Il presente protocollo descrive un'iniezione a due punti di lisofosfatidilcolina attraverso un frame stereotassico per generare un modello di demielinizzazione stabile e riproducibile nei topi.
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Articolo metodologico
Un'iniezione a due punti stabilmente stabilita del modello di demielinizzazione focale indotta da lisofosfatidilcolina nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
La segnalazione dei lisofosfolipidi mediata dal recettore contribuisce alla fisiopatologia di diverse malattie neurologiche, in particolare la sclerosi multipla (SM). La lisofosfatidilcolina (LPC) è un lisofosfolipide endogeno associato all'infiammazione e potrebbe indurre un rapido danno con tossicità ai lipidi mielinici, portando alla demielinizzazione focale. Qui, viene presentato un protocollo dettagliato per l'iniezione stereotassica di LPC a due punti che potrebbe causare direttamente una grave demielinizzazione e replicare la lesione da demielinizzazione sperimentale in modo rapido e stabile nei topi mediante procedura chirurgica. Pertanto, questo modello è molto rilevante per le malattie da demielinizzazione, in particolare la SM, e può contribuire al relativo avanzamento della ricerca clinicamente rilevante. Inoltre, l'immunofluorescenza e i metodi di colorazione blu veloce Luxol sono stati utilizzati per rappresentare il decorso temporale della demielinizzazione nel corpo calloso dei topi iniettati con LPC. Inoltre, il metodo comportamentale è stato utilizzato per valutare la funzione cognitiva dei topi dopo la modellazione. Nel complesso, l'iniezione a due punti di lisofosfatidilcolina attraverso un frame stereotassico è un metodo stabile e riproducibile per generare un modello di demielinizzazione nei topi per ulteriori studi.
Introduzione
La segnalazione dei lisofosfolipidi mediata dal recettore coinvolge diversi processi fisiologici di quasi tutti i sistemi di organi1. Nel sistema nervoso centrale (SNC), questa segnalazione svolge un ruolo fondamentale nella patogenetà delle malattie neurologiche autoimmuni come la sclerosi multipla (SM). La sclerosi multipla è una malattia cronica immuno-mediata caratterizzata da demielinizzazione patologica e risposta infiammatoria, che causa disfunzione neurologica e deterioramento cognitivo 2,3. Dopo continue recidive e remittenti durante la malattia precoce, la maggior parte dei pa....
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Protocollo
Tutte le procedure per gli animali sono state approvate dall'Institute of Animal Care Committee del Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Cina. Per il presente studio sono stati utilizzati topi adulti C57BL/6 maschi e femmine (wild type, WT; 20-25 g; 8-10 settimane di età). I topi sono stati ottenuti da fonti commerciali (vedi Tabella dei materiali). I topi sono stati ospitati in una specifica struttura per animali privi di agenti patogeni (SPF) con acqua e cibo forniti ad libitum. Sono stati mantenuti in un periodo alternato di 12 ore di ciclo di luce e buio nelle condizioni standard di temperatura di 22 °C e....
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Risultati
L'iniezione a due punti dell'LPC ha determinato una demielinizzazione più duratura
LPC porta principalmente a danni rapidi con tossicità alla mielina e scissione dell'integrità dell'assone15. Il giorno dell'iniezione è stato considerato come giorno 0. I topi sono stati conservati per un periodo di 10-28 giorni (10 dpi e 28 dpi). La colorazione Luxol fast blue (LFB)10 è stata utilizzata per valutare l'area di demielinizzazione nei topi in questi punti tem.......
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Discussione
La SM, una malattia demielinizzante cronica del SNC, è una delle cause più comuni di disfunzione neurologica nei giovani adulti20. Clinicamente, circa il 60%-80% dei pazienti con SM sperimenta il ciclo di recidive e remissioni prima di sviluppare una SM21,22 secondaria-progressiva, e alla fine porta a disturbi cumulativi del movimento e deficit cognitivi nel tempo23. Attualmente, nessun singolo modello sperimentale .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (Sovvenzioni: 82071380, 81873743).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| L-&alfa;-Lisofosfatidilcolina da tuorlo d'uovo | Sigma-Aldrich | L4129-25MG | |
| 32 gauge Ago | HAMILTON | 7762-05 | |
| 10 μ l siringa | HAMILTON | 80014 | |
| trapano cranio ad alta velocità | forte, corea | strong204 | |
| trapano | Hager & Meisinger, Germania | REF 500 104 001 001 005 | |
| Matrx Ventilatore per anestesia animale | MIDMARK | VMR | |
| Strumento stereotassico portatile per topi | Reward | 68507 | |
| Micro siringa | Reward | KDS LEGATO 130 | |
| Isoflurano | VETEASY | ||
| Paraformaldeide | Servicebio | G1101 | |
| Tampone fosfato | BOSTER | PYG0021 | |
| LuxoL fast bLue | Servicebio | G1030-100ML | |
| Sutura | FUSUNPHARMA | 20152021225 | |
| Stampo cerebrale | Reward | 68707 | |
| Fissativo | per microscopio elettronicoServicebio | G1102-100ML | |
| Rosso neutro (C.I. 50040), per microscopia Certistain | Sigma-Aldrich | 1.01376 | |
| Anticorpo anti-proteina basica della mielina | Millipore | #AB5864 | |
| anti-GST-P pAb | MBL | #311 | |
| Ki-67 (SolA15) | Thermo Fisher Scientific | 14-5698-95 | |
| Anticorpo monoclonale beta actina | Proteintech | 66009-1-ig | |
| Proteina di base della mielina Anticorpo policlonale | Proteintech | 10458-1-AP | |
| OLIG2 Anticorpo policlonale | Proteintech | 13999-1-AP | |
| Alexa Fluor 488 AffiniPure Asino anti-Coniglio IgG (H+L) | YEASEN | 34206ES60 | |
| Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L) | YEASEN | 34412ES60 | |
| Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) | YEASEN | 34212ES60 | |
| HRP Capra Anti-Coniglio IgG (H+L) | abclonale | AS014 | |
| HRP Capra Anti-Topo IgG (H+L) | abclonale | AS003 | |
| Adulto C57BL / 6 topi maschi e femmine | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd |
Riferimenti
- Gaire, B. P., Choi, J. W. Critical roles of lysophospholipid receptors in activation of neuroglia and their neuroinflammatory responses. International Journal of Molecular Sciences. 22 (15), 7864(2021).
- Compston, A., Coles, A. Multiple sclerosis. Lancet
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Ristampe e permessi
