הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הדמיה ביולומינסנציה כפולה של התקדמות הגידול ואנגיוגנזה

8.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/59763

⸱

1 באוגוסט 2019

 ,  ,  ,  , 
1Nankai University School of Medicine, 2State Key Laboratory of Medicinal Chemical Biology and College of Pharmacy, Nankai University

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר את הקמתה של המודל הנושא הגידול העכבר כדי לפקח על התקדמות הגידול ואנגיוגנזה בזמן אמת על ידי הדמיה ביולומינציה כפול.

תקציר

אנגיוגנזה, כתהליך מכריע של התקדמות הגידול, הפך נקודה חמה מחקר היעד של טיפול נגד הגידול. עם זאת, אין מודל אמין לעקיבה אחר התקדמות הגידול ואנגיוגנזה בו באופן חזותי ורגיש. הדמיה ביולומינסנציה מציגה את עליונותה הייחודית בהדמיית חיים בשל יתרונותיה של רגישות גבוהה, ספציפיות ומדידה מדויקת. הציג כאן הוא פרוטוקול כדי להקים מודל הנושא הגידול העכבר על ידי הזרקת Renilla לוציפראז התווית מורטין סרטן השד קו 4T1 לתוך העכבר טרנסגניים עם המושרה אנגיוגנזה הבעה לוציפראז. מודל זה של העכבר מספק כלי יקר ערך בו לפקח על התקדמות הגידול ואנגיוגנזה בזמן אמת על ידי הדמיה ביולומינציה כפול בעכבר בודד. מודל זה עשוי להיות נרחב להחיל הקרנת תרופות נגד הגידול ואונקולוגיה מחקר.

מבוא

אנגיוגנזה הוא תהליך חיוני בהתקדמות של סרטן מ קטן, ניפלאמים מקומיים לגדול, פוטנציאל גידולים גרורות1,2. הקורלציה בין צמיחת הגידול והאנגיוגנזה הופכת לאחת מנקודות ההדגשה בתחום המחקר האונקולוגי. עם זאת, שיטות מסורתיות של מדידת שינויים מורפולוגיים לא לפקח על התקדמות הגידול ואנגיוגנזה בו זמנית בחיות חיים באמצעות גישה דמיינו.

ביולומינסנציה הדמיה (בלי) של תאים סרטניים היא שיטה ניסויית המתאימה במיוחד כדי לפקח על צמיחת הגידול בגלל החלטיות שלה לא פולשני, רגישות, וספציפיות3,4,5,6 . טכנולוגיית בלי מבוססת על העיקרון כי לוציפראז יכול לזרז חמצון של מצע ספציפי תוך פליטת ביולומינציה. ללוציפראז הביע בתאי הגידול מושתל מגיב עם המצע מוזרק, אשר ניתן לזהות על ידי מערכת הדמיה חיה, אותות בעקיפין לשקף את השינויים מספר התא או לוקליזציה תא ב vivo6,7.

למעט צמיחת הגידול, הגידול אנגיוגנזה (הצעד הקריטי בהתקדמות הסרטן) יכול גם להיות מדמיין דרך הטכנולוגיה בלי להשתמש בעכבר Vegfr2-fluc-KI הטרנסגניים8,9,10. מקדם הצמיחה של כלי הדם (הקולטן) 2 (Vegfr2), סוג אחד של קולטן, מתבטא בעיקר בתאי כלי הדם של עכברים למבוגרים11. ב-Vegfr2-Fluc-KI העכברים, רצף ה-DNA של גחלילית לוציפראז (Fluc) הוא דפק לתוך האקסון הראשון של הרצף האנדודוגני Vegfr2. כתוצאה מכך, ה-Fluc מתבטא (המופיעה כאותות בלי מלים) באופן זהה לרמת האנגיוגנזה בעכברים. כדי לצמוח מעבר כמה מילימטרים בגודל, הגידול מגייס ואסיקולטרים חדשים מכלי הדם הקיימים, אשר מאוד לבטא את Vegfr2 המופעל על ידי גורמי גדילה מתאי הגידול1. זה פותח את האפשרות של שימוש Vegfr2-Fluc-KI העכברים הטרנסגניים כדי שאינו פולשני לפקח על אנגיוגנזה הגידול על ידי בלי.

