مجموعة FL-DNA التشخيصية المقدمة هي طريقة موفرة للوقت وسهلة الاستخدام لتحديد الاحتمال الموثوق بوجود آفات سرطان القولون والمستقيم.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقييم مخاطر الإصابة بسرطان القولون والمستقيم وانتشاره عن طريق الكشف عن سلامة الحمض النووي البراز
في هذه المقالة
إشعار تصحيح
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
ملخص
الملخص
في الوقت الحاضر، يمكن عزل الحمض النووي البراز وتحليلها بعدة طرق. يمكن الكشف عن الأجزاء الطويلة من الحمض النووي في البراز عن طريق فحص qPCR ، مما يوفر احتمالًا موثوقًا به لوجود آفات القولون والمستقيم قبل النيوبلاستيك أو النيوبلاستيك. هذه الطريقة، تسمى الحمض النووي الطويل فلورسينس (FL-DNA)، هي إجراء سريع وغير جراحي يعد تحسينًا على نظام الوقاية الأولي. وتستند هذه الطريقة إلى تقييم سلامة الحمض النووي البرازي عن طريق التضخيم الكمي لأهداف محددة من الحمض النووي الجينومي. على وجه الخصوص ، فإن تقييم شظايا الحمض النووي لفترة أطول من 200 bp يسمح بالكشف عن المرضى الذين يعانون من آفات القولون والمستقيم مع خصوصية عالية جدا. ومع ذلك، فإن هذا النظام وجميع اختبارات الحمض النووي البراز المتاحة حاليا ً تعرض بعض القضايا العامة التي تحتاج إلى معالجة (على سبيل المثال، وتيرة إجراء الاختبارات والعدد الأمثل من عينات البراز التي يتم جمعها في كل نقطة زمنية لكل فرد). ومع ذلك ، فإن الميزة الرئيسية لFL-DNA هي إمكانية استخدامه بالاقتران مع اختبار يستخدم حاليًا في برنامج فحص CRC ، المعروف باسم اختبار الدم الغامض البرازي القائم على البيوكيميائية المناعية (iFOBT). في الواقع ، يمكن إجراء كلا الاختبارين على نفس العينة ، مما يقلل من التكاليف ويحقق تنبؤًا أفضل بوجود آفات القولون والمستقيم في نهاية المطاف.
المقدمة
سرطان القولون والمستقيم (لجنة حقوق الطفل) مستمد من عملية متعددة الخطوات التي يتطور الظهارة الصحية ببطء إلى أورام غدية أو الاورام الحميدة ، والتي تتطور إلى الأورام السرطانية الخبيثة مع مرور الوقت1،2. وعلى الرغم من ارتفاع معدل الإصابة في اتفاقية حقوق الطفل، لوحظ اتجاه تنازلي في النسبة المئوية للوفيات على مدى العقد الماضي3. في الواقع، أدت أدوات التشخيص المبكر المعتمدة في برامج الفحص إلى الكشف المبكر وإزالة الأورام الحميدة قبل النيوبلاستيك أو الاورام الحميدة4. ومع ذلك ، نظرا لاختلاف الحدود التقنية ، لا شيء من هذه الأساليب هو الأمثل. في الواقع، من أجل تحسين الحساسية و....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تعيين المرضى في Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) من Meldola (FC, Italy) بين عامي 2013 و 2015. وكان المرضى المسجلون في البروتوكول IRSTB002، الذي وافقت عليه لجنة الأخلاقيات في IRST - IRCCS AVR (25/10/2012، في ر. 1). وقد تم تنفيذ جميع الأساليب وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح ذات الصلة. وتم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من جميع المرضى.
1. استخراج الحمض النووي من البراز
- استخدام عدة لإعداد عينات البراز (انظر جدول المواد).) حدد وعالج مواد البراز عن طريق إجراء عملية الاستخراج وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تضخيم الحمض النووي النقي مباشرة أو تخزينها في -20 درجة م....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يظهر سير عمل هذا البروتوكول في الشكل 1. يوفر سير العمل خطوتي تحكم وإجراءات مختلفة وفقًا لنتائج الخطوة هذه. أولاً، إذا كانت العينة تقدم عناصر تحكم غير مناسبة، يجب تكرار التضخيم. ثانياً، إذا تم تثبيط التضخيم، يجب إعادة معالجة العينة من البداية أو تصنيفها على أنها غير قيّمة.
