본 프로토콜은 마우스 왼쪽 폐 이식 모델을 위한 커프 기술을 설명합니다. 이 기술은 수년에 걸쳐 개발되어 왔으며 면역학 연구에서 효과적으로 작동하여 우수한 성과를 거두었습니다.
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본 프로토콜은 마우스 왼쪽 폐 이식 모델을 위한 커프 기술을 설명합니다. 이 기술은 수년에 걸쳐 개발되어 왔으며 면역학 연구에서 효과적으로 작동하여 우수한 성과를 거두었습니다.
지난 10년 동안 저희 실험실은 효율적이고 신뢰할 수 있는 이식 "커프 기술"을 사용하여 혈관화된 마우스 폐 이식 모델을 개발하고 개선하는 데 상당한 진전을 이루었습니다. 이 논문은 현재까지 마우스 폐 이식의 가장 생리학적, 임상적으로 관련성이 높은 모델을 나타내는 혈관화된 정소성 폐 모델에서 정교하고 포괄적인 정교하고 포괄적인 정교성 폐 이식 방법을 설명합니다. 이식 과정은 두 가지 뚜렷한 단계로 구성됩니다: 기증자 적출과 수혜자에 대한 후속 착상. 이 방법은 성공적으로 마스터되었으며 몇 달간의 충분한 교육을 통해 숙련된 시술자가 피부에서 피부로 약 90분 만에 절차를 수행할 수 있습니다. 놀랍게도, 일단 개인이 초기 학습 곡선을 극복하면 수술 전후 기간 동안의 생존율은 거의 100%에 가깝습니다. 마우스 모델은 상업적으로 이용 가능한 여러 형질전환 및 돌연변이 마우스 균주를 사용할 수 있도록 하여 내성 및 거부에 대한 연구를 가능하게 합니다. 또한 이 모델의 고유한 기능으로 인해 종양 생물학 및 면역학을 조사하는 데 유용한 도구가 됩니다.
신부전 및 심부전 환자를 위한 투석 및 심실 보조 장치와 같은 대체 요법이 존재하지만, 폐 이식은 말기 폐 질환을 앓고 있는 환자를 위한 일차적인 치료 옵션으로 남아 있습니다. 이 절차는 폐섬유증1 진단을 받은 개인의 생명을 구하는 유일한 선택으로 작용합니다. 또한, 폐기종과 같은 말기 폐쇄성 폐 질환에 직면한 사람들과 낭포성 섬유증과 같은 화농성 질환을 앓고 있는 사람들의 수명을 연장하기 위해 사용됩니다1.
기술적 개선, 수술 전후 관리 개선, 면역 억제의 발전으로 인해 단기 생존율이 향상되었지만, 폐 이식 후 장기 생존율은 다른 고형 장기에 비해 현저히 열등하다. 폐 이식 이식 환자의 5년 전체 생존율은 50%에 불과하며, 이는 심장, 신장 또는 간 동종이식술을 받은 환자보다 훨씬 낮다1. 우리 팀과 다른 연구진은 생리학적으로 관련된 마우스 모델의 실험적 조작이 다른 고체 또는 세포 동종이식의 장기 생존에 크게 기여했기 때문에 폐 동종이식 거부 반응 및/또는 내성으로 이어지는 경로를 완전히 이해할 수 있는 임상적으로 관련된 생물학적 모델이 부족하기 때문....
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모든 동물 관련 절차는 볼티모어에 있는 메릴랜드 대학교의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)에 따라 수행되었으며 승인을 받았습니다. 수컷, 8-12주(20-25g), BALB/c 마우스를 기증자로 사용하고 C57BL/6 마우스를 수혜자로 사용하는 것이 좋습니다. 동물은 상업적 출처에서 얻었습니다 ( 재료 표 참조).
1. 기관지 및 혈관 커프의 준비
타이밍 : 10 분 (커프 3 개)
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지난 10년 동안 이 모델에 대한 경험에 비추어 볼 때, 기본적인 미세수술 기술을 가진 개인은 일반적으로 약 50마리의 동물에 대한 학습 곡선이 필요합니다. 숙련도가 달성되면 기증자 절차는 일반적으로 15-30분이 소요되며 수혜자 절차는 약 60분이 소요됩니다. 초기 학습 곡선 이후에는 수술 전후 사망률이 매우 낮은 경향이 있습니다.
그림 4A,B에서, Balb/cJ 기증자의 왼쪽 폐를 C57/B6J 투여자에게 생착시킨 후 7일 후의 폐 형태는 동시 자극 봉쇄로 처리된 마우스가 보존된 정상 형태를 나타냈음을 보여줍니다. 대조적으로, 면역이 억제되지 않은 마우스는 거부 반응의 징후를 보였습니다.
그림 4C,D에서, 공동자극 봉쇄-처리된 마우스의 H&E 염색은 .......
