Ce protocole décrit l'établissement d'un modèle de souris tumeur-portant pour surveiller la progression de tumeur et l'angiogenèse en temps réel par la formation image double de bioluminescence.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Double imagerie de bioluminescence de la progression tumorale et de l'angiogenèse
Dans cet article
Résumé
Résumé
L'angiogenèse, comme un processus crucial de progression tumorale, est devenue un point chaud de recherche et la cible de la thérapie anti-tumorale. Cependant, il n'y a aucun modèle fiable pour tracer la progression et l'angiogenèse de tumeur simultanément d'une manière visuelle et sensible. L'imagerie par bioluminescence montre sa supériorité unique dans l'imagerie vivante en raison de ses avantages de sensibilité élevée, de forte spécificité et de mesure précise. Présenté ici est un protocole pour établir un modèle de souris tumeur-portant en injectant une renilla luciferase-étiquetée ligne de cellules de cancer du sein de monourine 4T1 dans la souris transgénique avec l'expression de luciferase de Firefly angiogenèse-induite. Ce modèle de souris fournit un outil valable pour surveiller simultanément la progression de tumeur et l'angiogenèse en temps réel par la double imagerie de bioluminescence dans une souris simple. Ce modèle peut être largement appliqué dans le criblage de drogue antitumoral et la recherche d'oncologie.
Introduction
L'angiogenèse est un processus essentiel dans la progression du cancer de petits néoplasmes localisés à de plus grandes tumeurs potentiellement métastatiques1,2. La corrélation entre la croissance tumorale et l'angiogenèse devient l'un des points d'emphase dans le domaine de la recherche en oncologie. Cependant, les méthodes traditionnelles de mesure des changements morphologiques ne parviennent pas à surveiller la progression de tumeur et l'angiogenèse simultanément chez les animaux vivants en utilisant une approche visualisée.
L'imagerie de bioluminescence (BLI) des cellules de tu....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
Les expériences doivent être conformes aux réglementations nationales et institutionnelles concernant l'utilisation des animaux à des fins de recherche. Les autorisations pour réaliser des expériences doivent être obtenues. Le traitement des animaux et les procédures expérimentales de l'étude adhèrent aux lignes directrices du Comité des soins et de l'utilisation des animaux de l'Université de Nankai qui sont conformes aux Lignes directrices pour les soins aux animaux approuvées par les National Institutes of Health (NIH).
1. LV-Rluc-RFP (RR) et LV-Rluc-RFP-HSV-ttk (RRT) emballage et production lentivirale
REMARQUE....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
Dans cette expérience, un modèle de souris de cancer du sein a été établi utilisant des cellules 4T1 pour étudier la relation entre la croissance de tumeur et l'angiogenèse de tumeur (figure 1). Tout d'abord, deux lentivirus ont été emballés, qui portaient des séquences génétiques exprimant Rluc/RFP (LV-RR) et Rluc/RFP/HSV-ttk (LV-RRT), respectivement, comme indiqué précédemment7. Ensuite, deux lignées cellulaires 4T1 différentes, nomm.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
Dans ce protocole, une approche double BLI non-invasive est décrite pour surveiller le développement de tumeur et l'angiogenèse. Le système de journaliste BLI est d'abord développé, contenant le gène de suicide DeSV-ttk/GCV pour suivre la progression et la régression de tumeur in vivo par l'imagerie de Rluc. Pendant ce temps, l'angiogenèse tumorale est évaluée à l'aide de souris Vegfr2-Fluc-KI via l'imagerie Fluc. Ce modèle de souris tumeur-portant est capable de fournir une plate-forme pratique pour le développement con.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à révéler.
Remerciements
Cette recherche a été appuyée par le National Key R-D Program of China (2017YFA0103200), la National Natural Science Foundation of China (81671734) et les principaux projets du Programme de soutien scientifique et technologique de Tianjin (18YFZCSY00010), les fonds de recherche fondamentale pour les Universités centrales (63191155). Nous reconnaissons les révisions de Gloria Nance, qui ont été utiles pour améliorer la qualité de notre manuscrit.
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 0,25 % Trypsine-0,53 mM EDTA | Gibco 25200072 | ||
| Tubes de 1,5 mL | Axygen Scientific | MCT-105-C-S | |
| Tubes de 15 mL | Corning Glass Works | 601052-50 | |
| 293T | ATCC | CRL-3216 | |
| 4T1 | ATCC | CRL-2539 | |
| Plat de 60 mm | Corning Glass Works | 430166 | |
| Plaque à 6 puits | Corning Glass Works | 3516 | |
| Enceinte de biosécurité | Shanghai Lishen Scientific | Hfsafe-900LC | |
| Chlorhydrate de blasticidine S (BSD) | Sigma-Aldrich | 15205 | |
| Kit de comptage de cellules-8 | MedChem Express | HY-K0301 | |
| CO2 Incubateur tégulé | Thermo Fisher Scientific | 4111 | |
| Coelenterazine (CTZ) | Technologie NanoLight | 479474 | |
| D-luciférine Sel de potassium | Pied à coulisse Sciences de la vie | 119222 | |
| DMEM Medium | Gibco | C11995500BT | |
| Sérum fœtal bovin (FBS) | BIOIND | 04-001-1A | |
| Microscope à fluorescence | Nikon | Ti-E/U/S | |
| Ganciclovir (GCV) | Logiciel graphique Sigma-Aldrich | Y0001129 | |
| Logiciel | GraphPad | Graphpad Graphpad Prism 6 | |
| Aiguilles pour seringue à insuline | Becton Dickinson | 328421 | |
| Isoflurane | Baxter | 691477H | |
| Système d’emballage lentiviral | Biosettia | cDNA-pLV03 | |
| Liposome | Invitrogen | ||
| Logiciel d’imagerie vivante | Pied à coulisse Sciences de la vie | Logiciel d’imagerie vivante 4.2 | |
| Système d’imagerie vivante | Pied à coulisse Sciences de la vie | IVIS Lumina II | |
| MEM Medium | Invitrogen | 31985-070 | |
| Pénicilline-streptomycine | Invitrogen | 15140122 | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Corning Verrerie | R21031399 | |
| Polybrène | Sigma-Aldrich | H9268-1G | |
| RPMI1640 Medium | Gibco | C11875500BT | |
| SORVALL ST 16R Centrifugeuse | Thermo Fisher Scientific | Thermo Sorvall ST 16 ST16R | |
| Réfrigérateur ultra-basse température | Haier | DW-86L338 | |
| XGI-8 Système d’anesthésie gazeuse | XENOGEN Société | 7293 |
Références
- Folkman, J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. The New England Journal of Medicine. 285, 1182-1186 (1971).
- Kerbel, R. S. Tumor angiogenesis. The New England Journal of Medicine. 358, 2039-2049 (2008).
- Hosseinkhani, S.
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