בפרוטוקול זה, מודל העכבר נושאת הגידול הוא הוקם כדי לפקח על התקדמות הגידול ואנגיוגנזה בעכבר אחד באמצעות לוציו גחלילית (fluc) ו renilla ללוציפראז (rluc) הדמיה, בהתאמה (איור 1). קו תא 4T1 (4T1-RR) נוצר באופן מאוד מבטא Rluc וחלבון פלורסנט אדום (RLUC) כדי לעקוב אחר צמיחת תאים על ידי הדמיה Rluc. כדי לחקור עוד יותר את השינויים הדינמיים של אנגיוגנזה בהתקדמות ורגרסיה של הגידול, קו תא 4t1 נוסף (4t1-rrt) נוצר כי המבטא התאבדות גן הרפס וירוס מעוגל תימידין קינאז (HSV-ttk), rrt, ו-rrt. על-ידי המינהל של ganciclovir (GCV), את HSV-ttk המבטא תאים הם באופן סלקטיבי הקשורים. בהתבסס על קווי תאים אלה, מודל הנושאת גידול בעכברים Vegfr2-Fluc-KI בנוי המשמש כמודל ניסיוני גישור התקדמות הגידול והגידול אנגיוגנזה בvivo.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

ניסויים חייבים לעמוד בתקנות לאומיות ומוסדיים הנוגעות לשימוש בבעלי חיים לצורכי מחקר. יש להשיג הרשאות לביצוע ניסויים. הטיפול בבעלי חיים והליכים ניסיוניים של המחקר לדבוק באוניברסיטאות Nankai טיפול בעלי חיים והנחיות הוועדה להשתמש הנחיות ההנחיות לטיפול בבעלי חיים אושרה על ידי המכון הלאומי לבריאות (NIH).

1. LV-Rluc-RLUC (RR) ו-LV-Rluc-RLUC-HSV-ttk (RLUC) האריזה והפקה של ויראלי

הערה: plv-RR נושאת את רצפי הגנים של renilla ללוציפראז (rluc) וחלבון פלורסנט אדום (rluc) תחת EF1α היזם, ואילו plv-rluc נושאת את רצפי הגנים קידוד rluc, rluc, וירוס הרפס מעוגל תימידין קינאז (HSV-ttk) ( איור 2).

  1. זרע 1 x 106 של תאים 293t לתוך הצלחת 6 היטב ותרבות לילה בחממה מחולל לחות עם 5% CO2 ב 37 ° c עם מדיום הנשר שונה של DULBECCO (dmem) המכיל 10% סרום העוברי (fbs).
  2. להכין את ליפוכמה ההשעיה: לערבב 7.5 μL של ליפוכמה ו 0.25 mL של בינוני חיוני מינימלי (לזכור) לתוך שפופרת של 1.5 mL בעקבות דגירה עבור 5 דקות בטמפרטורת החדר (RT) כדי לפזר ליפוזומים באופן שווה.
  3. הכן את הפתרון DNAs (DNAs-RR): בנפרד, הוסף את ה-pLV-RR וקטור מסייע ל-0.25 mL של מחבר הרכבת בצינור 1.5 mL כמתואר בטבלה 1.
  4. השג את מתחם ליפוחלק/DNAs-RR: בעדינות להוסיף את הפתרון DNAs-RR לתוך ליפוף מוכן ירידה ההשעיה על ידי ירידה ו דגירה עבור 20 דקות ב RT כך את קשרי ה-DNA לקרום השומנים.
  5. החלף את המדיום של התאים 293T עם 1 mL של DMEM המכיל 10% FBS ולהוסיף את התרכובת ליפוחלק/Dmem-RR למדיום של התאים 293T בעדינות.
  6. לאחר הדגירה של החממה מחולל לחות עם 5% CO2 ב 37 ° צ' עבור 12-16 h, להחליף את המתחם ליפוחלק/DNAS-RR המכיל בינוני של התאים 293t עם 1 מ ל של dnas המכיל 10% fbs ו 100 U/mL פניצילין-סטרפטומיצין.
  7. המשך לשאת את התאים 293T בחממה לחות 48 h לאחר הזיהום. לאחר מכן, לאסוף את supernatant של תאים 293T ו צנטריפוגה את המדיום ב 300 x g עבור 5 דקות כדי הגלולה 293t תאים. העבר את ה-וירוס-RR (LV-RR)-המכיל supernatant לתוך 1.5 mL סטרילי צינורות אחסון פוליפרופילן וחנות ב-80 ° c.
    הערה: מתקן Biosafety טיחות ברמה 2 (BSL-2) נדרש על מנת לעבוד עם רקומביננטי, וירוס.
  8. חזור על שלבים 1.1 – 1.7 ולהשתמש pLV-RRT וקטור במקום pLV-RR וקטור בשלב 1.3 כדי לקבל את הנגיף-RRT (LV-RRT). אחסן את ה-LV-RRT ב-80 ° c.
    הערה: במקרים מסוימים, המניה האנטי-ויראלית שאינה מטוהרים עלולה לעכב את צמיחת התאים. ייתכן שיהיה צורך לטהר את המניה הננגיפית. את המניות מכיל LV-RR או LV-RRT חלקיקים צריך להיות מחולק לצינורות 1.5 mL (1 mL לכל צינור) עבור אחסון כדי למנוע מחזורי הפשרה מרובים ללא תשלום.

