Encyclopedia of Experiments: Biology
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- विच्छेदन शुरू करने के लिए, बीच में लार्वा शरीर को समझने के लिए एक जोड़ी संदंश का उपयोग करें, और एक दूसरी जोड़ी लार्वा को आधे हिस्से में फाड़ने के लिए। फिर पीछे की ओर शरीर को पकड़ते समय पूर्वकाल के अंत में मुंह के हुक को चुटकी लें। इसके बाद, शरीर के अंदर मुंह को पकड़े हुए संदंश को धक्का दें। शरीर की दीवार को बाहर के अंदर मोड़ने के लिए पीछे के बल्प्स का उपयोग करें।
इस तैयारी में लार ग्रंथियों और आंत को मस्तिष्क और कल्पनाशील डिस्क को प्रकट करने के लिए आसानी से पहचाना और हटाया जा सकता है एंटेनाल, आंख, पैर, पंख और हॉल्टेरे डिस्क को देखा जा सकता है । एक बार तय होने के बाद, लार्वा तैयारी को बढ़ते माध्यम के साथ एक स्लाइड पर स्थानांतरित करें जहां डिस्क को आगे विच्छेदित किया जा सकता है । उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम देखेंगे कि इस लार्वा तैयारी का उपयोग करके पंख कल्पना डिस्क को कैसे विच्छेदन किया जाए ।
- शुरू करने के लिए, पीबीएस के साथ पेट्री डिश में भटकते तीसरे इंस्टार लार्वा को स्थानांतरित करने के लिए लकड़ी की छड़ी या कुंद संदंश का उपयोग करें। इसके बाद मोज़ेक लार्वा के लिए उपयुक्त फ्लोरोसेंट मार्कर की पहचान करने के लिए उन्हें फ्लोरोसेंट प्रकाश के तहत जीनोटाइप करें। आगे बढ़ने से पहले लार्वा को पीबीएस से धोएं। फिर एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, लार्वा के केंद्र को चुटकी लेने के लिए दो जोड़ी संदंश का उपयोग करें, और शरीर को आधे में फाड़ दें । इसके बाद, शरीर की ओर मुंह को धक्का देते हुए मुंह के हुक को चुटकी लें ताकि शरीर को अंदर की ओर मोड़ दिया जा सके । फिर लार ग्रंथियों और वसा शरीर जैसी अनावश्यक सामग्रियों को हटा दें । लार्वा अब इसके लिए तैयार हैं निर्धारण और एंटीबॉडी धुंधला, जो पाठ प्रोटोकॉल में विस्तृत है।
दागदार ऊतक की तैयारी को दो मिलीलीटर प्लास्टिक ट्रांसफर पिपेट का उपयोग करके माइक्रोस्कोप स्लाइड में स्थानांतरित करें। फिर संदंश का उपयोग करके, एक माइक्रोस्कोप स्लाइड पर बढ़ते माध्यम की बूंदों में व्यक्तिगत लार्वा को स्थानांतरित करें। अब संदंश का उपयोग करके, कल्पनाशील डिस्क को अलग करें। विच्छेदित ऊतकों के अंत को पकड़कर अन्य बल्प्स के साथ मस्तिष्क और आंखों की एंटीना डिस्क को दूर खींचना शुरू करें। उपयोग के लिए दिमाग तैयार रखें।
अब विंग कल्पनीय डिस्क का पता लगाएं। विंग कल्पित डिस्क विच्छेदित ऊतकों के पार्श्व पक्ष में फंस जाती है। इसके बाद, ऊतक को एक सांद्रता से सुरक्षित करें, और पंख डिस्क को धीरे से खरोंच दें। फिर पंख डिस्क के पास दिमाग को कवरलिप द्वारा कुचलने से बचाने के लिए रखें। अब धीरे-धीरे संरचनाओं को कवर स्लिप से ढक दें, और नेल पॉलिश के साथ कवर्लिप को सील करें। 4 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड को स्टोर करें ।
