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मानकीकृत चूहे कोरोनरी अंगूठी की तैयारी और पोत व्यास के साथ गतिशील तनाव परिवर्तन की वास्तविक समय रिकॉर्डिंग

Published: June 16, 2022 doi: 10.3791/64121
Automatic Translation
*1, *2, 1, 2, 1,3, 1,3
1Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Basic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Research Institute of Integrated TCM & Western Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
* These authors contributed equally

Summary

वर्तमान प्रोटोकॉल चूहे कोरोनरी धमनी की संवहनी प्रतिक्रियाशीलता को मापने के लिए तार मायोग्राफ तकनीक का वर्णन करता है।

Abstract

कार्डियोवैस्कुलर सिस्टम रोगों की एक प्रमुख घटना के रूप में, कोरोनरी धमनी रोग (सीएडी) को व्यापक रूप से एथेरोस्क्लेरोसिस, मायोकार्डियल रोधगलन और एनजाइना पेक्टोरिस के मुख्य अपराधी के रूप में माना जाता है, जो दुनिया भर के लोगों के जीवन और स्वास्थ्य को गंभीर रूप से खतरे में डालता है। हालांकि, पृथक रक्त वाहिकाओं की गतिशील बायोमैकेनिकल विशेषताओं को कैसे रिकॉर्ड किया जाए, इसने लोगों को लंबे समय से उलझन में डाल दिया है। इस बीच, इन विट्रो गतिशील संवहनी तनाव परिवर्तनों को मापने के लिए कोरोनरी धमनियों की सटीक स्थिति और अलगाव सीएडी दवा विकास में एक प्रवृत्ति बन गई है। वर्तमान प्रोटोकॉल चूहे कोरोनरी धमनियों की मैक्रोस्कोपिक पहचान और सूक्ष्म पृथक्करण का वर्णन करता है। पोत व्यास के साथ कोरोनरी धमनी की अंगूठी के संकुचन और फैलाव समारोह की निगरानी स्थापित मल्टी मायोग्राफ प्रणाली का उपयोग करके की गई थी। कोरोनरी रिंग तनाव माप के मानकीकृत और क्रमादेशित प्रोटोकॉल, नमूने से डेटा अधिग्रहण तक, प्रयोगात्मक डेटा की पुनरावृत्ति में काफी सुधार करते हैं, जो शारीरिक, रोग और दवा हस्तक्षेप के बाद संवहनी तनाव रिकॉर्ड की प्रामाणिकता सुनिश्चित करता है।

Introduction

कोरोनरी धमनी रोग (सीएडी) को व्यापक रूप से मान्यता प्राप्त है और एक विशिष्ट और प्रतिनिधि हृदय रोग के रूप में चिंतित किया गया है, जो विकसित और विकासशील दोनों देशों में मृत्यु का प्रमुख कारणहै 1,2. सामान्य हृदय शारीरिक कार्य के लिए रक्त और ऑक्सीजन आपूर्ति मार्ग के रूप में, परिसंचारी रक्त दो मुख्य कोरोनरी धमनियों और मायोकार्डियम 3,4 की सतह पर एक रक्त संवहनी नेटवर्क के माध्यम से हृदय में प्रवेश करता है और पोषण करता है। कोरोनरी धमनियों में कोलेस्ट्रॉल और वसा जमा हृदय की रक्त आपूर्ति और संवहनी प्रणाली की हिंसक भड़काऊ प्रतिक्रिया को काट देता है, जिससे एथेरोस्क्लेरोसिस, स्थिर एनजाइना, अस्थिर एनजाइना, मायोकार्डियल रोधगलन, या अचानक हृदय की मृत्यु 5,6 हो जाती है। कोरोनरी धमनियों के पैथोलॉजिकल स्टेनोसिस के जवाब में, प्रतिपूरक त्वरित शारीरिक दिल की धड़कन बाएं वेंट्रिकल7 के उत्पादन को बढ़ाकर हृदय या शरीर के महत्वपूर्ण अंगों की रक्त आपूर्ति को संतुष्ट करती है। यदि लंबे समय तक कोरोनरी स्टेनोसिस को समय पर राहत नहीं मिलती है, तो हृदय के कुछ क्षेत्रों में व्यापक नई रक्त वाहिकाएं विकसित हो सकती हैं8. वर्तमान में, सीएडी का नैदानिक उपचार अक्सर दवा थ्रोम्बोलिसिस या सर्जिकल मैकेनिकल थ्रोम्बोलिसिस और लगातार दवा और महान सर्जिकल विकलांगता के साथ एक बहिर्जात बायोनिक संवहनी बाईपास को गोदलेता है 9. इसलिए, कोरोनरी धमनी शारीरिक गतिविधि की कार्यात्मक जांच अभी भी हृदय रोगों के लिए एक तत्काल सफलता है10.