2. LV-RR ו-LV-RRT התמרה ויראלית לביטוי גנים ב 4T1 תאים

  1. זרעי הזרע 4T1 לתוך צלחת 6-הבאר (5 x 105 תאים/טוב) ותרבות עם מכון הזיכרון ברוזוול פארק (RPMI) 1640 בינוני המכיל 10% fbs לילה בחממה לחות עם 5% CO2 ב 37 ° c.
  2. הסר את המדיום מלוח התרבות ולהחליף אותו עם 1 mL טריים RPMI 1640 בינוני, כמו גם 1 mL של מניות העדשה (LV-RR או LV-RRT) לכל טוב. הוסף 8 μg/mL polybrene ולמזג בעדינות את המדיום המכיל חלקיקים לנטינגיי על ידי ליטוף למעלה ולמטה.
    הערה: שימו לב כי המדיום מכיל חלקיקים מיונגיליים, שיכולים להתאים את התאים האנושיים.
  3. התמרה פתרון ספין בצנטריפוגה ב 1,000 × g עבור 60 דקות ב-RT כדי לסייע להגדיל את היעילות התמרה. לאחר צנטריפוגה, התרבות 4T1 תאים עבור 4-12 h ולשמור על החממה לחות עם 5% CO2 ב 37 ° c.
    הערה: עבור קווי תאים מסוימים, polybrene עשוי להיות רעיל לתרבות ארוכת טווח. לכן, זמן הדגירה לצורך העברת התמרה של תאים שונים עשוי להיות הפכפך. בדוק את מצב התא פעמים מרובות כדי למצוא זמן הדגירה המתאים.
  4. לרענן את המדיום של תאים 4T1 התמרה עם 2 מ ל של RPMI 1640 בינונית המכילה 10% FBS ו 100 U/mL פניצילין-סטרפטומיצין כדי להסיר את החלקיקים להסרת העור polybrene.

3. הקרנת סמים וזיהוי של LV-RR ו-LV-RRT התמרה תאים 4T1

  1. בחרו בתאים שעברו התמרה (BSD) על פי גן ההתנגדות של BSD שנישא על ידי LV-RR או LV-RRT כמתואר בצעדים הבאים.
    הערה: לחילופין, התאים המתמרים אשר RFP-חיוביים ניתן לבחור על ידי הcy, לנסות על פי הגן RFP שנישא על ידי LV-RR או LV-RFP.
  2. 48 h לאחר התמרה, מעבר תאים 4T1 ביחס של 1:3 אל 1:4 עם בינוני בחירה (RPMI 1640 בינוני המכיל 10% FBS, 100 U/mL פניצילין לסטרפטומיצין, ו-5 μg/mL BSD). . שינוי בינוני כל יומיים או שלושה
    הערה: הריכוז האופטימלי של BSD עשוי להשתנות מקו התאים לקו התאים. לכן, ניסוי פיילוט של עקומת להרוג צריך להתבצע כדי לקבוע את הריכוז האופטימלי של BSD לפני הניסוי הראשוני.
  3. 7 ימים לאחר ההקרנה התרופה, לבחון את LV-RR 4T1 תאים (4T1-RR) ו-LV-RRT התמרה תאים 4T1 (4T1-RRT) תחת מיקרוסקופ שלב הפוך פלואורסצנטית. לספור את מספר התאים RFP+ 4t1 ואת כל 4t1 תאים בשלושה שדות של חזון להעריך את היחס rfp-חיוביים, בהתאמה (איור 2).
    הערה: לחלופין, היחס RFP-חיוביים של תאים 4T1 התמרה הדרגתית ניתן לזהות על ידי הזרמת cy, try.
  4. למדוד את האותות renilla של 4T1-RR ו 4T1-RRT תאים באמצעות מערכת הדמיה חיה כדי לזהות את הקשר הליניארי בין מספרי התאים ואותות renilla (איור 3).
  5. הרחב הוקרן BSD 4T1-RR ו 4T1-RRT תאים עם בינונית בחירה ביחס מפוצל בין 1:3 ו 1:4 ולאחסן את המניות קו התא בחנקן נוזלי.

