Modélisation de l’infection par le virus de l’hépatite B dans les cellules non hépatiques 293T-NE-3NRs

Xiaoyue Sun; Xiaoqiang Yang; Chui Zeng; Fayed Attia Koutb Megahed; Qi Zhou; Tingdang Liu; Waqas Iqbal; Pingnan Sun; Xiaoling Zhou

doi:10.3791/61414

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Article de méthode

Modélisation de l’infection par le virus de l’hépatite B dans les cellules non hépatiques 293T-NE-3NRs

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DOI :

10.3791/61414

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5 juin 2020

Xiaoyue Sun^*¹^,²^,³ , Xiaoqiang Yang^*¹^,²^,³^,⁴ , Chui Zeng¹^,²^,³ , Fayed Attia Koutb Megahed¹^,²^,³^,⁵ , Qi Zhou¹^,²^,³ , Tingdang Liu¹^,²^,³ , Waqas Iqbal¹^,²^,³ , Pingnan Sun¹^,²^,³ , Xiaoling Zhou¹^,²^,³

¹Stem Cell Research Center, Shantou University Medical College, ²The Center for Reproductive Medicine, Shantou University Medical College, ³Guangdong Provincial Key Laboratory of Infectious Diseases and Molecular Immunopathology, Shantou University Medical College, ⁴Medical Research Center, Sun Yat-Sen Memorial Hospital, Sun Yat-Sen University, ⁵Department of Nucleic Acid Researches, Genetic Engineering and Biotechnology Research Institute, General Autority - City of Scientific Researches and Technological Applications

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ce manuscrit décrit un protocole détaillé pour l’infection par le virus de l’hépatite B (VHB) dans de nouvelles cellules 293T (293T-NE-3NR, exprimant des NTCP humains, HNF4α, RXRα et PPARα) et des cellules hépatiques traditionnelles (PleG2-NE, exprimant le NTCP humain).

Résumé

Le VHB infecte principalement les hépatocytes humains, mais il a également été trouvé pour infecter les tissus extrahépatiques tels que les reins et les testicules. Néanmoins, les modèles de VHB à base de cellules sont limités aux lignées cellulaires d’hépatome (comme HepG2 et Huh7) surexprimant un récepteur fonctionnel du VHB, le polypeptide co-transport du taurocholate de sodium (NTCP). Ici, nous avons utilisé 293T-NE-3NRs (293T surexprimant NTCP humain, HNF4α, RXRα et PPARα) et HepG2-NE (HepG2 surexprimant NTCP) comme lignées cellulaires de modèle. L’infection par le VHB dans ces lignées cellulaires a été effectuée soit en utilisant des particules concentrées du virus du VHB provenant d’HepG2.2.15, soit en co-organisant des hepG2.2.15 avec les lignées cellulaires cibles. L’immunofluorescence de HBcAg pour HBcAg a été exécutée pour confirmer l’infection de VHB. Les deux méthodes présentées ici nous aideront à étudier l’infection par le VHB dans les lignées cellulaires non hépatiques.

Introduction

L’hépatite B affecte la vie de plus de 2 milliards de personnes et constitue l’une des principales menaces pour la santé publique. Environ 257 millions de personnes sont infectées de façon chronique par le virus de l’hépatite B (VHB) dans le monde, ce qui représente un lourd fardeau pour la société¹. Les hépatocytes ne sont pas les seules cellules infectées par le VHB et d’autres cellules dans les tissus non hépatiques, comme les reins et les testicules, sont également infectées par ce virus²^,³. À l’heure actuelle, les modèles de cellules d’infection par le VHB sont limités aux hépatocy....