Um pipeline usando eletroporação bilateral no útero para interrogar influências genéticas no comportamento dos roedores

Ashley  L. Comer; Balaji Sriram; William  W. Yen; Alberto Cruz-Martín

doi:10.3791/61350

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Artigo de método

Um pipeline usando eletroporação bilateral no útero para interrogar influências genéticas no comportamento dos roedores

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DOI:

10.3791/61350

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21 de maio de 2020

Ashley L. Comer¹^,²^,³^,⁴ , Balaji Sriram⁵ , William W. Yen² , Alberto Cruz-Martín¹^,²^,³^,⁴^,⁶

¹The Graduate Program for Neuroscience, Boston University, ²Department of Biology, Boston University, ³Neurophotonics Center, Boston University, ⁴Center for Systems Neuroscience, Boston University, ⁵Research and Early Development, Biogen, ⁶Department Pharmacology and Experimental Therapeutics, Boston University

Neste artigo

Resumo

O papel dos genes recentemente descobertos associados à doença na patogênese das doenças neuropsiquiátricas permanece obscuro. Um bilateral modificado na técnica de eletroporação uterómis permite a transferência genética em grandes populações de neurônios e o exame dos efeitos causadores das mudanças na expressão genética no comportamento social.

Resumo

Como estudos de associação genoma lançam luz sobre os fundamentos genéticos heterogêneos de muitas doenças neurológicas, a necessidade de estudar a contribuição de genes específicos para o desenvolvimento cerebral e a função aumenta. Contar com modelos de camundongos para estudar o papel de manipulações genéticas específicas nem sempre é viável, uma vez que as linhas de camundongos transgênicos são bastante caras e muitos novos genes associados a doenças ainda não têm linhas genéticas disponíveis comercialmente. Além disso, pode levar anos de desenvolvimento e validação para criar uma linha de mouse. No útero a eletroporação oferece um método relativamente rápido e fácil para manipular a expressão genética de uma maneira específica do tipo celular in vivo que só requer o desenvolvimento de um plasmídeo de DNA para alcançar uma manipulação genética particular. Bilateral na eletroporação do útero pode ser usado para atingir grandes populações de neurônios piramixais do córtex frontal. A combinação desse método de transferência genética com abordagens comportamentais permite estudar os efeitos das manipulações genéticas na função das redes de córtex pré-frontal e no comportamento social de camundongos juvenis e adultos.

Introdução

Estudos de associação genoma (GWAS) têm impulsionado a descoberta de novos genes candidatos que estão associados às patologias cerebrais^1,^2,³^,⁴. Esses estudos têm sido particularmente benéficos na compreensão de distúrbios neuropsiquiátricos devastadores, como a esquizofrenia (SCZ), onde a investigação de novos genes tem servido como ponto de lançamento para novas linhas de pesquisa e intervenção terapêutica⁵^,⁶. Genes que abrigam risco para SCZ apresentam expressão tendenciosa no cór....