4. Vegfr2-Fluc-KI עכברים הנושאת גידול מודל העכבר

הערה: עכברים Vegfr2-Fluc-KI הטרנסגניים, בני 6-8 שבועות ונקביים, משמשים בניסוי זה כדי לנטר באופן בלתי פולשני את האנגיוגנזה בvivo על ידי בלי.

  1. תרבות 4T1-RR ו-4T1-RRT תאים ב 60 מ"מ מנות פטרי בתוך החממה מחולל לחות עם 5% CO2 ב 37 ° c, בהתאמה. כאשר התאים הם ב 80% המפגש, להסיר את המדיום ולשטוף עם מלח מאגור פוספט (PBS).
  2. הסר את ה-PBS והוסף 2 מ"ל נוספים של 0.25% טריפסין-0.53 מ"מ פתרון EDTA בהתאמה. שמור את המנה ב-RT (או בשעה 37 ° c) עד שהתאים מתנתק.
  3. הוסף 5 – 10 מ ל של בינוני טרי המכיל 10% FBS, ולאחר מכן לחלק את התאים לוותר על השעיית מחדש 4T1-RR ו 4T1-RRT תאים לתוך 15 מ"ל צינורות צנטריפוגה, בהתאמה. ספירה שני סוגים של תאים 4T1 באמצעות תא ספירה ולהכין את השעיות התא בריכוז של 1 x 106 לכל 100 ΜL ב RPMI 1640 בינונית.
  4. מורדם בVegfr2-Fluc-KI עכברים עם 1% – 3% isof, ב 100% חמצן בחדר אינדוקציה הרדמה עם קצב הזרימה של 1 L/min. לפקח על התגובה צביטה הבוהן של העכבר כדי לאשר את מצבה של הרדמה. ואז, להחיל משחה אופטלמולוגית על העיניים של העכבר כדי למנוע התייבשות.
  5. להסיר את העכבר מתא ומיקום nosecone. לחלוטין להסיר את השיער של הכתף של העכבר באמצעות מכונת גילוח חשמלי וקרם הסרת שיער, אשר יכול לספק תצוגה טובה של שדה כירורגי ולהימנע חסימת אותות בלי לעשות ניסויים בעקבות.
  6. תת-עורי להזריק 4T1-RR (1 x 106 תאים בנפח μl הכולל 100) ו 4T1-rrt תאים (1 x 106 תאים בנפח 100 μl כולל) בכתפיים שמאל וימין של כל עכבר, בהתאמה (רשומה כיום 0). המקום עכברים באזור ההתאוששות עם תמיכה תרמית עד התאושש באופן מלא.
  7. לאחר השרשה של 4T1-RR ו 4T1-RRT תאים, לגעת מיסות הגידול כדי לבדוק את העכברים הם הנושאת גידול כל יום (איור S1). ביום 7 לאחר ההשתלה, intraperitoneally להזריק 50 mg/kg ganciclovir (GCV) לעכברים נושאת הגידול פעמיים ביום עד סוף הניסוי.
    הערה: לפני ניסוי זה, ציטוטוקסיי של GCV בתאים 4T1-RRT צריך להיות מזוהה. יעילות ההריגה של GCV יכול להיות מוערך על ידי שיטת ספירת התאים עם ריכוז שונה של GCV (איור S2).
  8. ביום 0, 3, 7, 14, ו 21 לאחר השרשה 4T1, לפקח על צמיחת הגידול ואנגיוגנזה של עכברים נושאת הגידול ולהעריך על ידי שניהם Rluc ו Fluc הדמיה (איור 4).

