Крыса грудной позвоночных гемисекции позвоночника является ценным и воспроизводимой моделью одностороннего повреждения спинного мозга для изучения нервных механизмов локомоторного восстановления и эффективности лечения. Эта статья включает в себя подробное пошаговое руководство для выполнения процедуры гемисекции и оценки работы локомотивов на арене открытого поля.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Торакальный спинной мозг гемисекции хирургии и открытого поля локомоторной оценки в Крыса
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Повреждение спинного мозга (SCI) вызывает нарушения в двигательной, сенсорной и вегетативной функции ниже уровня поражения. Экспериментальные модели животных являются ценными инструментами для понимания нервных механизмов, участвующих в восстановлении локомотивов после SCI и для разработки методов лечения для клинических популяций. Есть несколько экспериментальных моделей SCI, включая ушиб, сжатие и транссекционные травмы, которые используются в самых различных видов. Гемисекция включает в себя односторонний перерезка спинного мозга и нарушает все восходящие и нисходящие участки только на одной стороне. Спинной гемисекции производит очень селективной и воспроизводимой травмы по сравнению с ушибом или сжатия методы, которые полезны для исследования нервной пластичности в избавленных и поврежденных путей, связанных с функциональным восстановлением. Мы представляем подробный пошаговой протокол для выполнения грудной гемисекции на уровне T8 позвонков у крысы, что приводит к первоначальному параличу задней конечности на стороне поражения с градуированным спонтанное восстановление функции локомотива в течение нескольких Недель. Мы также предоставляем протокол оценки функционального восстановления в открытом поле. Локомоторная оценка обеспечивает линейный профиль восстановления и может быть выполнена как рано, так и неоднократно после травмы, с тем чтобы точно проверить животных на соответствующие временные точки, в которых для проведения более специализированного поведенческого тестирования. Представленный метод гемисекции может быть легко адаптирован к другим моделям и видам транссекции, а оценка локомотива может быть использована в различных МОЦ и других моделях травм для оценки функции локомотива.
Введение
Повреждение спинного мозга (SCI) связано с серьезными нарушениями в двигательной, сенсорной и вегетативной функции. Экспериментальные животные модели SCI являются ценными инструментами для понимания анатомических и физиологических событий, связанных с патологией SCI, для исследования нервных механизмов в ремонте и восстановлении, а также для проверки эффективности и безопасности потенциальных терапевтических Мероприятий. Крыса является наиболее часто используемых видов в исследовании SCI1. Крысиные модели являются низкими затратами, легко размножаются, и большая батарея поведенческих тестов доступны для оценки функциональных результатов
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Эксперименты, описанные в этой статье, были проведены в соответствии с руководящими принципами Канадского совета по уходу за животными и были одобрены комитетом по этике Монреальского университета.
1. Торакальная гемисекционная хирургия
- Носите соответствующее защитное оборудование (перчатки, маска и платье) для поддержания асептической среды для операции. Очистите хирургическую область с помощью спиртовых салфеток и поместите стерильные хирургические шторы над хирургическим полем. Стерилизовать хирургические инструменты и поместить на хирургическое поле.
- Анестезируйка крысы под смесью изофлуранского газа (3% индукции, 0,....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Воспроизводимые поражения с высокой степенью консистенции могут быть сгенерированы с помощью метода гемисекции. Для оценки и сравнения размеров поражений между экспериментальными группами, максимальная площадь поражения в процентах от общего поперечного сечения спинного мозга может быть легко рассчитана с гистологическим окрашиванием секций спинного мозга. На рисунке 1 показано репрезентативное поражения левого гемикорда и наложение доли максимальной площади поражения, разделяемых между крыс.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Основной силой метода гемисекции является избирательность и воспроизводимость поражения, что приводит к снижению изменчивости гистологических и поведенческих фенотипов между животными25. Для того, чтобы обеспечить одностороннее повреждение на соответствующем уровне позвоночника, точная идентификация как надлежащего сегмента позвоночника и спинного мозга средней линии имеет решающее значение. Как может быть тенденция для спинного мозга, чтобы вращаться в направлении разреза во время процедуры гемис.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана Канадскими институтами исследований в области здравоохранения (CIHR; MOP-142288) м.м.м. была поддержана наградой по заработной плате от Fonds de Recherche Квебек Аканте (ФРЗС), а A.R.B была поддержана стипендией от ФРЗС.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Baytril | CDMV | 11242 | |
| Тупые ножницы | препарирования World Precision Instruments | 503669 | |
| Бупренорфина гидрохорид CDMV | |||
| Объектив камеры | Pentax | C31204TH | 12,5-75 мм, f1.8, формат 2/3", |
| CMOS видеокамера | Basler | acA2000-165uc | Формат 2/3 дюйма, 2048 x 1088 пикселей, до 165 кадров в секунду, C-mount, USB3 |
| Сжатый кислород Газообразный | Praxair | ||
| Аппликаторы с хлопковыми наконечниками | CDMV | 108703 | |
| Тонкие триммеры для костей | Fine Science Tools | 16109-14 | |
| Препарирующий нож | Fine Science Tools | 10055-12 | |
| Тонкие щипцы Dumont | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Ethicon Vicryl 4/0 Violet Braided FS-2 шовный материал (J392H) | CDMV | 111689 | |
| Грелка с обратной связью | Harvard Apparatus | 55-7020 | |
| Самки крыс Long-Evans Charles | River Laboratories | Код штамма: 006 | 225-250g |
| Gelfoam | CDMV | 102348 | |
| Изогнутые щипцы для гемостата | Fine Science Tools | 13003-10 | |
| Стерилизатор горячих шариков | Fine Science Tools | 18000-45 | |
| Гидрогель | 70-01-5022 | Прозрачный H20 | |
| Изофторан | CDMV | 118740 | |
| Раствор лактата Рингера | CDMV | 116373 | |
| Лидокаин (2%) | CDMV | 123684 | |
| Игла 30 г | CDMV | 4799 | |
| Открытое поле | Нестандартная | круглая арена из оргстекла 96 см диаметр, высота стены 40 см | |
| Офтальмологическая мазь | CDMV | 110704 | |
| Персональный компьютер | С возможностью подключения USB3 для записи видео с указанной камерой | ||
| Физиологический раствор | CDMV | 1399 | |
| Провьед | CDMV | 4568 | |
| Жидкая диета для грызунов | Bioserv | F1268 | |
| Скальпальное лезвие #11 | CDMV | 6671 | |
| Самоудерживающееся втягивающее устройство | World Precision Instruments | 14240 | |
| Весенние ножницы для иридэктомии Vannas | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Ветеринарный наркозный аппарат и испаритель изофлурана | Dispomed | 975-0510-000 | |
| VLC медиаплеер | VideoLAN | videolan.org/vlc |
Ссылки
- Sharif-Alhoseini, M., et al. Animal models of spinal cord injury: a systematic review. Spinal Cord. 55 (8), 714-721 (2017).
- Sedy, J., Urdzikova, L., Jendelova, P., Sykova, E. Methods for behavioral testing of spinal cord injured rats. Neuroscience and Biobeha....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