वायरलेस टेलीमेट्री सिस्टम को छोड़कर कोरोनरी शारीरिक गतिविधि का पता लगाने के लिए कोई तकनीकी साधन उपलब्ध नहीं हैं, जो गतिशील रूप से विवो कोरोनरी दबाव, संवहनी तनाव, रक्त ऑक्सीजन संतृप्ति और पीएच मान11 में रिकॉर्ड कर सकते हैं। इसलिए, कोरोनरी धमनियों की पाठ्य गोपनीयता और जटिलता को ध्यान में रखते हुए, कोरोनरी धमनियों की सटीक पहचान और अलगाव निस्संदेह इन विट्रो4 में सीएडी के कई तंत्रों की खोज के लिए सबसे अच्छा विकल्प है।

एक श्रृंखला मल्टी मायोग्राफ सिस्टम, विशेष रूप से एक तार माइक्रोग्राफ माइक्रोवास्कुलर तनाव डिटेक्टर (सामग्री की तालिका देखें), उच्च परिशुद्धता और निरंतर गतिशील रिकॉर्डिंग12 की विशेषताओं के साथ छोटे संवहनी, लसीका और ब्रोन्कियल ट्यूबों के इन विट्रो ऊतक तनाव परिवर्तनों की रिकॉर्डिंग के लिए एक बहुत परिपक्व विपणन योग्य उपकरण है। उक्त प्रणाली को 60 μm से 10 मिमी के व्यास के साथ गुहा संरचनाओं के इन विट्रो ऊतक तनाव विशेषताओं को रिकॉर्ड करने के लिए बड़े पैमाने पर नियोजित किया गया है। तार माइक्रोग्राफ के मंच की निरंतर हीटिंग विशेषताएं काफी हद तक प्रतिकूल बाहरी वातावरण की उत्तेजना को ऑफसेट करती हैं। इस बीच, गैस मिश्रण और पीएच मानों के निरंतर इनपुट हमें एक समान शारीरिक स्थिति13 में अधिक सटीक संवहनी तनाव डेटा प्राप्त करने की अनुमति देते हैं। हालांकि, चूहे कोरोनरी धमनियों (चित्रा 1) के शारीरिक स्थानीयकरण की जटिलता को ध्यान में रखते हुए, इसका अलगाव विविध हृदय रोग और दवा विकास के तंत्र की खोज को परेशान और सीमित कर रहा है। इसलिए, वर्तमान प्रोटोकॉल विस्तार से चूहे कोरोनरी धमनी के शारीरिक स्थान और पृथक्करण प्रक्रिया का परिचय देता है, इसके बाद तार माइक्रोग्राफ14 के मंच पर तनाव माप होता है।

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Protocol

पशु प्रोटोकॉल की समीक्षा की गई और पारंपरिक चीनी चिकित्सा के चेंगदू विश्वविद्यालय (रिकॉर्ड नंबर 2021-11) से प्रबंधन समिति द्वारा अनुमोदित किया गया। वर्तमान अध्ययन के लिए नर स्प्रैग डॉली (एसडी) चूहों (260-300 ग्राम, 8-10 सप्ताह पुराने) का उपयोग किया गया था। चूहों को एक पशु कक्ष में रखा गया था और प्रयोग के दौरान पीने और खाने के लिए स्वतंत्र थे।