5. הדמיה ביולומינציה כפולה של גידול (Rluc) ואנגיוגנזה (Fluc)

  1. פתח את מערכת ההדמיה החי, אתחל את תוכנת הדימות החי ולאחר מכן אתחל את המערכת.
    הערה: אתחול המערכת ייקח כמה דקות כדי לצנן את המכשיר מצמידים מטען (CCD) מצלמה ל-90 ° צ' לפני היכולת להתחיל הדמיה. הטמפרטורה תהפוך ירוק כאשר מצלמת CCD מקורר.
  2. השתמש בהגדרות הבאות של המצלמה:
    . תבדקו את הלומינסנציה והצילומים
    בדוק שכבת-על.
    הגדרות לומינסנציה:
    זמן חשיפה מגדיר אוטומטית בתנאים נורמליים.
    . באנינג מגדיר ל -8
    מערכות F/Stop מסדרות ל-1.
    מסנן הפליטה מגדיר את הפתיחה.
    הגדרות צילום:
    ביננינג מגדיר למדיום.
    F/Stop מגדיר ל-8.
    הגדרות מערכת IVIS:
    שדה תצוגה: C = 1 להציג עכבר, D = 5 להציג עכברים.
    גובה הנושא קובע 1.5 ס מ.
  3. לשקול ולהקליט את העכברים ולחשב את עוצמת הקול של קומרכאזין (CTZ; 2.5 מ"ג/ק"ג) ו D-לluciferin (150 מ"ג/ק"ג) הדרושים.
  4. באמצעות הגידול בעכבר על ידי 1% – 3% isof, ב 100% חמצן בחדר אינדוקציה הרדמה עם קצב זרימה של 1 L/min. הצג את התגובה צביטה הבוהן של העכבר כדי לאשר את מצבה של הרדמה. אז, לחלק טיפה של משחה עין סיכה על שתי העיניים כדי למנוע נזק הקרנית.
  5. הכנס 2.5 mg CTZ (3.33 mg/mL) לכל קילוגרם משקל הגוף לתוך retrobulbar של העכבר (למשל, עבור 20 g העכבר, להזריק 15 μL כדי לספק 50 μg של CTZ) באמצעות מחט מזרק אינסולין.
  6. הזז את העכבר הנושאת הגידול לתוך חדר המצלמה עם אפו בקונוס ההרדמה בעדינות לרכוש מספר תמונות של העכבר מייד כדי לקבל את האותות Rluc מתאי 4T1 עד האותות בלי לדעוך.
    הערה: מחצית החיים של CTZ קצר מאוד והאותות של Rluc ירידה באופן מקוצר ~ 30 s. כדי להבטיח כל אות Rluc השאריות התפוגג ואת המרווח בין Rluc ו Fluc הדמיה צריך להיות יותר מ 10 דקות.
  7. Intraperitoneally להזריק 150 מ"ג/ק"ג D-לluciferin (30 מ"ג/mL) באמצעות מחט מזרק אינסולין (למשל, עבור 20 g עכבר, להזריק 100 μL כדי לספק 3 מ ג של D-לluciferin). לשמור את העכבר על RT עבור 10 דקות לפני הדמיה Fluc.
  8. להזיז את העכבר לתוך חדר המצלמה עם אפו בקונוס ההרדמה שוב לרכוש כמה תמונות של העכבר הקדמי כדי לקבל את אותות Fluc מן אנגיוגנזה.
    הערה: צג הקינטי Fluc צריך להתבצע עבור כל עכבר עד האותות להגיע למקסימום ולאחר מכן דוהה.
  9. חזור על ההליכים שלבים 5.4 – 5.8 עבור כל עכבר.
  10. לאחר הדמיה, לשמור על העכברים בסביבה חמה עד בעלי חיים מתעוררים.
  11. בנקודת הזמן הרצויה (יום 3, 7, 14, ו 21), חזור על הליכים לעיל (שלב 5.3 – 5.10) כדי לזהות את התקדמות הגידול ואנגיוגנזה הגידול לאורך זמן.
  12. לנתח את Rluc ו Fluc אותות נתונים כדי לחקור את הקשר בין צמיחת הגידול ואנגיוגנזה בהתקדמות הגידול.
    הערה: אזורי הריבית (ROI) המכסה את אתר האיתותים של בלי משתמשים כדי לנתח את הנתונים. למדוד את הזוהר הכולל (פוטונים) של ROI ביחידה של פוטונים/שניות/cm2/הסטרדיאן (p/s/cm2/sr) עבור כל נקודת זמן.
  13. לנתח את האותות Rluc ו Fluc של ROI באמצעות תוכנה גרפית (איור 4).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בניסוי זה, סרטן השד מודל העכבר הוקמה באמצעות תאים 4T1 כדי לחקור את הקשר בין גידול גידול והגידול אנגיוגנזה (איור 1). ראשית, שני הנגיף היו ארוזים, אשר נשאו רצפי גנים המבטא Rluc/RLUC (LV-RR) ו Rluc/RLUC/HSV-ttk (LV-RLUC), בהתאמה, כפי שדווח בעבר7. לאחר מכן, שני שונים תא 4T1 קווי, בשם 4T1-RR ו 4T1-RRT, נוצרו על ידי התמרה LV-RR ו-LV-RRT בהתאמה. לאחר הקרנת התרופה 3 ימים, 4T1-RR ו 4T1-RRT נצפו תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטית כדי לזהות את היעילות הת...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

