Summary
Estratégias de micobactérias patogênicas continuam a ser mal compreendido. A taxa de crescimento lento da maioria das espécies, a natureza impenetrável do da parede celular, e os perigos de trabalhar com agentes patogénicos fazer micobactérias difíceis de estudar e são em grande parte responsáveis por nossa má compreensão destes organismos. Neste vídeo iremos demonstrar a técnica da eletroporação, que envolve as células sujeitando a um impulso de alta breve elétrico para permitir a entrada de DNA. É o método mais utilizado para a introdução de DNA em células micobacterianas.
Abstract
Transformação de alta eficiência é uma limitação importante no estudo das micobactérias. O gênero Mycobacterium pode ser difícil de transformar, este é causada principalmente pela parede celular de espessura e cera, mas é agravado pelo fato de que a maioria das técnicas moleculares têm sido desenvolvidos para espécies distantemente relacionadas, tais como Escherichia coli e Bacillus subtilis. Apesar desses obstáculos, plasmídeos micobactérias foram identificadas e transformação DNA de muitas espécies de micobactérias já foram descritos. O método de maior sucesso para a introdução de DNA em micobactérias é eletroporação. Parâmetros que contribuem para a transformação bem-sucedida, que incluem a espécie / variedade, a natureza do DNA de transformação, o marcador selecionável utilizado, o meio de crescimento, e as condições para o pulso eletroporação. Métodos otimizados para a transformação de ambos lenta e produtor-rápida são detalhados aqui. Eficiência de transformação para diferentes espécies de micobactérias e com vários marcadores selecionáveis são relatados.
