يقدم هذا البروتوكول طريقة موحدة لزراعة خلايا VX2 في الثقافة وإنشاء نموذج VX2 تقويم العظام من سرطان بطانة الرحم مع الانبثاث العقدة الليمفاوية خلف الحالب في الأرانب. نماذج سرطان بطانة الرحم تقويم العظام مهمة للدراسة قبل السريرية لطرائق التصوير الجديدة لتشخيص الانبثاث العقدة الليمفاوية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج سرطان بطانة الرحم التثهي مع اعتلال الغدد الليمفاوية الرجعية المصنوعة من في فيفو الخلايا VX2 المنتشرة والمستزرعة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
سرطان بطانة الرحم هو الأورام الخبيثة النسائية الأكثر شيوعا في أمريكا الشمالية والإصابة آخذة في الارتفاع في جميع أنحاء العالم. يتكون العلاج من جراحة مع أو بدون العلاج العجيدي اعتمادا على مشاركة العقدة الليمفاوية كما يحددها استئصال العقد الليمفاوية. استئصال العقد الليمفاوية هو إجراء المهووسين، والتي لم يثبت أن لها فائدة علاجية في العديد من المرضى، وبالتالي هناك حاجة إلى طريقة جديدة لتشخيص الانبثاث العقدة الليمفاوية. لاختبار عوامل التصوير الجديدة، هناك حاجة إلى نموذج موثوق به من سرطان بطانة الرحم مع الانبثاث العقدة الليمفاوية خلف الحالب. وقد تم وصف نموذج سرطان بطانة الرحم VX2 في كثير من الأحيان في الأدب; ومع ذلك، يوجد تباين كبير فيما يتعلق بطريقة إنشاء النموذج. وعلاوة على ذلك، لم تبلغ أي دراسات عن استخدام خلايا VX2 المستزرعة لإنشاء هذا النموذج حيث أن الخلايا التي يتم نشرها في الجسم الحي هي فقط التي استخدمت في السابق. هنا، نقدم طريقة جراحية موحدة وطريقة رصد ما بعد الجراحة لإنشاء نموذج سرطان بطانة الرحم VX2 وتقديم تقرير عن الاستخدام الأول لخلايا VX2 المستزرعة لإنشاء هذا النموذج.
المقدمة
سرطان بطانة الرحم، أو سرطان بطانة الرحم، هو ثاني أكثر الأورام الخبيثة النسائية شيوعا في جميع أنحاء العالم والأورام الخبيثة الأكثر شيوعا في الدول المتقدمةالنمو 1. وقد ازداد معدل الإصابة بسرطان بطانة الرحم بشكل مطرد، حيث ارتفع بنسبة 2.3 في المائة سنوياً بين عامي 2005 و2013 مع زيادة مقابلة بنسبة 2.2 في المائة في الوفيات1و2و3. تشخيص الانبثاث العقدة الليمفاوية هو أمر بالغ الأهمية كما وجود العقد الليمفاوية الإيجابية هو توقع سلبي قوي من البقاء على قيد الحياة4،5،6
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
إغلاق جدار البطن العميق: تحديد قمة الشق العبي وفهم العضد، والعضلات المستقيمة واللفافة مع ملقط الأنسجة. وقد أجريت جميع الدراسات الحيوانية في المرافق المعتمدة من مركز الموارد الحيوانية (ARC) التابعة للشبكة الصحية الجامعية ووفقا ً لبروتوكولات الاستخدام ورعاية الحيوانات المعتمدة (AUP #3994/#4299). تم الحصول على خط الخلية VX2 من مختبر الدكتور أكين في الشبكة الصحية الجامعية.
1. إنشاء في المختبر VX2 خط الخلية
- حصاد الورم VX2 من العضلات رباعية الأرنب والنمو في الجناح الماوس.