ويبين الشكل 2 منحنيات الفلورسينس التي تنتجها عينات إيجابية وسلبية. (أ)هو مبين مثال على عينة إيجابية مناسبة. إشارة العينة على قناة HEX ضمن النطاق المقبول. الإشارة الإيجابية فو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد أظهرت الدراسات السابقة أن تحليل سلامة الحمض النووي من البراز المستخرجة من النهج اليدوية وشبه التلقائية يمكن أن تمثل أداة بديلة للكشف المبكر عن آفات القولون والمستقيم7،8،9,،10،11،12. وقد وضعت اختبارات الفحص الجزيئية غير الباضعة على مر السنين للكشف عن سرطان القولون والمستقيم، ولكن الانتشار الواسع النطاق لهذه الأساليب محدود .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
مورا منغي هي موظفة بدوام كامل في شركة Diatech Pharmacogenetics srl.
شكر وتقدير
وليس لدى أصحاب البلاغ أي إقرارات.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1.5 مل و 2 مل من البولي بروبيلين تويست لوك أنابيب (DNase ، RNase ، DNA- ، PCR خالية من مثبطات) المواد | الاستهلاكية المطلوبة لاستخراج الحمض النووي والإيثانول المطلق في الوقت الحقيقي PCR | ||
| (جودة الدرجة التحليلية) الكاشف | المطلوب لاستخراج الحمض النووي | ||
| جهاز الطرد المركزي Benchtop ؛ | السرعة القصوى 20000 × ز. الأداة المطلوبة لاستخراج الحمض | ||
| النووي برنامج تحليل EasyPGX الإصدار 2.0.0 | برنامج تحليل Diatech Pharmacogenetics | RT800-SW | |
| أجهزة الطرد المركزي EasyPGX / دوامة شرائط 8 آبار | Diatech Pharmacogenetics | RT803 | أداة موصى بها لاختبار PCR في الوقت الحقيقي |
| أداة EasyPGX qPCR 96 ؛ | Diatech Pharmacogenetics | RT800-96 | الموصى بها لاختبار PCR في الوقت الحقيقي |
| EasyPGX جاهز FL-DNA | Diatech Pharmacogenetics | Kit RT029 | المطلوب لمقايسة PCR في الوقت الحقيقي |
| Micropipettes (أحجام من 1 إلى 1.000 & micro; L) | المواد الاستهلاكية المطلوبة لاستخراج الحمض النووي والقفازات | ||
| الحقيقي المواد الاستهلاكية | المطلوبة لاستخراج الحمض النووي و Real Time PCR | ||
| QIAamp Fast DNA Stool | Kit Qiagen | 51604 | موصى بها لاستخراج الحمض النووي وتنقيتها من البراز |
| نصائح مرشح معقمة DNase ، خالية من RNase (أحجام من 1 إلى 1.000 & micro ؛ ل) | المواد الاستهلاكية المطلوبة لاستخراج الحمض النووي والكتلة الحرارية في الوقت الفعلي PCR | ||
| ، على سبيل المثال الكتلة الجافة EasyPGX | Diatech Pharmacogenetics | RT801 | الأداة المطلوبة لاستخراج الحمض النووي |
| دوامة ، على سبيل المثال جهاز الطرد المركزي / الدوامة EasyPGX 1.5 مل & nbsp ؛ | Diatech Pharmacogenetics | RT802 | مطلوبة لاستخراج الحمض النووي |
المراجع
- Fearon, E. R. Molecular Genetics of Colorectal Cancer. Annual Review of Pathology. 6, 479-507 (2011).
- Sears, C. L., Garrett, W. S. Microbes, Microbiota, and Colon Cancer. Cell Host and Microbe. 15, 317-328 (2014).
- SEER Stat Fact Sheets: Colon and Rectum Cancer. National....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
تصحيح
Formal Correction: Erratum: Evaluation of Colorectal Cancer Risk and Prevalence by Stool DNA Integrity Detection
Posted by JoVE Editors on 9/28/2020. Citeable Link.
An erratum was issued for: Evaluation of Colorectal Cancer Risk and Prevalence by Stool DNA Integrity Detection. An affiliation was updated.
The first affiliation was updated from:
Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST)
to:
Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) IRCCS, Meldola, Italy