1. समाधान की तैयारी

  1. एनएसीएल के 118 एमएम, के +के 4.7 एमएम, सीएसीएल 2 के 2.5 एमएम,केएच2 पीओ4 के 1.2 एमएम, एमजीसीएल 2 के 1.2 एमएम 26 एच2 ओ, एनएएचसीओ3 के 25 एमएम, डी-ग्लूकोज के 11 एमएम और एचईपीईएस के 5 एमएम को भंग करके शारीरिक नमक समाधान (पीएसएस) तैयार करें (सामग्री की तालिका देखें)।
  2. एनएसीएल के 58 एमएम, के + के 60 एमएम, सीएसीएल 2 के 2.5 एमएम, केएच2 पीओ 4 के 1.2 एमएम,एमजीसीएल 26 एच2 ओ के 1.2 एमएम, एनएएचसीओ3 के 25 एमएम, डी-ग्लूकोज के 11 एमएम और एचईपीईएस के 5 एमएम को भंग करके उच्च के + नमक समाधान तैयार करें।
  3. उपरोक्त दो समाधानों को संतृप्त करें और 95% ओ2 और 5% सीओ2 की मिश्रित गैस के साथ बुलबुला करें। इस बीच, 2 एमएम एनएओएच के साथ 7.38 और 7.42 के बीच समाधान के पीएच मान बनाए रखें।
    नोट: समाधान तैयार करने के बारे में विवरण जानकारी के लिए, कृपया संदर्भ15 देखें।

2. चूहे कोरोनरी धमनी विच्छेदन

  1. 2% आइसोफ्लूरेन के साँस लेने से चूहे को संवेदनाहारी करें। पैर की अंगुली चुटकी द्वारा गहरी संज्ञाहरण की पुष्टि करें और यदि आवश्यक हो, तो अतिरिक्त संवेदनाहारी का प्रशासन करें। फिर पहले प्रकाशित रिपोर्ट12 के बाद पोर्टेबल ऑपरेटिंग टेबल पर दिल को उजागर करने के लिए थोरैसिक गुहा को तुरंत खोलें।
  2. हृदय को अलग करने और हटाने के बाद, चिकित्सा प्लास्टिक संदंश के साथ हल्के ढंग से निचोड़कर सभी हृदय कक्षों से अवशिष्ट रक्त निकालें। जल्दी से 95% ओ 2 + 5% सीओ 2 संतृप्त पीएसएस युक्त पेट्री डिश में पूर्व-संसाधित दिल को 4 डिग्री सेल्सियस पर रखें, जिसमें 7.40 का पीएच मान हो।
  3. कोरोनरी धमनियों की शारीरिक स्थिति को सटीक रूप से पहचानने के लिए, योजनाबद्ध आरेख (चित्रा 2 ए) के अनुसार प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत पृथक हृदय की मुद्रा को समायोजित करें।
    नोट: ललाट दृश्य पर, दाएं ऑरिकल और फुफ्फुसीय धमनी क्रमशः ऊपरी बाएं और ऊपरी दाएं पर थे।
    1. सर्जिकल कैंची और चिमटी (चित्रा 2 बी) के साथ फुफ्फुसीय धमनी की जड़ से इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम के साथ बाएं और दाएं वेंट्रिकुलर गुहाओं को काटें।
  4. मायोकार्डियल ऊतक से बाएं और दाएं कोरोनरी धमनियों को अलग करने के लिए, सही कोरोनरी धमनी शाखा को अच्छी तरह से उजागर करने के लिए ऑप्टिकल शारीरिक माइक्रोस्कोप के तहत दाएं वेंट्रिकल को विच्छेदित करें। फिर हृदय ऊतक 45 ° दक्षिणावर्त (चित्रा 2 डी) घूर्णन करके बाईं कोरोनरी धमनी की स्थिति की पहचान करें।
  5. आसपास के चिपचिपा मायोकार्डियल ऊतक को हटाने के बाद, स्पंदन बाएं (लगभग 5 मिमी) और दाएं (लगभग 5 मिमी) कोरोनरी धमनियों को स्पष्ट रूप से समझें। बीच में कोरोनरी धमनियों को तुरंत अलग करें और पूरी तरह से 4 डिग्री सेल्सियस पर पीएसएस में विसर्जित करें। विभिन्न उत्तेजनाओं (चित्रा 2 ई) के तहत संवहनी तनाव रिकॉर्ड करने के लिए शारीरिक कैंची के साथ अलग धमनी को लंबवत काटकर लगभग 2 मिमी की धमनी अंगूठी प्राप्त करें।