- إذابة كتل الورم VX2 المجمدة (1 سم × 1 سم)، mince على لوحة الثقافة باستخدام شفرة مشرط وسلالة من خلال مرشح 70 ميكرومتر عن طريق إضافة كميات صغيرة من حل الملح المت....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم استخدام 28 أرنبًا لإنشاء نموذج سرطان بطانة الرحم. وكان متوسط وزن الأرانب 2.83 كغم (2.71-3.58 كغم) وقت التجربة. نمت أورام الرحم بنجاح في 21 الأرانب لمعدل نجاح نموذج عام من 75٪. قبل إدراج خياطة الرحم في البروتوكول، كان معدل النجاح 57٪ مقارنة مع 81٪ بعد إضافة خياطة الرحم. تمت إضافة خياطة الرحم إلى البروتوكول بعد الأرنبالسابع استجابة لمعدل نجاح النموذج المنخفض الأولي. تم إنشاء خمسة نماذج من خلايا VX2 المستزرعة (حاولت في 8 أرانب، 63٪ معدل النجاح) وتم إنشاء 16 نماذج الأرانب من في .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا, وقد أبلغنا عن طريقة جراحية موحدة لإنشاء نموذج سرطان بطانة الرحم VX2 وأبلغنا عن أول استخدام لخلايا VX2 المستزرعة لإنشاء هذا النموذج. معدل أخذ الورم من 75٪ هو أقل من معدل 100٪ التي سبق الإبلاغ عنها في الأدب35،37،53،56؛ ومع ذلك، thw 90٪ معدل الانبثاث العقدة الليمفاوية المؤكدة مرضيا يتسق مع الدراسات السابقة لهذا النموذج35،53.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم تمويل هذه الدراسة من قبل معهد تيري فوكس للبحوث (PPG#1075)، والمعهد الكندي للبحوث الصحية (مؤسسة منحة #154326)، والمعهد الكندي لبحوث جمعية السرطان (704718)، والعلوم الطبيعية ومجلس البحوث الهندسية في كندا، مؤسسة Сanada للابتكار ومؤسسة الأميرة مارغريت للسرطان.
وأود أن أشكر الدكتورمارغريت أكنز لتوفير الخلايا VX2 الأولية لإنشاء نموذج VX2 الأولي وكتل الورم VX2 المجمدة. أود أن أشكر ماركو ديغرابا للمساعدة في إجراء التجارب الأولية لثقافة الخلايا VX2 وليلي ديينغ للمساعدة في ثقافة الخلايا VX2.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مشرط 11 شفرة ، معقم ، يمكن التخلص | Aspen Surgical (VWR) | 80094-086 | |
| قسطرة وريد الأذن 22-gague | CDMV | 14332 | |
| 3-0 خياطة خيوط متعددة قابلة للامتصاص (Polysorb) | خياطة Covidien | 356718 | |
| 3-0 مضفرة قابلة للامتصاص (Polysorb) | مصفاة خلايا Covidien | 356718 | |
| 70uM ، ملفوفة بشكل فردي ، نايلون | Falcon | 352350 | |
| Acepromazine (Atravet) | CDMV | 1047 | |
| صابون البيتادين (Poviodone iodine 7.5٪) | CDMV | 4363 | |
| محلول البيتادين (Poviodon اليود 10٪) | متاجر UHN | 457955 | |
| البوبرينورفين | ماكجيل | ||
| للمرضى الداخليين | بجامعة سيفازولين | لا حاجة للقط # | |
| محلول الكلورهيكسيدين | CDMV | 119872 | |
| Corning BioCoatCellware ، الكولاجين من النوع الأول ، أطباق 100 مم | Corning | 354450 | العلامة التجارية ليست مهمة |
| Corning BioCoatCellware ، الكولاجين من النوع الأول ، 24 بئر من الأطباق | Corning | 354408 | العلامة التجارية ليست مهمة |
| Corning BioCoatCellware ، الكولاجين من النوع الأول ، 6 ألواح آبار Corning | 354400 | العلامة التجارية لا | |
| مصفوفة غشاء القاعدة Corning Matrigel الهامة ، * خالية من LDEV ، 10 مل | Corning | 354234 | |
| DMEM / HAM F12 1: 1 | Life Technologies | 11320 | العلامة التجارية ليست مهمة |
| DMSO | Caledon Lab Chem | 1/10/4100 | |
| Enrofloxacin (Baytril عن طريق الحقن) | CDMV | 11242 | |
| Falcon Tube | Corning Centri-Star | 430828 | |
| مصل الأبقار الجنيني ، مؤهل ، من أصل كندي ، 500 مل | Life Technologies | 12483020 | العلامة التجارية / المصدر غير المهم |
| صيدلية Isoflurane | UHN للمرضى الداخليين | لا قطة # مطلوب | |
| تباين Isohexol | GE Healthcare | 407141210 | |
| Meloxicam (Metacam 0.5٪) | CDMV | 104674 | |
| ماركة البيت الملحي العادي | (UofT Medstore) | 1011 | |
| PBS | Multicell أو Sigma | 331-010-CL أو D8537-500mL | |
| Penicillin / Streptomycin (100 مل ؛ 10000U بنسلين ، 10000ug ستربتومايسين) | Corning-Cellgro | CA45000-652 | |
| محلول ملح متوازن معقم Hanks (-Ca ++ ، -mg ++ ، -فينول أحمر) | T.C.M.F (دكتور بريستو) | 28-Jan-11 | |
| غراء جراحي (لاصق الأنسجة) 3M | Vetbond | 14695B | |
| Trypsin (0.25٪) ، Proteomics Grade | Sigma | T-6567-5X20UG | |
| Trypsin-EDTA ، 0.05٪ ، 100 مل | Wisent Inc | 325-542-EL | العلامة التجارية ليست مهمة |
المراجع
- Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
- Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic canc....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
