ميكرورنا الرئة "التنميط عبر الشبقية دورة" في الفئران المعرضة للأوزون

ملخص

هنا يمكننا وصف أسلوب تقييم التعبير الرئة من ميرناس التي من المتوقع لتنظيم الجينات التحريضية استخدام الفئران المعرضة للأوزون أو تصفية الهواء في مراحل مختلفة من دورة الشبقية.

الملخص

التنميط ميكرورنا (ميرنا) أصبحت ذات الأهمية للباحثين العاملين في مختلف مجالات البحوث في علم الأحياء والطب. وتبين الدراسات الحالية واعدة مستقبلا من استخدام ميرناس في التشخيص ورعاية أمراض الرئة. هنا، علينا أن نحدد بروتوكول لميرنا التنميط لقياس الوفرة النسبية لمجموعة من ميرناس وتوقع لتنظيم الجينات التهاب في أنسجة الرئة من طراز الماوس التهاب مجرى الهواء الناجم عن الأوزون. لأنه قد ثبت أن تعميم مستويات هرمون الجنس يمكن أن تؤثر على تنظيم الحصانة الفطرية الرئة لدى الإناث، والغرض من هذا الأسلوب وصف ميرنا تحريضية التنميط البروتوكول في الفئران الإناث، آخذا في الاعتبار دورة الشبقية مرحلة كل حيوان في وقت التعرض للأوزون. ونحن أيضا معالجة النهج المعلوماتية المطبقة على ميرنا الاكتشاف والهدف التعرف على أساليب استخدام ليما، برنامج البحث والتطوير/بيوكوندوكتور، والمقترنة ببرامج التحليل الوظيفي لفهم السياق البيولوجي ومسارات التعبير ميرنا التفاضلية.

المقدمة

ميكرورناس (ميرناس) هي قصيرة (19 إلى 25 النيوكليوتيدات)، تحدث بشكل طبيعي، غير الترميز جزيئات الحمض النووي الريبي. تسلسل ميرناس تطورية حفظت عبر الأنواع، مما يشير إلى أهمية ميرناس في تنظيم الوظائف الفسيولوجية¹. ميكرورنا التعبير التنميط وقد ثبت أن تكون مفيدة لتحديد ميرناس التي تعتبر مهمة في تنظيم مجموعة متنوعة من العمليات، بما في ذلك الاستجابة المناعية، وتمايز الخلية، والعمليات الإنمائية، والمبرمج². في الآونة الأخيرة، قد تم الاعتراف ميرناس لاحتمال استخدامها في تشخيص الأمراض والمداواة. للباحثين الذين يدرسون آليات لتنظيم الجينات وقياس التعبير ميرنا يمكن أن ينير نماذج النظم مستوى العمليات التنظيمية، لا سيما عندما يتم دمج المعلو....

البروتوكول

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة ولاية بنسلفانيا.

1-تقييم مرحلة دورة الشبقية

1. كبح جماح أنثى الفأر C57BL/6 (8-9 أسابيع من العمر) باستخدام الماوس بيد واحدة ضبط النفس الأسلوب الموصوفة في ماكهولز et al.¹⁰بشكل صحيح.
2. ملء الماصة البلاستيكية العقيمة مع 10 ميكروليتر من المياه النقية فائقة.
3. إدخال تلميح الماصة البلاستيكية في المهبل.
4. تدفق السائل برفق في 4 – 5 مرات لجمع العينة.
5. ضع دافق النهائية التي تحتوي على السوائل المهبلية على شريحة زجاج.
6. مراقبة تدفق المهبلية أونستينيد تحت مجهر خفيفة ذات هدف 20 x.
   مل....

النتائج

تستخدم أنواع مختلفة من الخلية لوحظ في مسحات لتحديد مرحلة دورة الشبقية الماوس (الشكل 1). يتم تعريف هذه بواسطة مورفولوجيا الخلايا. أثناء بروستروس، خلايا حصرا تقريبا مجموعات مستدير، وشكل جيد الأنوية الخلايا الظهارية (الشكل 1A). عندما يكون الماوس في مرحلة السفاد، الخلايا هي الخلايا الظهارية الحرشفية كورنيفيد، وموجودة في مجموعات سكانية معبأة (الشكل 1B). أثناء ميتيستروس، وينظر كورنيفيد الخلايا الظهارية وال.......

