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방법 논문

ApoE에서 뒷다리 허혈의 변형 된 수술 모델-/- 소형 절개를 사용하여 마우스

3.5K 조회수

DOI:

10.3791/62402

2021년 5월 13일

이 논문에서

요약

이 문서는 작은 절개를 가진 마우스에 있는 심각한 허혈을 확립하기 위하여 능률적인 외과 접근을 보여줍니다. 이 방법은 실험실 업그레이드없이 대부분의 연구 그룹에 의해 적용 될 수있다.

초록

이 연구의 목적은 대부분의 동물 실험실에서 구현 될 수있는 마우스에서 급성 허혈을 유도하기 위해 수정 된 수술 방법을 도입하고 평가하는 것입니다. 대퇴동맥(DLFA)의 이중 결찰에 대한 기존의 접근법과는 달리, DLFA를 수행하기 위해 근위 대퇴동맥(FA)을 노출시키기 위해 올바른 인게날 부위에 대한 작은 절개가 이루어졌다. 이어서, 7-0 봉합사를 사용하여, 절개는 말단 FA를 노출하기 위해 무릎 영역으로 끌려갔다. 수술 후 0, 1, 3, 5 및 7일 동안, 뒷사지의 기능적 회복은 탈로프 스케일을 사용하여 시각적으로 평가되고 등급화되었다. 히스토로지평가는 DLFA 이후 7일 후에 동물을 안락사한 후 수행되었다. 절차는 성공적으로 10 ApoE-/- 마우스에 있는 오른쪽 다리에, 그리고 어떤 마우스는 후속 관찰 도중 정지했습니다. 10마리의 마우스 의 절개 크기는 5mm(4.2± 0.63mm) 미만이었다. MRI 결과는 허혈성 측의 FA 혈류가 명확하게 차단되었다는 것을 보여주었습니다. Tarlov 스케일 결과는 수술 후 뒷다리 기능이 현저히 감소하고 다음 7일 동안 서서히 회복되었다는 것을 보여주었습니다. 조직학적 평가는 허혈성 측에 상당한 염증 반응을 보였고 허혈성 뒷두발의 미세 혈관 밀도를 감소시키는 것으로 나타났다. 결론적으로, 이 연구는 DLFA를 사용하여 뒷다리 허혈 (HLI)을 수행하기 위해 소형 절개를 사용하여 수정 된 기술을 소개합니다.

서론

말초 동맥 질환 (PAD)과 같은 혈관 질환연구를 위한 전임상 동물 모델에 대한 충족되지 않은 필요성이 있습니다. 진단 및 치료의 고급 발달에도 불구하고 2018 년1에서 PAD를 가진 2 억 명 이상의 환자가 있었고 그 수는 지속적으로 증가하고 있습니다. 비록 몇몇 새로운 치료 접근법2,3,4,5,6,7이 기술되었지만, 이러한 치료 양식의 성공적인 번역을 임상 응용 프로그램으로 성공적으로 번역하는 것은 어려운 작업으로 남아 있다. 따라서, 인간 질환 상태를 시뮬레이션하는 생체 내 실험 모델에서 안정적이고 관련성이 높은 이러한 새로운 치료 접근법의 잠재적 기전및 효율을 조사하여 PAD6,7을치료해야 한다.

고지혈증과 죽상 경화증 (....

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프로토콜

참고: 모든 실험 절차는 EC 지침 EC 2010/63/EU에 따라 수행되었으며 현지 독일 법률(35-9185.81/G[1]239/18)의 승인을 받았습니다. C57BL/6J 배경이 29.6-38.0g인 10마리의 수컷 아포에 마우스는 12시간 광/암흑주기에 보관되어 서양 식단(콜레스테롤 1.25%, 지방 21%)과 8주 부터 12주 동안 물 광고 리비툼을 공급하였다. HLI는 아래에 설명된 바와 같이 20주 된 마우스에 수행되었다.

1. ApoE에서 HLI 유도-/- 마우스

  1. 수술에 필요한 장비와 도구를 준비합니다(재료 그림 1참조). 사용하기 전에 오토클레이브를 통해 수술 기구를 살균하고 수술 중에 유리 비드 멸균제를 사용하십시오.
  2. 미다졸람(5mg/kg), 메데토미딘(0.05 mg/ml/kg), 펜타닐(0.5 mg/kg)의 혼합물을 모든 수술 전에 피하 주사(S.C.)로 마우스를 마취시킵니다.
    1. 마취가 발병한 후, 눈에 수의사 연고를 사용하여 건조함을 방지하고 앞다리와 뒷다리에 페달 철수 반사가 없는지 확인합니다.
  3. ....

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결과

아포에의 특성-/-- 마우스
DLFA 수술은 HLI 모델을 확립하기 위해 10마리의 마우스에서 성공적으로 수행되었으며, 수술 후 마우스 중 누구도 사망하지 않았습니다. 체중의 변화를 따르기 위해, 마우스는 DLFA 절차 (PRE DLFA) 및 DLFA 수술 후 7 일 전에 무게를 측정했다 (포스트 DLFA). 사전 DLFA 가중치는 29.6에서 38.0g(평균 34.74 ± 2.47g)이며, DLFA 이후 의 무게는 26.5에서 34.1g(평균 30.77 ± 2.15g)으로, 이는 전 DLFA가중치(P < 0.05, 피겨 3)보다현저히 낮았다. 수술 시간은 15분에서 47분까지 다양했다(평균 34.2± 8.82분, 마취 시간을 포함하지 않음). 10마우스의 절개 크기는 3mm에서 5mm(평균 4.2 ± 0.63 mm)에 구역수색되었습니다........

