ここでは、一連の機械的なプロセス、乳化および複数の遠心を含む脂肪組織から間質血管の一部を取得するためのプロトコルを提案する.
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この記事について
サマリー
要約
様々 な疾患の再生ツールとなっている間質血管分数 (SVF)しかし、法律は厳密にコラゲナーゼを使用して細胞製品の臨床応用を調整します。ここでは、純粋に機械的なプロセスによって、脂肪組織から SVF 細胞と細胞外マトリックスのネイティブの注射混合物を生成するためのプロトコルを提案する.成人は遠心分離機に入れ、3 分間 1,200 x gでスピンします。中間層の収集し、二層 (下部に高密度脂肪) と上に低密度脂肪に分かれています。上位層を直接 8 x 6 x 用 20 mL/秒のレートで intersyringe シフトすることによって乳化します。乳化脂肪は 3 分間 2,000 × gで遠心分離し、油の層の下に粘着性物質が収集され、細胞外マトリックス (ECM) として定義されている/SVF ゲル。最上層に油が収集されます。約 5 mL のオイルは、高密度脂肪 15 mL に追加され、intersyringe シフト、6 x 8 x に 20 mL/秒のレートで乳化します。乳化脂肪は 3 分間 2,000 × gで遠心分離し、粘着性物質も ECM/SVF-ゲルです。ECM/SVF-ゲルのヌードマウスへの移植後、移植、収穫、組織検査によって評価。結果は、このプロダクトに通常の脂肪組織に再生成する可能性があることを示しています。この手順は、再生のための自然な支援の ECM に埋め込まれた SVF 細胞を凝縮して、シンプルで効果的な機械的解離プロシージャです。
概要
幹細胞療法は、様々 な疾患1の代替治療を提供することがありますので、組織の修復・再生のためのパラダイム シフトを提供します。幹細胞 (例えば、誘導多能性幹細胞、胚性幹細胞) は偉大な治療可能性を秘めているが、携帯規制と倫理的配慮により制限されます。脂肪由来間葉系間質/幹細胞 (Asc) は成人と同じ制限を受けないを入手しやすいしたがって、実用的な再生医療2理想的なセルタイプをなっています。加えて、彼らは nonimmunogenic して自家脂肪3から豊富な資源があります。
現在、Asc は、脂肪組織のコラゲナーゼを介した消化によって主に得られます。脂肪組織の間質の血管分数 (SVF) には、Asc、内皮前駆細胞、血管、免疫細胞が含まれています。有益な効果があることが示された酵素によって SVF/Asc の高密度を取得、いくつかの国の法律は厳密にコラゲナーゼ4を使用してセル ベースの製品の臨床応用を調整します。SVF のセルを取得する 1 時間 30 分のコラゲナーゼと脂肪の消化準備し、生物学的汚染両方の外因性物質のリスクが高まります。付着性文化と日を週には、Asc、精製特定の検査機器が必要です。さらに、ほとんどの研究では、懸濁液中の SVF セルと Asc が使用しま....
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プロトコル
この研究は、南方病院、広州、中国の倫理審査委員会によって承認されました。脂肪組織は健康なドナーから与えたインフォームド コンセントを書かれて、研究に参加する収集されました。すべての動物実験は南方病院機関動物ケアおよび使用委員会によって承認され、国民の健康および医学研究評議会 (中国) のガイドラインに従って実行されます。
1. ECM/SVF-ゲル作製
- 脂肪を収穫します。
- -0.75 で直径 1 mm のいくつかの鋭い側面穴を含む 3 mm のマルチポート カニューレと人間に脂肪吸引を行う吸引圧の atm。
- 滅菌バッグで成人の 200 mL を収集します。
- コールマン脂肪を準備します。
- 4 つの 50 mL チューブに、成人を転送でき、10 分のためにまだ立って収穫された脂肪。
- 転送する広い先端のピペットを使用して、最上位のレイヤーに 2 つの 50 mL チューブに脂肪を収集し、底層の液体の部分を破棄します。
- レイヤーを使用して 50 mL チューブ、centrifugate 脂肪 1,200 x g (RT) 室温で 3 分間。
- コールマン脂肪として上位層 (約 80 mL) を定義します。
- 全体チップ ピペットを用いて 20 mL チューブにコール....
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結果
ECM/SVF-ゲルにコールマン脂肪を処理した後破棄された石油の量は最終巻の 80% とオイルの層の下で保持される脂肪の 20% だけは ECM/SVF-ゲル (図 1A) とみなされます。ECM/SVF-ゲルは 27 G 針; を通過することができます滑らかな液体のような質感しかし、コールマン脂肪は大規模な繊維と一体脂肪構造で構成されています、18 G カニューレ (図 1B) を通過することができますのみ。
移植後 3 日目、複数の細胞内脂肪滴、豊富な血管に富んだ結合組織浸潤炎症細胞と脂肪細胞を小型の多数に出演。15 日以降は、徐々 に減少に開始された炎症細胞の数と脂肪細胞が成熟し始めた。90 日でグラフト血管の結合組織のほとんどは、成熟脂肪細胞 (
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ディスカッション
幹細胞を用いた再生治療法は、さまざまな病気に大きな潜在的な利点を示しています。簡単に取得し、組織の修復と15新しい組織の再生能力を持っているので、Asc、卓越した治療候補です。ただし、セルおよび6を処理するコラゲナーゼを分離する複雑な手続きを必要とするので、臨床応用を拡大する制限があります。したがって、コラゲナーゼを使用せず幹細胞を取得する単純な手法の開発が不可欠です。
本研究ではネイティブ脂肪 ECM によって保護されている SVF のセルを取得する脂肪組織の純粋に機械的なプロセスを提案します。さらに、このプロセスは、コラゲナーゼ無料です。前研究と比較して異なる intersyringe 回を処理および 10 mL/秒の流量で 1 分は ECM/SVF-ゲル12を製造するための最適なプロトコル、標準コールマン脂肪の intersyringe 処理がわかった。Intersyringe シフトを使用することにより、成人のほとんどの脂肪細胞は、.......
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開示事項
著者が明らかに何もありません。
謝辞
この作品は (81471881、81601702、81671931) 中国の国家自然科学基金、中国の広東省 (2014A030310155) の管理者南方病院財団 (2014B009、自然科学財団によって支えられました。2015Z002、2016Z010、2016B001)。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 488-標識イソレクチン GS-IB4 | 分子プローブ | I21411 | |
| モルモット 抗マウス ペリリピン | Progen | GP29 | |
| DAPI | サーモフィッシャー | D1306 | |
| ワイドチップピペット | セルトリート | 229211B | |
| 共焦点顕微鏡 | ライカ | TCS SP2 | |
| ヌードナイス | 南医学大学 | / | |
| 光学顕微鏡 | オリンパス | / | |
| 50mLチューブ | コーニグ | 430828 | |
| 滅菌袋 | ライシ | / | |
| ミクロトーム | ライカ | CM1900 | |
| 遠心分離機 | Heraus |
参考文献
- Bateman, M. E., et al. Using Fat to Fight Disease: A Systematic Review of Non-Homologous Adipose-Derived Stromal/Stem Cell Therapies. Stem Cells. 36 (9), 1311-1328 (2018).
- Baer, P. C., Geiger, H.
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再版と許可