3. धमनी अंगूठी का निलंबन और निर्धारण

नोट: इस चरण पर विवरण के लिए, कृपया संदर्भ14 देखें।

  1. दो 2 सेमी स्टेनलेस स्टील के तार तैयार करें (सामग्री की तालिका देखें) और 95% ओ 2 + 5% सीओ 2 के साथ संतृप्त 4 डिग्री सेल्सियस पीएसएस समाधान में पूर्व-भिगोएं। एक ऑप्टिकल शारीरिक माइक्रोस्कोप के तहत पोत की दिशा के साथ धमनी की अंगूठी के माध्यम से समानांतर रूप से दोनों तारों को पास करें और संवहनी गुहा के दोनों सिरों पर समान लंबाई के तारों के साथ।
  2. 95% ओ 2 + 5% सीओ 2 के साथ बुदबुदाते पीएसएस से भरे तार माइक्रोग्राफ के स्नान में स्टील के तार के सामने और पीछे धमनी की अंगूठी को ठीक करें। एक उपयुक्त सामने और पीछे रिक्ति के लिए क्षैतिज पेंच घुंडी घुमाएं ताकि दो तार क्षैतिज हों और धमनी की अंगूठी विश्राम की प्राकृतिक स्थिति में हो।
  3. थर्मोस्टैटिक तंत्र पर डीएमटी स्नान स्थापित करने के बाद, यह सुनिश्चित करने के लिए डेटा अधिग्रहण सॉफ़्टवेयर खोलें ( सामग्री की तालिका देखें) कि संबंधित पथ संकेत दर्ज किया गया था। निम्नलिखित मापदंडों को सेट करें: आईपीस अंशांकन (मिमी / लक्ष्य दबाव (केपीए): 13.3; आईसी 1 / आईसी 100: 0.9; ऑनलाइन औसत समय: 2 एस; देरी का समय: 60 एस। धमनी अंगूठी निर्धारण के चरणों चित्रा 3 में दिखाया गया है।

4. चूहे धमनी अंगूठी में संवहनी तनाव का मानकीकरण

नोट: विभिन्न गुहा नमूनों के लिए, इन विट्रो में असाधारण गतिविधि बनाए रखने के लिए जहाजों के लिए इष्टतम प्रारंभिक तनाव आवश्यक था। विवरण के लिए, कृपया संदर्भ15 देखें।

  1. पोत के व्यास के साथ एक उचित तनाव लागू करके धमनी की अंगूठी के इष्टतम प्रारंभिक तनाव को प्राप्त करें।
    नोट: पिछले अध्ययन16 के आधार पर, अधिकतम एगोनिस्ट-प्रेरित तनाव 1.16 ± 0.04 एमएन / मिमी के प्रारंभिक खिंचाव तनाव के साथ 0.90 के कारक के मूल्य पर पूरा किया गया था (विभिन्न पोत नमूनों के लिए संदर्भ मूल्य: के मूल्य, 0.90-0.95; प्रारंभिक तनाव, 1.16-1.52 एमएन / मिमी)।
  2. इस बिंदु पर, प्रदर्शित संवहनी तनाव मान को शून्य पर सेट करें। बाद में, स्नान के सर्पिल अक्ष को घुमाकर धमनी की अंगूठी में 3 एमएन पुल उत्तेजना लागू करें।
  3. 37 डिग्री सेल्सियस, पीएच 7.40 पर ऑक्सीजन-संतृप्त पीएसएस बफर में 1 घंटे के लिए इनक्यूबेशन के बाद, तार माइक्रोग्राफ के तनाव नियंत्रण कक्ष पर फिर से 0 एमएन पर तनाव मूल्य सेट करें। धमनी अंगूठी के प्रारंभिक तनाव की सेटिंग प्रक्रिया चित्रा 4 में दिखाया गया है।

5. कोरोनरी धमनी की अंगूठी की प्रतिक्रियाशीलता का पता लगाना

  1. तार मायोग्राफ तकनीक 14 के साथ कोरोनरी धमनी की अंगूठी की सिकुड़ा हुआ गतिविधि करें, औरप्रत्येक 10 मिनट के लिए 60 एमएम के + समाधान के साथ उत्तेजित करके तीन अलग-अलग संचालन में मान्य करें।
  2. प्रत्येक उत्तेजना के बाद, स्नान को ऑक्सीजन-संतृप्त पीएसएस के साथ फ्लश करें जब तक कि संवहनी टोन अपनी प्रारंभिक स्थिति में वापस न आ जाए।
    नोट: केवल जब तीन समानांतर माप का तनाव उतार-चढ़ाव 10% से कम था, और प्रत्येक संकुचन का आयाम 1 एमएन / मिमी से अधिक था, तो योग्य और अत्यधिक सक्रिय धमनी के छल्ले का उपयोग आगे के प्रयोगों के लिए किया जा सकता था। चूहे कोरोनरी अंगूठी की गतिविधि सत्यापन चित्रा 5 में दिखाया गया है।

