ב פרוטוקול זה, שיטות לעריכת נישואין בתוך המשפחה צלבים, להערכת ההצלחה של אלה צלבים, מתוארים על הנמלה Vollenhovia emeryi. פרוטוקולים אלה חשובים עבור ניסויים להבנת בסיס גנטי של סקס נחישות מערכות דבוראים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
אינדוקציה והערכה של נישואי קרובים צלבים באמצעות הנמלים, Vollenhovia Emeryi
במאמר זה
סיכום
תקציר
הרכיבים גנטית ומולקולרית של המפל זוויג נחקרו בהרחבה ב דבורת הדבש, בומבוס, אורגניזם מודל hymenopteran. עם זאת, מעט מאוד ידוע על המנגנונים זוויג נמצאו ב- taxa hymenopteran-דגם אחרים, כגון נמלים. בגלל האופי המורכב של מחזורי החיים שהתפתח במינים hymenopteran, קשה לשמור על התנהלות חוצה ניסיוני בין אורגניזמים אלה במעבדה. כאן, אנו מתארים את השיטות לביצוע הרבעה צלבים, להערכת הצלחת מהצלבים האלה נמלה Vollenhovia emeryi. גרימת נישואי קרובים במעבדה בעזרת נ' emeryi, הוא פשוט יחסית בגלל הביולוגיה ייחודי של המין האנושי. באופן ספציפי, מין זה מייצר androgenetic זכרים, נקבה reproductives שהפגינו פולימורפיזם כנף, אשר מפשט זיהוי הפנוטיפים של צלבים גנטי. בנוסף, להערכת ההצלחה של נישואי קרובים היא פשוטה כמו גברים יכול להיות מיוצר באופן רציף על ידי הניחוש הראשון שלי צלבים, בעוד גברים נורמליים מופיעים רק בעונת הרבייה מוגדרים היטב בשטח. פרוטוקול שלנו מאפשרים שימוש נ' emeryi כמודל לחקור את הבסיס הגנטי והמולקולרי של מערכת קביעת מין במין נמלה.
מבוא
Taxa Eusocial Hymenopteran, כגון נמלים, דבורים, התפתחה מערכת זוויג haplodiploid אנשים אשר שאינם משפחתית ולא משפחתית הטרוזיגוטיים על קביעת מין משלימים אחד או יותר לוקוסים (CSD) הופכים נקבות, בעוד אלו שהם הומו - או hemizygous הופכים הזכרים (איור 1א')1.
רכיבים גנטית ומולקולרית מעורב המפל נחישות סקס נחקרו היטב ב דבורת הדבש, בומבוס,3,42,אורגניזם מודל hymenopteran. חקירות גנומיקה השוואתי האחרונות מראים כי דבורי הדבש ונמלים לשתף homologs בשם רבים במסלול נחישות סקס, כמו הגן נחי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. שדה אוסף ותחזוקה של המושבות (פ') Emeryi במעבדה
הערה: קינים של נ' emeryi מצויים נרקב יומני רישום של הנופלים רקובה עץ הדיגיטלי יערות משניים ברחבי יפן. מין זה מציג שני סוגים של מושבות, קרי, מושבות (1) בהפקת רק מלכות לונג-כנף, (2) מושבות בעיקר בהפקת קצר-כנף מלכות בנוסף למספר קטן של מלכות לונג-כנף8,14. ב פרוטוקול זה, אספנו הסוג האחרון של מושבות ב פריפקטורה אישיקאווה, יפן.
- לאסוף את המושבות נ' emeryi בחודשי הקיץ המוקדמים.