בפרוטוקול זה, הגישה ללא פולשני כפול מתואר מחוץ לתחום הפיתוח של הגידול והאנגיוגנזה. מערכת העיתונאי בלי להיות מפותח לראשונה, המכיל את הגן HSV-ttk/GCV התאבדות עבור מעקב התקדמות הגידול ורגרסיה ב vivo ידי Rluc הדמיה. בינתיים, הגידול אנגיוגנזה מוערך באמצעות Vegfr2-Fluc-KI עכברים באמצעות הדמיה Fluc. זה הגידול מודל העכבר הנושאת הוא מסוגל לספק פלטפורמה מעשית עבור רציפה ולא פולשנית התפתחות הגידול והגידול אנגיוגנזה על ידי כפול בלי בעכבר בודד עם רלוונטיות גבוהה, הנוזלות, ו translatability.

אנגיוגנזה נוגע ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

. למחברים אין מה לגלות

תודות

מחקר זה נתמך על ידי תוכנית מפתח לאומי R & D של סין (2017YFA0103200), הלאומי המדע הטבעי הקרן של סין (81671734), ופרויקטים מרכזיים של טיינג'ין המדע וטכנולוגיה תוכנית תמיכה (18YFZCSY00010), קרנות המחקר הבסיסי עבור האוניברסיטאות המרכזיות (63191155). אנו מכירים בשינויים של גלוריה נאנס, שהיו יקרי ערך בשיפור איכות כתב היד שלנו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.25% טריפסין-0.53 מ"מ EDTAGibco25200072
1.5 מ"ל צינורותAxygen ScientificMCT-105-C-S
15 מ"ל צינורותקורנינג זכוכית601052-50
293TATCCCRL-3216
4T1ATCCCRL-2539
60 מ"מעבודות זכוכית קורנינג430166
6 בארותצלחת קורנינג זכוכית עבודות3516
קבינט בטיחות ביולוגיתשנחאי Lishen ScientificHfsafe-900LC
Blasticidine S הידרוכלוריד (BSD)Sigma-Aldrich15205
ערכת ספירת תאים-8MedChem ExpressHY-K0301
CO2 חממה מוסדרתתרמו פישר מדעי4111
Coelenterazine (CTZ)NanoLight Technology479474
D-luciferin אשלגן מלחקליפר מדעי החיים119222
DMEM סרום בקר עובריGibcoC11995500BT
FBS)BIOIND04-001-1A
מיקרוסקופ פלואורסצנטיNikonTi-E/U/S
Ganciclovir (GCV)Sigma-AldrichY0001129
תוכנת גרפיקהGraphPad תוכנהGraphpad פריזמה 6
מחטי מזרק אינסוליןBecton Dickinson328421
IsofluraneBaxter691477H
מערכת אריזה LentiviralBiosettiacDNA-pLV03
LiposomeInvitrogen
תוכנת הדמיה חיהקליפר מדעי החייםתוכנת הדמיה חיה 4.2
מערכת הדמיה חיהקליפר מדעי החייםIVIS לומינה II
MEM בינוניInvitrogen31985-070
פניצילין-סטרפטומיציןInvitrogen15140122
פוספט חוצץ מלח (PBS)קורנינג עבודות זכוכיתR21031399
פוליברנהסיגמא-אולדריץ' H9268-1G
RPMI1640בינוני ג'יבקוC11875500BT
SORVALL ST 16R צנטריפוגהתרמו פישר מדעיתרמו סורוול ST 16 ST16R
מקרר בטמפרטורה נמוכה במיוחדHaierDW-86L338
XGI-8 מערכת הרדמה גזXENOGEN תאגיד7293
כלים בינוני (11668019

