich | E2129 | voor EB-lekdetectie |
| DAPI-kleuringsoplossing | Servicbio | G1012 | tellingsmedium voor IF |
| Perl’s Pruisisch blauwkleuring | Solarbio | G1424 | Kit voor Pruisisch blauwkleuring |
| HE-kleuring | Solarbio | G1120 | Kit voor HE-kleuring |
| Choralhydraat | Sigma-Aldrich | 47335U | Voor anesthesie |
| Fosfaat bufferoplossing (PBS) | Solarbio | P1022 | Een soort bufferoplossing die veel wordt gebruikt in experimenten |
| 0,9% zoutoplossing | Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China | Oplossing voor perfusie | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | Een soort oplossing die veel wordt gebruikt voor fixatie |
| 20% sucrose-oplossing | Solarbio | G2461 | Een soort oplossing die veel wordt gebruikt voor fixatie |
| 30% sucrose-oplossing | Solarbio | G2460 | Een soort oplossing die veel wordt gebruikt voor fixatie |
| diergeneeskundig zalf | Solcoseryl ooggel, Bacel, Zwitserland | Voor de bescherming van rattenogen |
Referenties
- Sumbria, R. K., et al. A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds. J Neuroinflammation. 13 (1), 218(2016).
- Vernooij, M. W., et al. Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study. Neurology. 70....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
