Summary

動脈内血圧モニタリングと気管切開による換気を用いたマウスの脳死誘導

Published: April 17, 2020
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Summary

固体臓器移植の文脈において、その病態生理学的効果が臓器や連続移植片に及ぼす影響を評価するために、脳死誘導のマウスモデルを提示する。

Abstract

循環死後の生活献金と寄付の両方が臓器移植の代替機会を提供する一方で、ドナー脳死後の寄付(BD)は依然として固形移植の主要な源泉となっている。残念ながら、脳機能の不可逆的な喪失は、血行力学的およびホルモン修飾を含む複数の病態生理学的変化を誘発することが知られており、最終的に全身的な炎症反応を引き起こす。生体内でこれらの効果を体系的に調査できるモデルは不足しています。BD誘導のマウスモデルを発表し、BDが同種移植片の品質に及ぼす壊滅的な影響の調査に役立つ可能性があります。気管切開術を介して一般的な頸動脈および信頼できる換気を介して動脈内血圧測定を実施した後、BDはバルーンカテーテルを用いて頭蓋内圧を着実に増加させることによって誘導される。BD誘導の4時間後、臓器は分析のために、またはさらなる移植処置のために収穫され得る。我々の戦略は、マウスモデルにおけるドナーBDの包括的な分析を可能にし、固体臓器移植におけるBD関連の効果を詳細に理解し、臓器予備調整を最適化する道を開く可能性がある。

Introduction

移植は現在、末期臓器不全の唯一の治癒治療である。これまで、脳死(BD)患者は臓器提供の主な情報源となってきましたが、循環死後の生活寄付と寄付は貴重な選択肢です。BDは不可逆性昏睡(既知の原因を有する)によって定義される、脳幹反射および無呼吸2の欠如。残念なことに、BD器官は、ヒト白血球抗原(HLA)ミスマッチおよび低温虚血時間3とは無関係に、長期移植片生存期間において劣った結果を示す。一方、この抗原非依存性危険因子に関する鋭意研究は、BDの結果として媒介される病態生理学的変化の3つの主要な側面をもたらす、血行力学的、ホルモン、および炎症性4を生じる。

現在までに、げっ歯類の実験BDモデルは、主にラットを用いて行われてきた。BDに続く固体器官に対する免疫学的影響に関するより大きな洞察を得るために、我々は現在マウスモデルのみが遺伝的または免疫学的要因に関する包括的な調査を可能にするので、BDのマウスモデルを確立することを目指した。このコンテキストでは、マウス システムは、より多くの分析ツールを提供します。

ここで説明するBD誘導の原理は、頭蓋骨の下に挿入されたバルーンカテーテルの膨張によって誘発される頭蓋内圧の増加に基づいている。頭蓋内圧の増加は、大脳、小脳、および脳幹,5,6の灌流を遮断することによってBDの生理学的メカニズム5を模倣する。末梢器官の十分な灌流を保証するために、血圧測定は処置の間に義務付けられている。この目的のために同時に用いられるカテーテルは、液剤置換によって血圧を安定化させるために生理食物投与に役立つ。BDは自然呼吸の停止を伴うため、十分な換気が確保されなければならない。電気毛布は生理学的な中心体温を維持する。

要約すると、このモデルは、BD誘発傷害、白血球移動7、賛辞活性化8、虚血性再灌流傷害9、および他の要因に及ぼす影響に関する詳細な研究を可能にする。

Protocol

動物実験は、米国医学研究会が定める実験動物の治療の原則と、米国科学アカデミーが作成した実験動物のケアと使用ガイドに従って行われ、国立衛生研究所が発行した(NIH出版第86-23号、改訂版)。すべての実験は、オーストリアの文部科学省(BMWF-66.011/0071-II/3b/2012)によって承認されました。 1. 動脈カテーテル法 局所的な慣行(例えばブプレノルフィン)に従ってケ?…

Representative Results

マウスBDモデルは成功した成功率90%以上で100回以上実行されました。さらに、心臓と腎臓の介入後臓器移植は安全に行われ7. BDは、このモデルを用いてさらに調査され得る様々な病態生理学的変化を誘発する。図1に示すように、血圧は最初の高血圧のピークを示し、続いて長期の降?…

Discussion

BDは、多臓器提供者における同種移植片の質の危険因子であり、多くの病態生理学的変化を伴い、in vivoモデルを使用してのみ十分に評価することができる。血行力学的変化、サイトカイン嵐、ホルモン変化、臓器移植片の質と生存に対する最終的な影響は、vitro4では分析できない。基本的な移植と免疫学的研究の大半は、マウスモデルでのみ広く利用可能な洗練された診断?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Na。

Materials

Arterial catheter (BD Neoflon 26G) BD 391349
Blood Pressure Transducers (APT300) Harvard Apparatus Inc. 73-3862
Fogarty Arterial Embolectomy Catheter N° 3 Edwards Lifesciences Corporation 120403F
Forceps FST 11271-30
Homeothermic Blanket Systems with Flexible Probe Harvard Apparatus Inc. 55-7020
Ketansol Graeub 6680110
Micro scissor FST 15018-10
Needle holder FST 12060-02
Prolene 5-0 Ethicon 8698H
Pump 11 Elite Infusion Only Single Harvard Apparatus Inc. 70-4500
Scissor FST 14075-11
Stereotactic microscope Olympus SZX7
Transpore Tape 3M 1527-1
Underpads Molinea.A 274301
Ventilator for mice (MiniVent Model 845) Harvard Apparatus Inc. 73-0043
Xylasol Graeub 7630109

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Cite This Article
Ritschl, P. V., Hofhansel, L., Flörchinger, B., Oberhuber, R., Öllinger, R., Pratschke, J., Kotsch, K. Brain Death Induction in Mice Using Intra-Arterial Blood Pressure Monitoring and Ventilation via Tracheostomy. J. Vis. Exp. (158), e60831, doi:10.3791/60831 (2020).

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