מקורות

  1. Folkman, J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. The New England Journal of Medicine. 285, 1182-1186 (1971).
  2. Kerbel, R. S. Tumor angiogenesis. The New England Journal of Medicine. 358, 2039-2049 (2008).
  3. Hosseinkhani, S. Molecular enigma of multicolor bioluminescence of firefly luciferase. Cellular and Molecular Life Sciences. 68, 1167-1182 (2011).
  4. Nakatsu, T., et al. Structural basis for the spectral difference in luciferase bioluminescence. Nature. 440, 372-376 (2006).
  5. McMillin, D. W., et al. Tumor cell-specific bioluminescence platform to identify stroma-induced changes to anticancer drug activity. Nature Medicine. 16, 483-489 (2010).
  6. Madero-Visbal, R. A., Hernandez, I. C., Myers, J. N., Baker, C. H., Shellenberger, T. D. In situ bioluminescent imaging of xenograft progression in an orthotopic mouse model of HNSCC. Journal of Clinical Oncology. 26, 17006(2008).
  7. Wang, R., et al. Molecular Imaging of Tumor Angiogenesis and Therapeutic Effects with Dual Bioluminescence. Current Pharmaceutical Biotechnology. 18, 422-428 (2017).
  8. Rivera, L. B., Cancer Bergers, G. Tumor angiogenesis, from foe to friend. Science. 349, 694-695 (2015).
  9. Zhang, K., et al. Enhanced therapeutic effects of mesenchymal stem cell-derived exosomes with an injectable hydrogel for hindlimb ischemia treatment. ACS Applied Materials & Interfaces. 10, 30081-30091 (2018).
  10. Du, W., et al. Enhanced proangiogenic potential of mesenchymal stem cell-derived exosomes stimulated by a nitric oxide releasing polymer. Biomaterials. , 70-81 (2017).
  11. Lee, S., et al. Autocrine VEGF signaling is required for vascular homeostasis. Cell. 130, 691-703 (2007).
  12. Dewhirst, M. W., Cao, Y., Moeller, B. Cycling hypoxia and free radicals regulate angiogenesis and radiotherapy response. Nature Reviews. Cancer. 8, 425-437 (2008).
  13. Wigerup, C., Pahlman, S., Bexell, D. Therapeutic targeting of hypoxia and hypoxia-inducible factors in cancer. Pharmacology & Therapeutics. 164, 152-169 (2016).
  14. Wong, P. P., et al. Dual-action combination therapy enhances angiogenesis while reducing tumor growth and spread. Cancer Cell. 27, 123-137 (2015).
  15. Mezzanotte, L., van 't Root, M., Karatas, H., Goun, E. A., Lowik, C. In vivo Molecular Bioluminescence Imaging: New Tools and Applications. Trends in Biotechnology. 35, 640-652 (2017).
  16. Du, W., Tao, H., Zhao, S., He, Z. X., Li, Z. Translational applications of molecular imaging in cardiovascular disease and stem cell therapy. Biochimie. 116, 43-51 (2015).
  17. Liu, J., et al. Synthesis, biodistribution, and imaging of PEGylated-acetylated polyamidoamine dendrimers. Journal of Nanoscience and Nanotechnology. 14, 3305-3312 (2014).
  18. Branchini, B. R., et al. Red-emitting chimeric firefly luciferase for in vivo imaging in low ATP cellular environments. Analytical Biochemistry. 534, 36-39 (2017).
  19. McLatchie, A. P., et al. Highly sensitive in vivo imaging of Trypanosoma brucei expressing "red-shifted" luciferase. PLoS Neglected Tropical Diseases. 7, e2571(2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

ניטור אנגיוגנזהלוציפרז Fireflyלוציפרז Renillaטרנסדוקציה של לנטיג'יסתאי גידול 4T1מערכת דימוי ביו-לומינסצנציההזרקת Coelenterazineמתן D-Luciferin
הדמיה ביולומינסנציה כפולה של התקדמות הגידול ואנגיוגנזה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.