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쥐 좌측 폐 이식을 위한 커프 기술은 이식 연구에서 중요한 진전을 나타냅니다10,11. 중요한 단계에는 정확하고 세심한 문턱 구조 해부 및 안전한 문합이 포함됩니다. 실험 요구 사항에 맞게 수정할 수 있지만 학습 곡선이 필요합니다. 우리 그룹은 수용 마우스의 위치를 후방에서 전방으로 수정하여 수용 마우스를 구부려 학습 곡선을 단축함으로써 더 나은 힐럼 보기를 얻었습니다.
제한 사항에는 지정된 체중 범위를 벗어난 마우스에 대한 문제와 미세 수술에 대한 사전 경험이 있는 숙련된 외과의가 필요하다는 것이 포함됩니다. 이식편 무기폐의 위험을 완화하기 위해 생착 후 PEEP(Positive End-호기압)를 구현하고 진통제의 적절한 투여를 보장하는 것이 좋습니다. 정맥 파열 방지를 위해서는 더 작은 커프 크기(22G)를 사용.......
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ASK, AEG 및 DK는 P01 AI116501에서 지원됩니다. ASK 및 EJ는 R01AI145108-01, R01HL166402에서 추가로 지원됩니다. ASK는 I01 BX002299-05에서 지원됩니다. AEG 및 DK는 RO1HL09601에서 추가로 지원됩니다. CL은 R01 HL128492에서 지원됩니다. 이 작업은 Chuck과 Mary Meyers, Richard와 Eibhlin Henggeler에 의해 부분적으로 지원됩니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 10-0 나일론 봉합 | Surgical Specialties Corporation, Reading PA | AK-0106 | |
| 2 Dumont #5 집게 | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 11251-20 | |
| 2 Halsted-Mosquito 클램프 곡선 팁 | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 91309-12 | |
| 6-0 꼰 실크 봉합사 | Henry Schein Inc., Melville, NY, | 100-5597 | |
| 6-0 폴리디옥사논 PDS II 봉합사 및 | Ethicon Inc., Somerville, NJ. | Z117H | |
| 70% 에탄올 | Pharmco Products Inc., Brookfield, CT | 111000140 | |
| Adson 펜치 | 파인 사이언스 툴 Inc., 포스터 시티, CA | 91127-12 | |
| Balb/c 마우스 | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine, USA | 000651 | 8– 12 주; 남성 |
| 양극성 응고제 | Valleylab Inc., Boulder, CO | SurgII-20, E6008/E6008B | |
| C57BL/6 마우스 | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine, USA | 000664 | 8– 12 주; 남성 |
| 클리어 클로르헥시딘 | 히비클렌스, Mö lnlycke Health Care US, LLC, Norcross, GA | 57591 | |
| Electrocautery | Bovie | ||
| Fine vannas 스타일 스프링 가위 | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 15000-03 | |
| Halsey 바늘 홀더 | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 91201-13 | |
| 하버드 장치 마우스 인공호흡기 VentElite | 하버드 장치, 매사추세츠 | 주 홀리스턴55-7040 | 설정 3L O2/minute, 호흡수 130bpm, 0.4cc 일회 호흡량 |
| 헤파린 용액 | Abraxis Pharmaceutical Products, Schaumburg, IL | 504031 | 100 U/mL |
| 주입 등급 일반 식염수 | Hospira Inc., Lake Forest, IL | NDC 0409-4888-20 | |
| 케타민 | VetOne, 보이시, ID | 501072 | 50 mg/kg |
| Konig Mixter 마이크로 소아용 겸자 직각 턱 | Medline, Northfield, IL,MDS1247714 | 엑스트라 파인, 전체 길이 5 1/2"(14cm) | |
| Medline 고온 소작, 파인 팁 포함 | Leica Microsystems, Inc., Allendale, NJ | 10 450 290 | |
| 현미경 Leica M80 F12 플로어 스탠드 | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 15396-00 | |
| Moria 엑스트라 파인 스프링 가위 | Parkland Scientific, Coral Springs, FL | V3000i | |
| Ohio Isoflurane Vaporizer | Vitrolife Inc., Englewood, CO, | 19001 | |
| 페르파덱스 저칼륨 덱스트란 포도당 용액 | Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ | 353025 | 전해질 보존 용액 |
| 폴리스티렌 페트리쉬 | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 00632-11 및 00649-11 | 150 × 25 mm 및 60 × 25 mm |
| 에스& T SuperGrip 집게 직선 및 각도 팁 | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 18200-20 | |
| 작은 동물 회수 시스템 | Puritan Medical Company LLC, Guilford, Maine | 823-WC | 테이퍼드 미니 면 팁 3인치 애플리케이터 |
| 멸균 Q-tips | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD | ||
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| Surflo etfe IV 카테터; 핑크, 20 g x 1.25" | Thermocare, Inc., Incline Village, NV | ||
| ThermoCare 소형 동물 ICU 시스템, | A to Z Vet Supply, 드레스덴, 테네시 | 008679 | 10 mg/kg |
| Xylazine | Aesculap, Inc., 펜실베이니아 주 센터 밸리, | FT480T | |
| Yasargil Clip Applier | Aesculap, Inc., Center Valley, PA, | FT264T | |
| Yasargil 임시 동맥류 클립 | Medline, Northfield, IL, |
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