Le test mécanique d’évitement des conflits est utilisé comme une lecture non réflexive de la sensibilité à la douleur chez la souris qui peut être utilisée pour mieux comprendre les réponses affectives-motivationnelles dans une variété de modèles de douleur murine.
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Article de méthode
Test mécanique d’évitement des conflits pour mesurer le comportement de la douleur chez la souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
La douleur comprend à la fois des dimensions sensorielles (nociceptives) et affectives (désagréables). Dans les modèles précliniques, la douleur a traditionnellement été évaluée à l’aide de tests réflexifs qui permettent des inférences concernant la composante nociceptive de la douleur, mais fournissent peu d’informations sur la composante affective ou motivationnelle de la douleur. Le développement de tests qui capturent ces composants de la douleur est donc important sur le plan translationnel. Par conséquent, les chercheurs doivent utiliser des tests comportementaux non réflexifs pour étudier la perception de la douleur à ce niveau. L’évitement mécanique des conflits (MCA) est un test de comportement non réflexif volontaire établi, pour étudier les réponses motivationnelles à un stimulus mécanique nocif dans un paradigme à 3 chambres. Un changement dans la préférence de localisation d’une souris, lorsqu’elle est confrontée à des stimuli nocifs concurrents, est utilisé pour déduire le désagrément perçu de la lumière vive par rapport à la stimulation tactile des pattes. Ce protocole décrit une version modifiée du test MCA que les chercheurs sur la douleur peuvent utiliser pour comprendre les réponses affectives et motivationnelles dans une variété de modèles de douleur chez la souris. Bien qu’elles ne soient pas spécifiquement décrites ici, nos exemples de données MCA utilisent l’adjuvant de Freund complet intraplantaire (CFA), les lésions nerveuses épargnées (SNI) et un modèle de fracture / coulée comme modèles de douleur pour illustrer la procédure MCA.
Introduction
La douleur est une expérience complexe avec des composantes sensorielles et affectives. Une réduction du seuil de perception de la douleur et une hypersensibilité aux stimuli thermiques et/ou mécaniques sont des caractéristiques clés de cette expérience, que les tests de comportement de la douleur évoqués par stimulus peuvent capturer (comme le test de sensibilité à la chaleur de Hargreaves et le test de von Frey de sensibilité mécanique)1,2. Bien que ces tests donnent des résultats robustes et reproductibles, ils sont limités par leur dépendance à l’égard du retrait réflexif d’un stimulus nocif perçu. Cela a ....
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Protocole
Toutes les expériences impliquant l’utilisation de souris et les procédures qui y sont suivies ont été approuvées par les comités institutionnels de soins et d’utilisation des animaux du MD Anderson Cancer Center et de l’Université de Stanford, en stricte conformité avec le Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire des National Institutes of Health.
1. Construction de MCA
- Construire la chambre 1 avec les dimensions suivantes: 125 mm x 125 mm x 125 mm (largeur x profondeur x hauteur) en acrylique blanc opaque de 3 mm d’épaisseur utilisé pour les parois latérales, le sol, le plafond. Ut....
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Résultats
Le test MCA a été utilisé avec succès avec plusieurs modèles de douleur de souris mécaniquement distincts. La figure 2 montre les données où la mesure de résultat choisie franchissait le point médian de la chambre 2 (figure 2A). Les données obtenues en utilisant le point à mi-chemin par rapport à l’échappement dans la chambre 3 sont très similaires, ~40 s pour la moitié contre ~45 s pour l’échappement de la chambre 3 dans le modèle de lésion nerveuse épargnée (S.......
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Discussion
Comme pour tous les tests comportementaux, une manipulation appropriée, la randomisation et l’aveuglement au traitement des animaux sont essentiels tout au long du processus. Compte tenu des apports multifactoriels dans les comportements complexes et la prise de décision, il est impératif que les animaux soient manipulés, habitués et testés de la manière la plus cohérente possible tout en minimisant la détresse. Il faut également veiller à reproduire le moment du placement de la souris dans la chambre 1, à allumer les lu.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts pertinent à divulguer.
Remerciements
GM est soutenu par une bourse d’études supérieures NDSEG. Le VLT est soutenu par la #GM137906 de subvention NIGMS des NIH et la Fondation Rita Allen. AJS est soutenu par les subventions du ministère de la Défense W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 et la Fondation Rita Allen. Nous sommes reconnaissants au Dr Alexxai Kravitz de la faculté de médecine de l’Université de Washington d’avoir conçu et mis à disposition gratuitement les fichiers d’imprimante 3D pour la chambre 2 étage et la plaque de sonde.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 32,8 pieds 3000K-6000K Bandes lumineuses LED blanches réglables, bandes lumineuses LED super lumineuses à intensité variable avec 600 LED SMD 2835 | Lepro | SKU : 410087-DWW-US | Pour la chambre d’éclairage 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html |
| 'lit à pointes' et 'chambre 2 étages' imprimés en 3D | Shapeways | N/A | Facultatif, pour les sondes mécaniques comme alternative aux broches de carte émoussées. |
| 70 % éthanol | Divers | N/A | Pour nettoyer le MCA entre les souris. |
| Acryl-Hinge 2 | TAP Plastics | N/A | pour la fixation des couvercles de chambre aux parois arrière. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122 |
| Chemcast Cast Acrylic Sheet, | Clear TAP Plastics | N/A | 3mm d’épaisseur. Pour la paroi avant de la chambre 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510 |
| Chemcast Cast Acrylique coloré transparent, Transparent rouge foncé - 50 % | Plastiques TAP N | /A | 3mm d’épaisseur. 50 % de transmission de la lumière. Pour les parois et les couvercles des chambres 2 et 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519 |
| Chemcast Translucide & Acrylique coulé coloré opaque, signe blanc opaque - 0.1 % | TAP Plastics | N/A | 3mm d’épaisseur. Pour les parois latérales et le couvercle de la chambre 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341 |
| Désinfectant (par exemple Quatricide) | Pharmacal Research Laboratories, Inc. | 65020F | Pour désinfecter le MCA à la fin d’une session de test. |
| Marqueurs et tableau effaçables | à sec Divers | N/A | Pour ajouter des informations expérimentales au début de la séquence vidéo. |
| Goupilles de carte | Divers | N/A | En option, pour sondes mécaniques. Utilisez du papier de verre pour émousser les pointes acérées avant utilisation. Peut être utilisé à la place de pièces imprimées en 3D. |
| Essuie-tout | Divers | N/A | Pour nettoyer/désinfecter le MCA. |
| SCIGRIP Weld-On #3 Acrylic Cement | TAP Plastics | N/A | Pour assembler des feuilles d’acrylique dans des chambres et fixer des charnières. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131 |
| Chronomètre | Divers | N/A | Pour enregistrer les latences d’évasion/temps de séjour en temps réel ou à partir d’une vidéo enregistrée. |
| Minuterie | Divers | N/A | Pour s’assurer que l’allumage des LED, l’enlèvement de la barrière et la réalisation des tests sont chronométrés de manière cohérente. |
| Caméra vidéo | Divers | HDRCX405 Caméscope Handycam | Pour enregistrer le comportement de la souris dans l’appareil MCA. Peut être remplacé par n’importe quelle caméra vidéo grand public capable d’une résolution de 1080p. |
| Trépied | Famall | N/A | Tout trépied capable de maintenir l’appareil photo à hauteur de banc pour l’enregistrement de séquences MCA est acceptable. |
Références
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32 (1), 77-88 (1988).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative ....
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Réimpressions et autorisations
