A enterocolite necrosante (NEC) é a doença gastrointestinal (GI) mais grave que ocorre frequentemente em bebês prematuros, especialmente bebês com baixo peso ao nascer, com alta mortalidade e patogênese pouco clara. A causa da NEC pode estar relacionada a anormalidades inflamatórias do sistema de regulação imunológica. Um modelo animal NEC é uma ferramenta indispensável para a pesquisa imunológica da doença NEC. Modelos animais NEC geralmente usam camundongos neonatais C57BL/6J; Os camundongos neonatais BALB/c raramente são usados. Estudos relacionados mostraram que quando os camundongos são infectados, a diferenciação celular Th2 é predominante em camundongos BALB/c em comparação com camundongos C57BL/6J. Estudos sugerem que a ocorrência e o desenvolvimento da NEC estão associados a um aumento nas células auxiliares T tipo 2 (Th2) e são geralmente acompanhados de infecção. Portanto, este estudo utilizou camundongos BALB/c neonatais para induzir um modelo NEC com características clínicas semelhantes e alterações patológicas intestinais observadas em crianças com NEC. Um estudo mais aprofundado é necessário para determinar se esse modelo animal poderia ser usado para estudar respostas de células Th2 na NEC.
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Artigo de método
Um modelo de rato BALB/c neonatal de Enterocolite Necrotizante
* These authors contributed equally
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Resumo
Resumo
A enterocolite necrosante (NEC) é a doença gastrointestinal (GI) mais grave que ocorre frequentemente em bebês prematuros, especialmente bebês com baixo peso ao nascer, com alta mortalidade e patogênese pouco clara. A causa da NEC pode estar relacionada a anormalidades inflamatórias do sistema de regulação imunológica. Um modelo animal NEC é uma ferramenta indispensável para a pesquisa imunológica da doença NEC. Modelos animais NEC geralmente usam camundongos neonatais C57BL/6J; Os camundongos neonatais BALB/c raramente são usados. Estudos relacionados mostraram que quando os camundongos são infectados, a diferenciação celular Th2 é predominante em camundongos BALB/c em comparação com camundongos C57BL/6J. Estudos sugerem que a ocorrência e o desenvolvimento da NEC estão associados a um aumento nas células auxiliares T tipo 2 (Th2) e são geralmente acompanhados de infecção. Portanto, este estudo utilizou camundongos BALB/c neonatais para induzir um modelo NEC com características clínicas semelhantes e alterações patológicas intestinais observadas em crianças com NEC. Um estudo mais aprofundado é necessário para determinar se esse modelo animal poderia ser usado para estudar respostas de células Th2 na NEC.
Introdução
A enterocolite necrosante (NEC), a doença gastrointestinal mais grave (GI), ocorre na maioria dos bebês prematuros (>90%), especialmente aqueles com baixo peso ao nascer (VLBW)1. Em bebês VLBW, a incidência da doença varia de 10% a 12%, e a mortalidade de crianças diagnosticadas com NEC é entre 20% e 30%2,3. A causa da NEC pode estar relacionada a lesões mucosas, invasão por bactérias patogênicas e alimentação intestinal, o que pode levar a respostas inflamatórias e à indução de lesões intestinais em hospedeiros suscetíveis3. A patogênese da NEC não está clara. P....
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Protocolo
Esta pesquisa foi aprovada pelo Comitê de Ética Médica do Centro Médico da Mulher e da Criança de Guangzhou (Nº 174A01) e pelo Comitê de Ética Animal do Centro animal do Laboratório de Biociências de Guangzhou Forevergen (IACUC-G160100). Todos os animais foram criados na mesma sala em um ambiente específico livre de patógenos (SPF), e experimentos foram realizados em ambiente convencional. Os camundongos utilizados para reprodução tinham de 7 a 8 semanas; os camundongos para induzir NEC (n = 72) foram separados da barragem no dia 4, e as barragens(n=14) foram mantidas na gaiola original e amamentaram os ratos do grupo controle (Cont.) (n=24).
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Resultados
O modelo NEC do rato BALB/c foi induzido pela alimentação de fórmulas, alimentação de LPS, hipóxia e estimulação fria. Durante o período de indução, os camundongos foram observados para patologia intestinal, características das fezes, alterações de peso corporal e sobrevida diária. Imagens representativas do intestino delgado durante a indução da NEC; os números no quadro representam o escore da patologia intestinal de 0 (epitélio normal) a 4 (o mais grave) (Figura 3A). O escore de patologia.......
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Discussão
A NEC é a emergência do sistema gastrointestinal mais comum para recém-nascidos, com alta incidência e mortalidade, especialmente em bebês prematuros1,2,3. No entanto, sua patogênese ainda não está clara. Acredita-se atualmente que danos mucosos, invasão de patógenos e alimentação enteral são fatores de alto risco para o NEC3. Até o momento, os animais utilizados para o modelo NEC são principalmente suíno.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse para divulgar.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao Banco de Recursos Biológicos Clínicos do Centro Médico de Mulheres e Crianças de Guangzhou por fornecer a amostra clínica e o Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center por fornecer camundongos. Esta pesquisa foi apoiada pela Fundação Nacional de Ciência Natural da China 81770510 (R.Z.).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Etanol absoluto | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | ||
| Leite de cabra em pó | Petag | ||
| solução de corante HE | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | G1003 | |
| Isoflurano | RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD. | R510 | |
| LPS | Sigma-Adrich | L2880 | |
| Oxigênio médico | vários | vários | |
| microscópios | NIKON | Sistema de imagem NIKON (DS-Ri2) | |
| Resina neutra | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | ||
| Parafina | vários | vários pó | |
| de leite prematuro | Abbott | 57430 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | ||
| 1% de ácido clorídrico | vários | vários | |
| 10% de formalina | LEAGENE | DF0110 |
Referências
- Horbar, J. D., et al. Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009. Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).
- Stoll, B. J., et al. Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonat....
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Reimpressões e permissões
Errata
Formal Correction: Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis
Posted by JoVE Editors on 3/07/2022. Citeable Link.
An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
