Summary
Plantera motstånd mot tuggar insekt växtätare kan testas på flera sätt. Här visar vi hur man sätter upp ett val och en nej-val experimentera med den modell växten backtrav att identifiera motstånd mot skadedjur Pieris rapae.
Abstract
Larver av de små vitkål fjäril är ett skadedjur i jordbruket inställningar. Denna larv art-flöden från växter i kål familjen, vilket inkluderar många grödor som kål, tar broccoli, brysselkål mm Uppfödning av insekter plats på kål växter i växthus. Minst två burar behövs för uppfödning av Pieris rapae. En för larverna och den andra innehåller de vuxna fjärilarna. För att undersöka betydelsen av växt-hormoner och giftiga kemikalier fabrik i motståndet mot denna insekt skadedjur, visar vi två experiment. Först, fastställande av roll jasmonic syra (JA - en växt hormon som ofta anges i motståndskraft mot insekter) i motståndet mot tugga insekten Pieris rapae. Caterpillar tillväxt kan jämföras på vildtyp och muterade växter nedsatt i produktionen av JA. Detta experiment anses vara "No Choice", eftersom larver tvingas livnära sig på en enda anläggning som syntetiserar eller är bristfällig i JA. För det andra visar vi ett experiment som undersöker rollen av glukosinolater, som används som äggläggning (äggläggande) signaler. Här använder vi WT och muterade Arabidopsis försämras i glukosinolat produktion i ett "val" experiment där kvinnliga fjärilar får välja att lägga sina ägg på växter av någon genotyp. Denna video visar experimentuppställning för både analyser samt resultat representant.
Protocol
Inget val Experiment:
- Försiktigt bifoga Arabidopsis växter av intresse i en plastmugg. I det här fallet: Col-0 (WT) och en mutant nedsatt i produktionen av JA. Se till att du begränsa skador på bladen. För att jag använder baksidan av denna pensel.
- Använd en fin pensel för att ta en nyligen kläckts larver från kolonin på kål.
- Placera försiktigt larv på den Arabidopsis växter.
- Vikt larv på dag 4, 7, 10. TIPS: odla dina växter i kort dag förhållanden (8 tim ljus) för att öka vegetativ tillväxt (1 larv kan uppfylla sin fulla livscykel på en anläggning).
Val Experiment:
- Två anläggningar är utvalda, en av varje genotyp. Bäst är att odla växter i samma kruka, för att begränsa andra faktorer, såsom fack effekter etc.
- Placera växterna i en fjäril bur.
- Välj en fertil kvinna. Jag fångar brukar en hona som aktivt lägger ägg i uppfödning kolonin.
- Släpp det kvinnliga i buren med valet av två fabriker i 24 timmar.
Tips 1: För att eliminera en inverkan på lärande, inte återanvända honor för senare val tester.
Tips 2: Man kan bara jämföra växter som har en liknande tillväxt fenotyp. Alternativt kan du montera ett blad från varje genotyp på toppen av en E-kolv och jämföra deras förmåga att attrahera en hona.
Besök de årliga översynerna av växtbiologi för mer information om detta protokoll och anläggning immunitet mot insekter herbivori.