6. पोस्ट-सर्जिकल उपचार

  1. सर्जरी के बाद, संस्थागत रूप से अनुमोदित प्रोटोकॉल का पालन करते हुए जानवरों को इच्छामृत्यु दें।
    नोट: वर्तमान अध्ययन के लिए, जानवरों को अतिरिक्त आइसोफ्लूरेन साँस लेने से इच्छामृत्यु दी गई थी।

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Representative Results

शारीरिक रूप से तैनात, मायोकार्डियल ऊतक में गहरे वितरित और छिपे हुए चूहे कोरोनरी धमनियों को आसानी से पहचाना नहीं गया था। मनुष्यों (चित्रा 1 ए) और चूहों (चित्रा 1 बी) की कोरोनरी धमनियों की तुलना करके, चूहे कोरोनरी धमनियों का तेजी से और सटीक पृथक्करण चित्रा 2 में नमूना प्रक्रिया के अनुसार आयोजित किया गया था। ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत सामने से सही ऑरिकल, फुफ्फुसीय धमनी और शीर्ष का ठीक से पता लगाने के बाद, मायोकार्डियम को चित्रा 2 ए में दिखाए गए ठोस काली रेखा के साथ विच्छेदित किया गया था। कोरोनरी धमनी की इंटरवेंट्रिकुलर शाखा का लगभग 5 मिमी स्पष्ट रूप से हमारे दृष्टिकोण के संपर्क में था। वेंट्रिकुलर सेप्टल धमनी के आसपास चिपचिपा मायोकार्डियम के ठीक पृथक्करण के बाद, संवहनी संरेखण की दिशा में कोरोनरी धमनी के 2 मिमी लूप को पार करने के लिए 2 सेमी तार का उपयोग किया गया था। तुरन्त, अलग 2 मिमी कोरोनरी अंगूठी तो डीएमटी स्नान में ध्वनि तय किया गया था, के रूप में चित्रा 3 में दिखाया गया है। धमनी की अंगूठी (चित्रा 4) पर एक प्रारंभिक 3 एमएन तनाव लागू होने के बाद, इसका तनाव समानांतर तीन बार (चित्रा 5) में 60 एमएम के + लागू करके 2 एमएन से अधिक हो गया। इस प्रकार, उपरोक्त प्रक्रियाओं के परिणामस्वरूप उत्कृष्ट शारीरिक गतिविधि के साथ एक पृथक कोरोनरी अंगूठी हुई थी।

संचयी के + (20, 28, 39, 55, 77, और 108 एमएम) या यू 46619 (0.01, 0.03, 0.1, 0.3, और 1 μM) को डीएमटी 620 एम के स्नान में जोड़ा गया था, जिसके परिणामस्वरूप इन विट्रो संवहनी स्वर में एकाग्रता-निर्भर वृद्धि हुई थी। के + या यू 46619 (एक थ्रोम्बोक्सेन ए 2 (टीपी) रिसेप्टर एगोनिस्ट) 15 की अगली एकाग्रता को जोड़ा गया था जब वाहिकासंकीर्णन प्रभाव एक पठार तक पहुंच गया था। प्रयोगात्मक परिणाम चित्रा 6 ए, बी में दिखाए गए हैं। के + (60 एमएम) और यू 46619 (0.3 μM) द्वारा संकुचित पृथक कोरोनरी रिंगों के लिए, परीक्षण दवा एपिगेनिन (1, 3, 10, 30, और 100 μM) आश्चर्यजनक रूप से एकाग्रता-निर्भर तरीके से वासोडिलेशन का कारण बना (चित्रा 6 सी)।