הערה: כדי לקבל מספר מספיק של יחידים מינית במהלך עונת הרבייה, מושבות המכיל יותר מ-300 יחידים עדיפים. - העברת דג....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
התוצאות של ניתוח microsatellite באמצעות F0 ו- F1 דורות הראה כי נישואי קרובים צלבים הופקו בהצלחה (איור 4)6. כתוצאה מכך של הניחוש הראשון שלי צלבים, ובסיומה מלכות התקבלו בתוך חודש אחד של הקמת המושבות מעבר ניסיוני. רבע (± 27.1 8.91% SD) של כל הצאצאים (F2) מן חוצה נישואי קרובים היה זכר, ואילו השארית הייתה נקבה (עובדים, מלכה)6. מיפוי QTL באמצעות הצאצא של הניחוש הראשון שלי צלבים הראו כי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מאמר זה מדגים פרוטוקולים שיכול לשמש זירוז הרבעה צלבים ולהעריך את המופע של נישואי קרובים, הנמלים נ' emeryi. בניסויים, genotyping של אנשים משמש צלבים יש צורך להבטיח כי נישואי קרובים צלבים היו מוצלחים. עם זאת, האפקטיביות של בדיקות אלה מעבר בולטת בבירור זכרים דיפלואידי יכול להיות מיוצר לאורך כל השנה, ואילו הזכרים הפלואידי יכול רק להיות מיוצר בסתיו השדה והן את המעבדה6. Sib הזדווגו המלכות להתחיל לייצר צאצא זכר מיד לאחר המעבר. אין הבדלים מורפולוגיים פנוטיפי נצפו בין זכרים דיפלואידי, הפלואידי ב
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
אנו מודים מר. תקו, הנציג של AntRoom, טוקיו, יפן, סיפק לנו את התמונה שלו של נ' emeryi reproductives. הפרויקט מומן על ידי האגודה יפן עבור המשפחה מחקר של קידום המדע (JSPS) למדענים צעירים (16J00011), מענק סיוע למדענים צעירים (B)(16K18626).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אבקת גבס | N/A | N/A | להשתמש בכל מותג |
| פחם, פעיל, אבקת | Wako | 033-02117,037-02115 | |
| זכוכית שקופיות | N/A | N/A ניתן | להשתמש בכל מותג |
| דיאטת קריקט יבש | N/A | N/A | להשתמש בכל מותג |
| Brown shuger | N/A | N / A | ניתן להשתמש בכל מותג |
| מארז סטירן בצורת ריבוע | כאחד | כל גודל | גודל משתנה לפי מספר הנמלים |
| Incbator | ניתן להשתמש בכל מותג | ||
| בלוק אלומיניום יחידת תרמו יבשה DTU-1B | TAITEC | 0014035-000 | |
| 1.5 מ"ל Hyper Microtube, שקוף, תחתון עגול | WATSON | 131-715CS | |
| אתנול (99.5) | Wako | 054-07225 | |
| מיקרוסקופ סטריאוסקופי | N/A | N/A | להשתמש בכל מותג |
| Forseps | DUMONT | 0108-5-PO | |
| Chelex 100 נתרן בצורת | SIGMA | 11139-85-8 | |
| טבליות מלח פוספט (PBS), pH7.4 | TaKaRa | T9181 | |
| Paraformaldehyde | Wako | 162-16065 | |
| -Cellstain- תמיסת DAPI | Dojindo Molecular Technologies | D523 | |
| ABI 3100xl מנתח גנטי | יישומי ביו-סיסטמס | צור קשר ישירות עם הבנאי לקבלת מידע נוסף. | |
| מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי Leica TCS SP8 | Leica | צור קשר ישירות עם הקונסטרוקטור לקבלת מידע נוסף. | |
| HC PL APO CS2 20x/0.75 IMM | Leica | צור קשר ישירות עם הבנאי לקבלת מידע נוסף. | |
| HC PL APO CS2 63x/1.20 WATER | Leica | צור קשר ישירות עם הבנאי לקבלת מידע נוסף. | |
| Leica HyDTM | Leica | צור קשר ישירות עם הבנאי לקבלת מידע נוסף. | |
| Leica Application Suite X (LAS X) | Leica | צור קשר ישירות עם הבנאי לקבלת מידע נוסף. |
מקורות
- Mable, B. K., Otto, S. P. The evolution of life cycles with haploid and diploid phases. BioEssays. 20 (6), 453-462 (1998).
- Beye, M., Hasselmann, M., Fondrk, M. K., Page, R. E., Omholt, S. W. The gene csd is the primary signal for sexual development in the honeybee....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
