Vários patógenos bacterianos podem causar infecções do trato respiratório e levar a sérios problemas de saúde se não forem detectados com precisão e tratados prontamente. A detecção rápida e precisa desses patógenos por meio de amplificação isotérmica mediada por loop fornece gerenciamento e controle eficazes de infecções do trato respiratório em ambientes clínicos.
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Artigo de método
Detecção rápida de patógenos bacterianos que causam infecções do trato respiratório inferior por meio de amplificação isotérmica mediada por loop baseada em chip microfluídico
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
As infecções do trato respiratório (ITRs) estão entre os problemas mais comuns em ambientes clínicos. A identificação rápida e precisa de patógenos bacterianos fornecerá diretrizes práticas para o gerenciamento e tratamento de ITRs. Este estudo descreve um método para detectar rapidamente patógenos bacterianos que causam infecções do trato respiratório por meio de amplificação isotérmica mediada por loop multicanal (LAMP). O LAMP é uma ferramenta de diagnóstico sensível e específica que detecta rapidamente ácidos nucléicos bacterianos com alta precisão e confiabilidade. O método proposto oferece uma vantagem significativa sobre os métodos tradicionais de cultura bacteriana, que são demorados e muitas vezes requerem maior sensibilidade para detectar baixos níveis de ácidos nucléicos bacterianos. Este artigo apresenta resultados representativos da infecção por K. pneumoniae e suas múltiplas coinfecções usando LAMP para detectar amostras (escarro, lavado brônquico e lavado alveolar) do trato respiratório inferior. Em resumo, o método LAMP multicanal fornece um meio rápido e eficiente de identificar patógenos bacterianos únicos e múltiplos em amostras clínicas, o que pode ajudar a prevenir a disseminação de patógenos bacterianos e auxiliar no tratamento adequado de ITRs.
Introdução
As infecções do trato respiratório (ITRs) causadas por patógenos bacterianos contribuem principalmente para a morbidade e mortalidade em todo o mundo1. É definida como qualquer sintoma respiratório superior ou inferior acompanhado de febre com duração de 2-3 dias. Embora a infecção respiratória superior seja mais comum do que a infecção respiratória inferior, as infecções crônicas e recorrentes do trato respiratório também são condições clínicas comuns, apresentando grandes riscos aos indivíduos e sobrecarregando significativamente os sistemas de saúde2. Os patógenos bacterianos comuns de ITRs incluem Streptococcus p....
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Protocolo
Todas as amostras para este estudo foram avaliadas e aprovadas pelo Comitê de Revisão de Ética do Hospital Popular da Província de Guangdong (Número de aprovação: KY2023-1114-01). Todos os participantes assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido antes dos experimentos. Os reagentes e equipamentos utilizados para o estudo estão listados na Tabela de Materiais. As abreviaturas usadas no protocolo estão listadas na Tabela Suplementar 1.
1. Coleta de amostras clínicas do trato respiratório inferior
- Coleta de escarro
- Limpe a cavidade oral e os dentes com água limpa, ....
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Resultados
Este experimento emprega tecnologia de amplificação isotérmica, conduzindo reações em um chip de disco microfluídico. A reação ocorre em um analisador de ácido nucleico de chip microfluídico, empregando um método de inserção de corante de fluorescência. A reação isotérmica é realizada a uma temperatura constante de 65 °C e a análise de fluorescência em tempo real é realizada simultaneamente. As amostras positivas sofrem amplificação sob a ação da polimerase com funcionalidade de deslocamento da cadeia, resultando em uma .......
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Discussão
As infecções do trato respiratório são infecções hospitalares prevalentes, impondo graves consequências aos pacientes e aumentando as taxas de mortalidade16. A identificação oportuna e precisa de patógenos potenciais seguidos de antibióticos eficazes é a chave para o sucesso do tratamento e a melhoria do prognóstico, principalmente devido às limitações inerentes aos métodos tradicionaisde cultura 17. Neste estudo, usamos um método baseado em LAMP para determinar infecções ú.......
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Divulgações
Os autores declaram não haver conflito de interesses.
Agradecimentos
Agradecemos muito o apoio financeiro fornecido pela Fundação de Pesquisa Básica e Aplicada de Guangdong (Concessão nº 2022A1515220023) e pela Fundação de Pesquisa para Talentos Avançados do Hospital Popular da Província de Guandong (Concessão nº. KY012023293).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Incubadora de banho (MK2000-2) | ALLSHENG | Fornecer um ambiente de temperatura constante | |
| Cabeça coletora de fluido de lavagem brônquica | TIANPINGHUACHANG | SEDA 20172081375 | Coletando fluido de lavagem broncoalveolar |
| Broncoscópio de fibra óptica | OLYMPUS | SEDA 20153062703 | Um broncoscópio flexível equipado com uma fonte de luz de fibra óptica e câmera, para examinar visualmente as vias aéreas e estruturas dentro dos pulmões. Auxiliar na coleta da lavagem broncoalveolar |
HR1500- B2 | Haier | SEDA 20183541642 | Gabinete de biossegurança |
| NAOH | MACKLIN | S817977 | Liquefazer amostra viscosa do trato respiratório inferior |
| Kit de detecção de ácido nucleico para patógenos do trato respiratório | Capitalbio Technology | SEDA 20173401346 | Teste de infecção |
| Reagente de extração de ácido nucleico | Capitalbio Technology | SEDA 20160034 | For DNA extração |
| RTisochip-W | Capitalbio Technology | SEDA 20193220539 | Amplificação isotérmica mediada por loop |
| THERMO ST16R | Thermo Fisher Scientific | SEDA 20180585 | Centrifugue o líquido residual da parede do tubo. |
| Misturador de vórtice VM-5005 | JOANLAB | Para mistura de reagente |
Referências
- GBD 2016 Lower Respiratory Infections Collaborators. Estimates of the global, regional, and national morbidity, mortality, and aetiologies of lower respiratory infections in 195 countries, 1990-2016: A systematic analysis for the global burden of disease study 2016. Lancet Infect Dis. 18 (11), 1191-1210 (2018).
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Reimpressões e permissões