Figure 1
चित्रा 1: मानव और चूहे कोरोनरी धमनियों के फ्रीहैंड चित्र (ए) मानव हृदय के सामने के दृश्य से बाएं और दाएं कोरोनरी धमनियों के सतही वितरण की विशेषताओं को प्रस्तुत करता है और नग्न आंखों से आसानी से पहचाना जाता है। (बी) मायोकार्डियम में गहरी चूहे के बाएं और दाएं कोरोनरी धमनियों और उनके ब्रांचिंग इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम को प्रदर्शित करता है। संक्षिप्त नाम: आरसीए = सही कोरोनरी धमनी; एलसीए = बाएं कोरोनरी धमनी; आईएसबी = इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम शाखा। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: चूहों में कोरोनरी धमनी पृथक्करण का आरेख। (ए) चूहे के दिल की दाहिनी औरिकल, फुफ्फुसीय धमनी, शीर्ष और शारीरिक रेखा को प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत सामने के दृश्य से देखा गया था। (बी) बाएं और दाएं वेंट्रिकुलर लुमेन को फुफ्फुसीय धमनी की जड़ से सेप्टम के साथ चीरा गया था। (सी) बाएं और दाएं कोरोनरी धमनियों और उनके इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टल शाखा का शारीरिक स्थान। (डी) धमनी की एक 2 मिमी की अंगूठी। (ई) धमनी की अंगूठी पोत की दिशा के साथ तार द्वारा तय की जाती है। संक्षिप्त नाम: आरए = सही ऑरिकल; पीए = फुफ्फुसीय धमनी; आरसीए = सही कोरोनरी धमनी; आईएसबी = इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम शाखा; एलसीए = बाएं कोरोनरी धमनी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्रा 3: धमनी बढ़ते प्रक्रिया का एक योजनाबद्ध। तार के साथ धमनी की अंगूठी को (ए) में स्थानांतरित कर दिया गया था और डीएमटी स्नान (बी) पर क्लैंप किया गया था। स्टील के तार को तय किया गया था और ऊपरी बाएं (सी) और निचले बाएं (डी) में दक्षिणावर्त खराब कर दिया गया था। (ई) दूसरे तार को धमनी की अंगूठी से गुजरने की अनुमति देने के लिए जगह बनाने के लिए जबड़े को अलग कर दिया गया था। (एफ) दूसरा तार धमनी अंगूठी के माध्यम से समानांतर था। स्टील के तार को ऊपरी दाएं (जी) और निचले दाएं (एच) में दक्षिणावर्त तय और खराब कर दिया गया था। (I) धमनी की अंगूठी को अपनी प्राकृतिक अवस्था में छोड़ने के लिए जबड़े शिथिल रूप से खराब हो गए थे। हरी रेखाएं तारों का प्रतिनिधित्व करती हैं, और नारंगी सिलेंडर 2 मिमी पृथक धमनी अंगूठी का प्रतिनिधित्व करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्रा 4: धमनी अंगूठी की सामान्यीकरण प्रक्रिया। निश्चित पृथक धमनी अंगूठी के तनाव के बाद 0 एमएन पर लौट आया, एक समय में धमनी की अंगूठी पर 3 एमएन पुल बल लागू किया गया था। 5 मिनट के बाद, संवहनी तनाव 2.5 एमएन तक कम हो गया। तनाव को 3 एमएन तक बढ़ाकर और इसे 5 मिनट के लिए स्थिर रखकर, कोरोनरी धमनी की अंगूठी के तनाव को 0 एमएन तक शुरू किया गया था और विभिन्न उत्तेजनाओं के संवहनी तनाव पर बाद के अध्ययनों के लिए 1 घंटे के लिए आराम किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्रा 5: संवहनी प्रतिक्रियाशीलता का परीक्षण। 60 एमएम के + के तीन अनुप्रयोगों ने पृथक कोरोनरी धमनी की अंगूठी के तनाव को 2 एमएन से अधिक तक उत्तेजित किया और तीन माप 10% से कम थे, जो एक बेहतर संवहनी गतिविधि का सुझाव देते थे। प्रत्येक उत्तेजना के बाद, स्नान धीरे-धीरे 37 डिग्री सेल्सियस ऑक्सीजन संतृप्त पीएसएस समाधान के साथ फ्लश किया गया था जब तक कि तनाव 0 एमएन नहीं था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 6
चित्रा 6: के + या यू 46619 के माध्यम से चूहे कोरोनरी धमनी के संचयी खुराक संकुचन के प्रतिनिधि अनुरेखक। जैसे-जैसे के +(ए) और यू46619 (बी) की खुराक बढ़ी, बल खुराक-निर्भर बढ़ गया। (सी) एकाग्रता-निर्भर तरीके से 60 एमएम के +- और 0.3 μM U46619-अनुबंधित धमनी अंगूठी पर एपिजेनिन के आराम प्रभाव को संदर्भित करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें। 

