Hier presenteren we een protocol om te verkrijgen stromale vasculaire breuk van adipeus weefsel door middel van een reeks van mechanische processen, waaronder membraanemulsificatie en meerdere centrifugations.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Mechanische micronisatie voor Lipoaspirates voor regeneratieve therapie
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Stromale vasculaire breuk (SVF) is uitgegroeid tot een regeneratieve instrument voor verschillende ziekten; wetgeving regelt echter strikt de klinische toepassing van cel-producten met behulp van collagenase. Hier presenteren we een protocol voor het genereren van een injecteerbare mengsel van SVF cellen en inheemse extracellulaire matrix uit vetweefsel langs zuiver mechanische weg. Lipoaspirates zijn een centrifuge gestoken en gesponnen op 1.200 x g gedurende 3 minuten. De middenlaag wordt verzameld en gescheiden in twee lagen (hoge dichtheid onderaan) en lage dichtheid vet op de top. De bovenste laag is direct geëmulgeerd door intersyringe verschuift, met een snelheid van 20 mL/s voor 6 x tot 8 x. Het geëmulgeerd vet wordt gecentrifugeerd bij 2.000 x g gedurende 3 minuten, en de kleverige substantie onder de olie laag is verzameld en gedefinieerd als de extracellulaire matrix (ECM) / SVF-gel. De olie in de bovenste laag wordt verzameld. Ongeveer 5 mL olie is toegevoegd aan 15 mL high-density vet en geëmulgeerde door intersyringe verschuift, met een snelheid van 20 mL/s voor 6 x tot 8 x. Het geëmulgeerd vet wordt gecentrifugeerd bij 2.000 x g gedurende 3 minuten, en de kleverige substantie is ook ECM/SVF-gel. Na de transplantatie van de ECM/SVF-gel in naakt muizen, is de prothese geoogst en beoordeeld door histologische onderzoek. Het resultaat geeft aan dat dit product heeft het potentieel om te regenereren in normale adipeus weefsel. Deze procedure is een eenvoudige, effectieve mechanische dissociatie te condenseren van de cellen van de FØROYA ingebed in hun natuurlijke ondersteunende ECM voor regeneratieve doeleinden.
Inleiding
Stamcel-therapieën bieden een paradigmaverschuiving voor weefselherstel en regeneratie zodat zij een alternatieve therapeutische regime voor verschillende ziekten1 bieden kunnen. Stamcellen (b.v., geïnduceerde pluripotente stamcellen en embryonale stamcellen) hebben een groot therapeutisch potentieel maar zijn beperkt als gevolg van cel regelgeving en ethische overwegingen. Adipeus afkomstige mesenchymale stromale/stamcellen (ASC's) zijn eenvoudig te verkrijgen van lipoaspirates en niet onderworpen aan dezelfde beperkingen; het is dus een ideale celtype voor praktische regeneratieve geneeskunde2geworden. Bovendi....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Dit onderzoek werd goedgekeurd door de ethische Review Board in Nanfang ziekenhuis, Guangzhou, China. Adipeus weefsel werd bijeengezocht uit gezonde donoren die gaf schriftelijke geïnformeerde toestemming deel te nemen aan de studie. Alle dierproeven werden goedgekeurd door het Nanfang ziekenhuis institutionele Animal Care en gebruik Comité en uitgevoerd volgens de richtlijnen van de National Health and Medical Research Council (China).
1. ECM/SVF-gel voorbereiding
- Oogst de vet.
- Liposuctie uitvoeren op een mens met een 3-mm MPS canule, waarin diverse scherpe kant gaten van 1 mm in diameter, aan de-0.75 atm voor zuigdruk.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Na het verwerken van het vet van de Coleman op ECM/SVF-gel, neemt het volume van de weggegooide olie 80% van het uiteindelijke volume, en slechts 20% van het vetweefsel onder de olie laag bewaard wordt beschouwd als ECM/SVF-gel(Figuur 1). ECM/SVF-gel heeft een gladde vloeistof-achtige textuur die het mogelijk maakt om te gaan via een fijne naald van 27 G; echter, Coleman vet bestaat uit een integraal obesitas structuur met grote vezels en kan.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Stamcel-based regeneratieve therapie blijkt een grote potentiële voordelen in verschillende ziekten. ASC's zijn uitstekende therapeutische kandidaten omdat ze gemakkelijk te verkrijgen en de capaciteit voor weefselherstel en de regeneratie van nieuwe weefsels15. Er zijn echter beperkingen aan het uitbreiden van de klinische toepassing ervan, omdat het vereist gecompliceerde procedures om cellen en collagenase voor de verwerking van6te isoleren. Het is dus essentieel voor he.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd gesteund door de National Nature Science Foundation uit China (81471881, 81601702, 81671931), de Stichting van de natuurwetenschappen van de provincie Guangdong (2014A030310155), en het beheerder Stichting van Nanfang ziekenhuis (2014B009, 2015Z002, 2016Z010, 2016B001).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 488-geconjugeerd isolectin GS-IB4 | Molecular Probes | I21411 | |
| guinea pig anti-muis perilipin | Progen | GP29 | |
| DAPI | Thermofisher | D1306 | |
| pipet met brede punt | Celltreat | 229211B | |
| confocale microscoop | Leica | TCS SP2 | |
| nude muis | Southern Medical University | / | |
| lichtmicroscoop | Olympus | / | |
| 50 mL buis | Corning | 430828 | |
| steriele zak | Laishi | / | |
| microtoom | Leica | CM1900 | |
| centrifuge | Heraeus |
Referenties
- Bateman, M. E., et al. Using Fat to Fight Disease: A Systematic Review of Non-Homologous Adipose-Derived Stromal/Stem Cell Therapies. Stem Cells. 36 (9), 1311-1328 (2018).
- Baer, P. C., Geiger, H.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
