التحسين من الكلين Organoid وOrganotypic الثقافة للعوعية ، التنمية الموسعة ، وتحسين التصوير المجهري

Susanna Kaisto; Ulla Saarela; Laura Dönges; Irina Raykhel; Ilya Skovorodkin; Seppo  J. Vainio

doi:10.3791/60995

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التحسين من الكلين Organoid وOrganotypic الثقافة للعوعية ، التنمية الموسعة ، وتحسين التصوير المجهري

7.9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/60995

⸱

مارس 28, 2020

Susanna Kaisto¹ , Ulla Saarela¹ , Laura Dönges¹ , Irina Raykhel¹ , Ilya Skovorodkin^*¹ , Seppo J. Vainio^*¹^,²^,³

¹Biocenter Oulu and Faculty of Biochemistry and Molecular Medicine, University of Oulu, ²InfoTech Oulu, University of Oulu, ³Biobank Borealis of Northern Finland, Oulu University Hospital

^* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا العمل طريقتين لدراسة تطور الأعضاء، إعداد زينوزراعة محسنة على الغشاء chorioallantoic (CAM) من أجنة الطيور التي تسمح لالأوعية الدموية من الأعضاء الجنينية المستزرعة وorganoids ورواية ثابتة z الاتجاه طريقة ثقافة الجهاز مع الشروط التجريبية المعدلة التي تسمح للتصوير البؤري الفاصل الزمني عالي الدقة.

الملخص

الثقافات الكلى الجنينية organotypic، وخاصة الخلايا الجذعية المتعددة القدرات المستمدة من الكلى الأعضاء، هي أدوات ممتازة لمتابعة العمليات التنموية ونمذجة أمراض الكلى. ومع ذلك، فإن النماذج محدودة بسبب نقص الأوعية الدموية والأداء الوظيفي. لمعالجة هذا، تم تطوير بروتوكول محسن لطريقة xenografting الخلايا والأنسجة إلى الغشاء chorioallantoic (CAM) لجنين الطيور للحصول على الأوعية الدموية واستعادة تدفق الدم. يتم تراكب الطعوم مع الخزانات الصغيرة المصنوعة حسب الطلب التي تقوم بإصلاح العينات إلى CAM وتزويدها بالوسط الثقافي الذي يحمي الطعوم من التجفيف. تسمح طريقة الثقافة المحسنة لـ xenografts بالنمو لمدة تصل إلى 9 أيام. كما تصف المخطوطة كيفية توفير الظروف المثلى للتصوير البؤري على المدى الطويل للعضويات الكلوية والثقافات الأورغنية باستخدام طريقة Z-Direction الثابتة (FiZD) المنشورة سابقًا. تعمل هذه الطريقة بلطف على ضغط عضو جنيني أو عضو بين غطاء زجاجي وغشاء في كمية كبيرة من الوسط وتوفر ظروفًا ممتازة للتصوير لمدة تصل إلى 12 يومًا. معا، تسمح هذه الطرق الأوعية الدموية وتدفق الدم إلى الاعضاء الكلوية وثقافات الكلى organotypic مع تحسين التصوير البؤري. الطرق الموصوفة هنا مفيدة للغاية لدراسة الوظائف الأساسية والتطبيقية للكلى على سبيل الكفو. وتنطبق كلتا الطريقتين على أنواع مختلفة من الأنسجة والأنسجة.

المقدمة

أصبحت الثقافة الأورجة للكلى الجنينية نموذجا هاما لدراسة الكلية منذ عقود¹^،²^،³. تمثل الرينالودات نظامًا نموذجيًا متقدمًا لدراسة تطور الكلى الصحية والمريضة^4. العيب الرئيسي لكلا الطريقتين، ومع ذلك، هو أن أيا من الأسلوبين خلاصة الوظيفة الرئيسية للكلية: ترشيح الدم. الكلى والأوعية الدموية تتطور في الحلقات الكلوية وثقافات الأورجان وبمماثلة إلى مرحلة مبكرة في التنمية الفيفو; ومع ذلك ، فإن الكبيبات التي تشكلت في المختبر لا تزال وعائية^5. الأوعية الدموية من الكلى الجنينية على سبيل لا ينف والأعضاء الكلوية وقد أظهرت سابقا في تجارب زرع فقط تحت....