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Discussion

कोरोनरी माइक्रोसर्कुलेशन की गड़बड़ी, जिसमें सीएडी के रोगियों की एक विस्तृत श्रृंखला शामिल है, को धीरे-धीरे पहचाना गया है और पर्याप्त मायोकार्डियम छिड़काव के आधार से संबंधित है। अचानक कोरोनरी हृदय रोग और हृदय रोग की गंभीर जटिलताओं को ध्यान में रखते हुए, सीएडी17 के साथ नैदानिक व्यक्ति के लिए समय पर दवा की रोकथाम और उपचार बेहद महत्वपूर्ण है। अनिवार्य रूप से, कोरोनरी धमनी शरीर रचना विज्ञान की गोपनीयता और इसकी शारीरिक संरचना की जटिलता ने सीएडी 18,19,20,21,22,23,24,25 के लिए दवाओं और उपचारों की प्रभावशीलता के तर्कसंगत और वैज्ञानिक मूल्यांकन को गंभीर रूप से प्रतिबंधित कर दिया है . निस्संदेह, सक्रिय कोरोनरी धमनियों का सटीक स्थानीयकरण और अलगाव पैथोलॉजिकल तंत्र की खोज को बढ़ावा देने और सीएडी से संबंधित बीमारियों की रोकथाम और उपचार उपायों के मूल्यांकन के लिए एक शर्त है। तार माइक्रोग्राफ का मंच कुंडलाकार और गुहा संरचनाओं के साथ इन विट्रो ऊतक तनाव में निरंतर रिकॉर्डिंग के लिए उपयुक्त है, जो 60 μm से 10 मिमी तक व्यास में है। कोरोनरी धमनी की अंगूठी को निरंतर तापमान और ऑक्सीजन नियंत्रण के साथ दो तारों द्वारा कक्ष से जोड़ा जा सकता है। विभिन्न दवाओं को जोड़ने के बाद वाहिकासंकीर्णन और विश्राम का डेटा तनाव सेंसर के माध्यम से कंप्यूटर में इनपुट किया जाता है, जिसमें डेटा लगातार अधिग्रहित और प्रलेखितहोता है 14.

यह लेख मुख्य रूप से चूहे कोरोनरी धमनी की ठोस स्थिति और पृथक्करण प्रक्रिया का वर्णन करता है। और चूहों में कोरोनरी धमनी तनाव परिवर्तन की गतिशील प्रक्रिया को तार माइक्रोग्राफ सिस्टम द्वारा मापा गया था। मानव और चूहे की प्रजातियों की विषमता को देखते हुए, चूहे कोरोनरी धमनियों की तलाश और अलगाव करते समय हमें इन मतभेदों के बारे में पता होना चाहिए। चूहे कोरोनरी धमनियों को एक स्वतंत्र इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टल शाखा के साथ बाएं और दाएं धमनियों में विभाजित किया जाता है। मानव कोरोनरी धमनियां हृदय की सतह पर होती हैं, जबकि चूहे की कोरोनरी धमनियां थोड़ी गहरी होती हैं। धमनी अंगूठी तनाव को मापने के दौरान, सभी बफर समाधान संतृप्त और 37 डिग्री सेल्सियस, पीएच = 7.40 पर 95% ओ 2 + 5% सीओ2 के साथ बुलबुला था। दो तारों द्वारा धमनी अंगूठी की निश्चित प्रक्रिया को विस्तार से पेश किया गया था। शरीर में धमनी पूर्ण विश्राम की स्थिति के बजाय सूक्ष्म कसना की स्थिति में है। और धमनी का सिकुड़ा हुआ कार्य कुछ हद तक उन पर लागू पुल बल से निकटता से संबंधित है। इसलिए, धमनी अंगूठी को मानकीकृत करना आवश्यक है ताकि यह बाद के प्रयोग में बेहतर संवहनी शारीरिक गतिविधि को बनाए रखने के लिए इष्टतम प्रीलोडेड स्थिति में हो। चूंकि उच्च के + स्थिति (60 एमएम) कोशिका झिल्ली को विध्रुवण कर सकती है और वोल्टेज-गेटेड सीए2 + चैनलों को सक्रिय कर सकती है, यह बाह्य सीए2 + और धमनी संकुचन26 की आमद का कारण बनती है।