المناقشة

MicroRNA التنميط أسلوب مفيد لتشخيص الأمراض والأبحاث الميكانيكية. في هذه المخطوطة، حددنا بروتوكولا لتقييم التعبير عن ميرناس الذي يتوقع أن تنظم جينات التهاب في الرئتين من الإناث الفئران المعرضة للأوزون في مراحل مختلفة من دورة الشبقية. أساليب لتحديد دورة الشبقية، مثل طريقة الكشف البصري، قد وصف¹⁶. ومع ذلك، هذه تعتمد على القياسات مرة واحدة، ولذلك لا يمكن الاعتماد عليها. لتحديد بدقة جميع مراحل دورة الشبقية في الإناث أن دورة بانتظام، ينصح بالطريقة الموضحة هنا. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضا استخدام هذا الب.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
C57BL / 6J الفئران	مختبر جاكسون	000664	8 أسابيع
من العمر ماصة بلاستيكية معقمة	10813012		Thermo Fisher
	Fisher Scientific	13-711-25	السعة: 1.7 مل
شرائح مجهر	Thermo Fisher Scientific	2951TS
المجهر الخفيف العالم المجهر		MW3-H5	10x و 20x موضوعي
Ketathesia- حقن الكيتامين HCl USP	هنري شاين صحة	55853	90 مجم / كجم. المخدرات الخاضعة للرقابة.
زيلازين معقم	مختبرات لويد	139-236	10 مجم / كجم. المخدرات الخاضعة للرقابة.
BP2818100	الإيثانول	فيشر العلمي	يخفف إلى 70٪ من الإيثانول بالماء.
21 G إبرة	قياس BD Biosciences	305165
حقنة	فيشر Scientific	329654	1 مل
مقص التشغيل	World Precision Instruments	501221 ، 504613	14 سم ، حاد / حاد ، منحني و 9 سم ، مستقيم ، ناعم حاد
تلميح ملاقط	Precision	Instruments 504616
Spectrum  سحق الأنسجة Bessman	Fisher Scientific	08-418-1	السعة: 10 إلى 50 مجم
أنابيب Microfuge خالية من RNase	Thermo Fisher	Scientific AM12400	1.5 مل
TRIzol كاشف	Thermo Fisher Scientific	15596026
Direct-zol RNA MiniPrep Plus	Zymo Research	R2071
NanoDrop	Thermo Fisher Scientific	ND-ONE-W
مجموعة miScript II RT	Qiagen	218161
الاستجابة الالتهابية للفأر & المناعة الذاتية miRNA PCR Array	Qiagen	MIMM-105Z
أنابيب PCR رقيقة الجدران وخالية من DNase وخالية من RNase	Thermo Fisher	Scientific AM12225	ل 20 مو ؛ تفاعلات
L miRNeasy المصل / البلازما التحكم في سبايك	في Qiagen	219610
مايكروسوفت	إكسل مايكروسوفت كوربوريشن		https://office.microsoft.com/excel/
تحليل مسار الإبداع	برنامج Qiagen		https://www.qiagenbioinformatics.com/products/ingenuity-pathway-analysis/
R	مؤسسة		Rhttps://www.r-project.org/
حراري أو كتلة تبريد / تسخين	مورد
طرد مركزي	دقيق مورد
الوقت الحقيقي PCR cycler	مورد
ماصة متعددة القنوات	مختبر
RNA	مخزن مؤقت Zymo Research	R1003-3-48	48 مل
هضم الحمض النووي	Zymo Research	E1010-1-4	4 مل
من الحمض النووي الريبي قبل الغسيل عازل	Zymo Research	R1020-2-25	25 مل
محلل الأوزون بالأشعة فوق البنفسجية	Teledyne API	Model T400	http://www.teledyne-api.com/products/oxygen-compound-instruments/t400
وحدات التحكم في التدفق الشامل	Sierra Instruments Inc	Flobox 951/954	http://www.sierrainstruments.com/products/954p.html

UltraPure Water Scientific بلوري محلول كيت World تدوير مختبر عام جهاز مختبر عام في مختبر عام مورد عام مخزن غسيل من محلول