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토론

이 연구는 필요한 실험실 업그레이드없이 3-4mm 절개를 통해 FA의 근위 및 탈산 영역에서 이중 결찰을 사용하여ApoE-/-마우스에 HLI 모델을 확립하기 위한 수정, 단순화 및 외과 효율적인 접근법을 보고합니다. 이 방법의 주요 특징은 마우스 HLI 모델8,9,10,11,12,15,20,22, 23,24를 설명하는 이전에 보고된 연구 결과에 비해 절개크기가

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공개 사항

저자는 기사 콘텐츠가 잠재적 이해 상충으로 해석 될 수있는 상업적 또는 재정적 관계가없는 경우 구성되었다고 선언합니다.

감사의 글

저자는 뛰어난 기술 지원에 대한 빅토리아 스쿠드, 알렉산더 슐룬드, 펠릭스 회너에게 감사드립니다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
10x 인산염 완충액 식염Roth9143.1헤마톡실린 및 에오신 염색 및 면역조직화학 염색에 사용
30% H2O2Roth9681.2면역조직화학 염색
6-0 흡수성 봉합PROLENE8776H피부 봉합에 사용
6-0 흡수성 봉합PROLENEEP8706수술에 사용
7-0 흡수성 봉합PROLENEEH8021E동맥
7-0 absroable 봉합PROLENEEP8755수술에 사용
아세트산Roth6755.1헤마톡실린 및 에오신 염색에 사용
Albumin Fraktion VRoth8076.2면역조직화학 염색에 사용
오토클레이브Systec GmbHSystec VX-150수술 기구
Axio vert A1 현미경Carl ZeissZEISS Axio Vert.A1혈구 및 에오신 염색 및 면역조직화학 염색
Bruker BioSpec 94/20 AVIIIBruker Biospin MRI GmbHN/A대퇴 동맥 막힘
스캔 Buprenovet Sine 0,3mg/mlBayer AG2542 (WDT)수술 후 통증 관리에 사용됩니다. 투여량 - 수술 후 48시간 동안 8시간마다 체중 0.1mg/kg
CD31 항체Abcamab28364면역조직화학 염색에 사용
물에서 Eosin Y 용액 0.5RothX883.1헤마톡실린 및 에오신 염색에 사용
에피토프 회수 용액 pH 6Leica Biosystems6046945면역조직화학 염색에 사용
에탄올 ≥ 99,5 %Roth5054.1헤마톡실린 및 에오신 염색 및 면역조직화학 염색에 사용
펜타닐케이맨 화학437-38-7마취에 사용
미세한 포인트 집게 집게Medixplus93-4505S신경 및 정맥에서 동맥을 분리하는 데 사용
유리 구슬 살균기Simon KellerType 250수술 기구의 살균에 사용
Graefe iris 집게 곡선VUBU VUBUVUBU-02-72207피부와 피하 조직의 무딘 분리에 사용
헤어 리무버 크림, Veet (알로에 베라 포함)Reckitt Benckiser108972마우스 뒷다리에서 헤어 제거
가열판ST Ö RK-TRONIC7042092마우스의 새틀 온도를 유지하십시오
HematoxylinRothT865.2헤마톡실린 및 에오신 염색 및 면역 조직 화학 염색에 사용
Leica 수술 현미경 LeicaM651작업을 용이하게하기 위해 시야를 확대
Liquid DAB + Substrate Chromogen SystemDakoK3468면역 조직 화학 염색
에 사용남성 ApoE-/- 생쥐Charles River LaboratoriesN/A말초 동맥 질환 생쥐 모델
MedetomidineCayman Chemical128366-50-7설립
마이크로 바늘 홀더Black & Black SurgicalB3B-18-8바늘을 잡고
마이크로 봉합사 묶는 집게Life Saver Surgical IndustriesPS-MSF-145수술 중 매듭을 돕기 위해 사용
MicrotomeBiobaseBk-Mt268m조직 절편에 사용
MidazolamRatiopharm44856.01.00마취에 사용
MR 호환 소동물 모니터링 및 게이팅 시스템 모델 1025SA 기기MRI 스캔 중 동물의 활력 징후 모니터링N/a
Octeniderm farblosSchü LKE & Mayr GmbH180212피부 소독에 사용
눈과 코 연고Bayer AG1578675마취
파라 포름 알데히드Roth0335.1조직의 고정에 사용
PentobarbitalNembutal76-74-4마취에 사용
식염수DeltaSelect1299.99.99사용 마취
스프링 핸들 가위 미세하고 날카로운 팁블랙 & Black SurgicalB66167동맥 절단에 사용
SuperCut 가위Black & 검은 외과B55992피부 절단에 사용
Triton X-100Roth9002-93-1면역 조직 화학 염색
서양 다이어트에 사용, 1.25 % 콜레스테롤ssniff Spezialdi & auml; ten GmbHE15723-34생쥐용 다이어트
XyleneRoth4436.3헤마톡실린 및 에오신 염색 및 면역조직화학 염색에 사용
수 사 사 사 사 결찰에 사용 % 하십시오 에 사용 마취

참고문헌

  1. Shu, J., Santulli, G. Update on peripheral artery disease: Epidemiology and evidence-based facts. Atherosclerosis. 275, 379-381 (2018).
  2. Tateishi-Yuyama, E., et al. Therapeutic ....

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