वाहिकासंकीर्णन और फैलाव के परीक्षण में, चूहे कोरोनरी धमनियों पर के + या यू 46619 के सिकुड़ा हुआ प्रभाव की जांच की गई थी। परिणामों में, के + या यू 46619 आयन चैनलों या विशिष्ट रिसेप्टर्स पर अभिनय करके एकाग्रता-निर्भर तरीके से चूहों की कोरोनरी धमनियों को लगातार संकुचित कर सकता है। के + मुख्य रूप से कोशिका झिल्ली को विध्रुवण करके और एल-टाइप सीए2 + चैनल27 खोलकर जहाजों को संकुचित करता है। इस बीच यू 46619, टीएक्सए 2 का एक एनालॉग, मुख्य रूप से परिपत्र न्यूक्लियोटाइड-गेटेड चैनलों और टीएक्सए 2 रिसेप्टर्स को सक्रिय करके जहाजों को संकुचित करता है। एपिगेनिन, एक प्रकार का फ्लेवोनोइड, फलों, सब्जियों और पारंपरिक चीनी दवाओं (वीर्य प्लांटागिनिस और चीनी स्टारजैसमाइन) में व्यापक रूप से मौजूद है। परिणामों ने घोषणा की कि एपिजेनिन 60 एमएम के + और 0.3 μM U46619 उत्तेजनाओं के लिए कोरोनरी धमनियों के संकुचन को एकाग्रता-निर्भर रूप से फैला सकता है। प्रयोग के अंत में, अनुकूल गतिविधि के साथ कोरोनरी रिंग को फिर से 60 एमएम के + जोड़कर मान्य किया गया था, जिससे मूल उत्तेजना के समान वाहिकासंकीर्णन हुआ। यद्यपि अध्ययन मुख्य रूप से कोरोनरी धमनियों पर केंद्रित था, तार माइक्रोग्राफ प्रणाली अन्य अत्यंत छोटे ऊतक वाहिकाओं, लसीका और ब्रोंकस पर भी लागू थी। अंत में, इस लेख में मुख्य रूप से चूहे कोरोनरी धमनियों के स्थान और अलगाव का वर्णन किया गया है। इस बीच, इसके तनाव परिवर्तनों को वायर माइक्रोग्राफ सिस्टम प्लेटफॉर्म का उपयोग करके मापा गया, जो सीएडी अन्वेषण के लिए एक सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पद्धति प्रदान करता है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

यह काम सिचुआन प्रांतीय विज्ञान और प्रौद्योगिकी योजना (2022वाईएफएस0438), चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (82104533), चीन पोस्टडॉक्टोरल साइंस फाउंडेशन (2020 एम 683273), और सिचुआन प्रांत के विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग (2021वाईजे0175) की प्रमुख अनुसंधान एवं विकास परियोजना द्वारा समर्थित था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Apigenin Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China 150731
CaCl2 Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China A501330
D-glucose Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China A610219
HEPES Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China S3872
KCl Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China A100395
KH2PO4 Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China A100781
LabChart Professional version 8.3  ADInstruments, Australia —
MgCl2·6H2O Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China A100288
Multi myograph system  Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark 620M
NaCl Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China A100241
NaHCO3 Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China A100865
Steel wires Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark 400447
U46619 Sigma, USA D8174

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चिकित्सा अंक 184 कोरोनरी धमनी शारीरिक स्थिति धमनी पृथक्करण तनाव मल्टी मायोग्राफ प्रणाली
मानकीकृत चूहे कोरोनरी अंगूठी की तैयारी और पोत व्यास के साथ गतिशील तनाव परिवर्तन की वास्तविक समय रिकॉर्डिंग
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Guo, P., An, W., Guo, Y., Sun, Z., Wang, X., Zhang, S. Standardized Rat Coronary Ring Preparation and Real-Time Recording of Dynamic Tension Changes Along Vessel Diameter. J. Vis. Exp. (184), e64121, doi:10.3791/64121 (2022).

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